李宏貴+王春梅

摘要：將40日齡肉雞12只，隨機(jī)分為2組，分別進(jìn)行了靜脈注射、肌肉注射恩諾沙星（10mg/kg）進(jìn)行藥動(dòng)學(xué)研究。血漿樣品經(jīng)甲醇沉淀血漿蛋白，高速離心，用反相高效液相色譜法測(cè)定雞血漿中恩諾沙星的濃度，3P97計(jì)算機(jī)程序處理靜注及肌注的血漿藥物濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)。健康雞靜注給藥的藥時(shí)數(shù)據(jù)適合二室開(kāi)放模型，主要藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)為：t1/2α（0.45±0.56）h；t1/2β（7.02±1.42）h；CLB（0.38±0.10）L/（kg·h）；AUC（23.69±5.56）（mg·h）/L。健康雞肌注給藥的藥時(shí)數(shù)據(jù)適合一級(jí)吸收二室模型，主要藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)為：t1/2α（0.60±0.00）h；t1/2β（8.25±1.73）h；tmax（2.44±0.17）h；Cmax（1.44±0.30）mg/L；AUC（20.74±3.80）（mg·h）/L；F為87.54%。恩諾沙星在健康雞體內(nèi)的吸收迅速，達(dá)到峰值時(shí)間短，消除緩慢。

關(guān)鍵詞：恩諾沙星；雞；生物利用度

中圖分類(lèi)號(hào)：S858.31 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1007-273X（2014）07-0009-03

收稿日期：2014-06-23

作者簡(jiǎn)介：李宏貴（1960-），男，湖北枝江人，畜牧師，主要從事動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督工作。

恩諾沙星（Enrofloxacin），又名乙基環(huán)丙沙星、恩氟沙星，分子式為 C19H22FN3O3，分子質(zhì)量 395.86，外觀為微黃色或淡橙黃色結(jié)晶性粉末；無(wú)臭，味微苦；遇光色漸變?yōu)槌燃t色，化學(xué)結(jié)構(gòu)如圖1所示[1]。

圖 1 恩諾沙星化學(xué)結(jié)構(gòu)式

通過(guò)研究恩諾沙星在雞體內(nèi)生物利用度的研究，利用高效液相色譜法檢測(cè)恩諾沙星通過(guò)不同途徑給藥后在雞體內(nèi)不同時(shí)段的血藥濃度，分析恩諾沙星的藥代動(dòng)力學(xué)和生物利用度，為在臨床上合理用藥，減少雞體內(nèi)恩諾沙星殘留量和食品安全提供合理可靠的依據(jù)。

恩諾沙星的溶解性根據(jù)溶劑組分及pH不同，差別很大。恩諾沙星在三氯甲烷中易溶，在二甲基甲酞胺中略溶，在甲醇中微溶，在水中極微溶解，而在酸性和堿性條件下則易于溶解。試驗(yàn)證明，當(dāng)溶液pH為5.02時(shí)，恩諾沙星的溶解性最好。目前報(bào)道的恩諾沙星含量測(cè)定方法主要有紫外分光光度法和高效液相色譜法兩種。有學(xué)者采用紫外分光光度法對(duì)恩諾沙星口服液進(jìn)行含量測(cè)定，分別使用氯醒酸和四氰乙烯作為受體，與恩諾沙星生成電荷轉(zhuǎn)移絡(luò)合物，再用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行含量測(cè)定。采用兩種受體進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果平均準(zhǔn)確度分別為（99.94±0.96）%和（99.95±0.90）%。研究人員建立了測(cè)定5%恩諾沙星注射液含量的高效液相色譜方法。恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)相關(guān)系數(shù)達(dá)0.9998，恩諾沙星平均回收率為99.94%，平均變異系數(shù)0.26%，方法簡(jiǎn)單、可靠，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好。張小華等建立了測(cè)定五星腸安中恩諾沙星含量的高效液相色譜方法，采用乙睛-5mL檸檬酸-三乙胺（160：840：2，v/v/v）作為流動(dòng)相，流速為1.2 mL/min，柱溫40 ℃，進(jìn)樣量20 μL。恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)相關(guān)系數(shù)達(dá)0.999 9，恩諾沙星平均回收率為100.1%，平均變異系數(shù)為1.1%，方法簡(jiǎn)單、可靠，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好。目前，國(guó)內(nèi)外已對(duì)恩諾沙星在綿羊、山羊、牛、奶牛、耗牛、馬、駱駝、豬、猴、狗、貓、兔、雞、鴕鳥(niǎo)、蛤魚(yú)、歐洲烏賊、卿、眼斑擬石首魚(yú)、鋸緣青蟹等動(dòng)物體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)進(jìn)行了研究。胡功政等研究了恩諾沙星靜注、肌注及內(nèi)服在豬體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)，選用21頭健康雜種豬，隨機(jī)分為3組，按2.5 mg/kg體重分別進(jìn)行靜注、肌注及內(nèi)服給藥，結(jié)果表明，靜注恩諾沙星的藥時(shí)數(shù)據(jù)符合無(wú)吸收二室開(kāi)放模型，肌注和內(nèi)服恩諾沙星的藥時(shí)數(shù)據(jù)分別符合一級(jí)吸收一室模型和一級(jí)吸收二室模型，靜注主要藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)如下：t1/2α為0.48±0.24h，t1/2β為（3.45±0.85）h，CLB為（0.423±0.044）L/（kg·h），AUC為（5.967±0.655）（mg·h）/L；肌注主要要藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)如下：吸收半衰期tl/2ka為（0.26±0.09）h，t1/2ke為（4.06±0.48）h，AUC為（5.483±1.098）（mg.h）/L，生物利用度為（91.9±18.4）%；內(nèi)服主要藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)如下：tl/2ka為（0.23±0.08）h，t1/2α為（1.53±0.73）h，t1/2β為（6.93±1.15）h，AUC為（8.937±1.393）（mg·h）/L，生物利用度為（149.8±23.4）%。21頭豬中僅有3頭能測(cè)到微量的環(huán)丙沙星（<0.10 mg/L）。

1 材料與方法

1.1 藥品和試劑

恩諾沙星原料藥、恩諾沙星對(duì)照品。85%磷酸、醋酸、四丁基溴化氨，均為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?；甲醇、乙腈為進(jìn)口色譜純?cè)噭?/p>

1.2 主要儀器及設(shè)備

分析天平、漩渦混合器、冷凍高速離心機(jī)、Anglient 1200高效液相色譜儀。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物

40日齡肉雞12只，體重約1.5 kg，雌雄各半，隨機(jī)均分為2組，籠養(yǎng)，飼喂全價(jià)不含抗菌藥物日糧。臨床觀察1周，表現(xiàn)健康。試驗(yàn)前12 h起及試驗(yàn)期間禁食，僅自由飲水。

1.4 給藥和血樣采集

給藥劑量均為每千克體重10 mg。雞只側(cè)臥保定，分離翼下靜脈采血。給藥前采1次空白血。靜脈（翼下靜脈）注射給藥后，分別于10、15、30、45 min及1、2、4、6、9、12、24 h采血；肌肉（胸部肌肉）注射給藥后，分別于10、15、30、45 min及1、2、4、6、9、12、24 h采血。每次采靜脈血約1.5 mL，置于含肝素的離心管中，混勻，4 000 r/min離心10 min，分離血漿，-20 ℃冰箱保存。

1.5 血漿中恩諾沙星濃度測(cè)定

準(zhǔn)確吸取0.25 mL血漿樣品于1.7 mL的微量離心管中，加入10 μL 25 mg/L的恩諾沙星溶液作內(nèi)標(biāo)，混勻，于旋渦混合器上混合2 min，再加入0.25 mL甲醇，于旋渦混合器上混合2 min，高速離心10 min（12 000 r/min），吸取上清液50μL作HPLC分析。色譜工作條件：Nova-pak C18（4μm，4.6mm×25 mm）不銹鋼色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-0.0174 mol/L四丁基溴化銨溶液（30∶70），磷酸調(diào)pH為3.0，流速為1.0mL/min，紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)278 nm。在上述條件下，恩諾沙星的色譜峰保留時(shí)間為5.8 min。經(jīng)本方法測(cè)定，恩諾沙星在0.1～5.0 mg/L的濃度范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的線(xiàn)性關(guān)系良好，恩諾沙星的相對(duì)回收率為（88.09±3.52）%，變異系數(shù)3.99%，日間變異系數(shù)8.07%。

1.6 數(shù)據(jù)分析處理

采用3P97藥物代謝動(dòng)力學(xué)軟件自動(dòng)處理靜注及肌注給藥的實(shí)測(cè)血漿恩諾沙星濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)，計(jì)算出有關(guān)藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)，得出各參數(shù)的平均值及標(biāo)準(zhǔn)差。

2 結(jié)果與分析

健康雞單劑量靜注、肌注恩諾沙星后，不同時(shí)間血藥濃度的實(shí)測(cè)值見(jiàn)表1。靜注給藥的藥物動(dòng)力學(xué)最佳數(shù)學(xué)模型為無(wú)吸收開(kāi)放二室模型，肌注給藥的藥物動(dòng)力學(xué)最佳數(shù)學(xué)模型為一級(jí)吸收二室模型，見(jiàn)表2。

3 討論與分析

3.1 靜注和肌注給藥后的藥動(dòng)學(xué)特征

雞靜注恩諾沙星無(wú)菌水溶液后，分布迅速，分布半衰期為（t1/2α）0.45 h；消除半衰期（t1/2β）為 7.02 h，比胡功政報(bào)道的恩諾沙星在粵黃雞的 t1/2β（5.26h）長(zhǎng)。恩諾沙星靜注給藥在雞的體清除率為0.39 L/（kg·h）。

雞肌注恩諾沙星后，分布半衰期（t1/2α）為0.60 h，達(dá)峰時(shí)間（tmax）2.44 h，比粵黃雞經(jīng)口灌服恩諾沙星的達(dá)峰時(shí)間1.77 h延遲；消除半衰期8.25 h，比 有些學(xué)者報(bào)道的雞內(nèi)服恩諾沙星消除半衰期（14.2 h）短，但比豬（6.39 h）口服恩諾沙星的要長(zhǎng)。比較可以看出，恩諾沙星在不同品種的雞體內(nèi)、不同動(dòng)物體內(nèi)，消除速率不同，在哺乳動(dòng)物體內(nèi)消除較快。

3.2 臨床用藥方案

恩諾沙星有明顯的濃度依賴(lài)性，血藥濃度大于8倍最小抑菌濃度MIC時(shí)，可發(fā)揮最佳療效。對(duì)大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、肺炎克雷伯氏桿菌、布氏桿菌、多殺性巴氏桿菌、胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌、豬丹毒桿菌、變形桿菌、化膿性棒狀桿菌、敗血波氏桿菌、金葡菌、支原體、衣原體等均有良好作用，特別是對(duì)支原體有高效，效力較泰樂(lè)菌素、泰妙菌素強(qiáng)。

乳酸恩諾沙星對(duì)主要的引起家禽疾病的病原體的MIC為：沙門(mén)氏菌0.05～0.2 μg/mL、大腸桿菌0.05～0.4 μg/mL、巴斯德氏菌0.06 μg/mL、葡萄球菌 0.2～0.4 μg/mL。試驗(yàn)結(jié)果表明，肌注給藥的恩諾沙星在給藥0.5 h后就在血液中達(dá)到（0.69±0.32）μg/mL的血藥濃度，在3 h達(dá)到峰值濃度（1.39±0.34）μg/mL，并且能在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)維持有效的血藥濃度。

根據(jù)乳酸恩諾沙星的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)、血藥濃度經(jīng)時(shí)變化過(guò)程，并結(jié)合恩諾沙星對(duì)常見(jiàn)敏感菌的MIC值，推薦恩諾沙星可按每千克體重10 mg的劑量肌注給藥，一日一次。

準(zhǔn)確吸取0.25 mL血漿樣品于1.7 mL的微量離心管中，加入10 μL 25 mg/L的恩諾沙星溶液作內(nèi)標(biāo)，混勻，于旋渦混合器上混合2 min，再加入0.25 mL甲醇，于旋渦混合器上混合2 min，高速離心10 min（12 000 r/min），吸取上清液50μL作HPLC分析。色譜工作條件：Nova-pak C18（4μm，4.6mm×25 mm）不銹鋼色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-0.0174 mol/L四丁基溴化銨溶液（30∶70），磷酸調(diào)pH為3.0，流速為1.0mL/min，紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)278 nm。在上述條件下，恩諾沙星的色譜峰保留時(shí)間為5.8 min。經(jīng)本方法測(cè)定，恩諾沙星在0.1～5.0 mg/L的濃度范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的線(xiàn)性關(guān)系良好，恩諾沙星的相對(duì)回收率為（88.09±3.52）%，變異系數(shù)3.99%，日間變異系數(shù)8.07%。

1.6 數(shù)據(jù)分析處理

采用3P97藥物代謝動(dòng)力學(xué)軟件自動(dòng)處理靜注及肌注給藥的實(shí)測(cè)血漿恩諾沙星濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)，計(jì)算出有關(guān)藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)，得出各參數(shù)的平均值及標(biāo)準(zhǔn)差。

2 結(jié)果與分析

健康雞單劑量靜注、肌注恩諾沙星后，不同時(shí)間血藥濃度的實(shí)測(cè)值見(jiàn)表1。靜注給藥的藥物動(dòng)力學(xué)最佳數(shù)學(xué)模型為無(wú)吸收開(kāi)放二室模型，肌注給藥的藥物動(dòng)力學(xué)最佳數(shù)學(xué)模型為一級(jí)吸收二室模型，見(jiàn)表2。

3 討論與分析

3.1 靜注和肌注給藥后的藥動(dòng)學(xué)特征

雞靜注恩諾沙星無(wú)菌水溶液后，分布迅速，分布半衰期為（t1/2α）0.45 h；消除半衰期（t1/2β）為 7.02 h，比胡功政報(bào)道的恩諾沙星在粵黃雞的 t1/2β（5.26h）長(zhǎng)。恩諾沙星靜注給藥在雞的體清除率為0.39 L/（kg·h）。

雞肌注恩諾沙星后，分布半衰期（t1/2α）為0.60 h，達(dá)峰時(shí)間（tmax）2.44 h，比粵黃雞經(jīng)口灌服恩諾沙星的達(dá)峰時(shí)間1.77 h延遲；消除半衰期8.25 h，比 有些學(xué)者報(bào)道的雞內(nèi)服恩諾沙星消除半衰期（14.2 h）短，但比豬（6.39 h）口服恩諾沙星的要長(zhǎng)。比較可以看出，恩諾沙星在不同品種的雞體內(nèi)、不同動(dòng)物體內(nèi)，消除速率不同，在哺乳動(dòng)物體內(nèi)消除較快。

3.2 臨床用藥方案

恩諾沙星有明顯的濃度依賴(lài)性，血藥濃度大于8倍最小抑菌濃度MIC時(shí)，可發(fā)揮最佳療效。對(duì)大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、肺炎克雷伯氏桿菌、布氏桿菌、多殺性巴氏桿菌、胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌、豬丹毒桿菌、變形桿菌、化膿性棒狀桿菌、敗血波氏桿菌、金葡菌、支原體、衣原體等均有良好作用，特別是對(duì)支原體有高效，效力較泰樂(lè)菌素、泰妙菌素強(qiáng)。

乳酸恩諾沙星對(duì)主要的引起家禽疾病的病原體的MIC為：沙門(mén)氏菌0.05～0.2 μg/mL、大腸桿菌0.05～0.4 μg/mL、巴斯德氏菌0.06 μg/mL、葡萄球菌 0.2～0.4 μg/mL。試驗(yàn)結(jié)果表明，肌注給藥的恩諾沙星在給藥0.5 h后就在血液中達(dá)到（0.69±0.32）μg/mL的血藥濃度，在3 h達(dá)到峰值濃度（1.39±0.34）μg/mL，并且能在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)維持有效的血藥濃度。

根據(jù)乳酸恩諾沙星的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)、血藥濃度經(jīng)時(shí)變化過(guò)程，并結(jié)合恩諾沙星對(duì)常見(jiàn)敏感菌的MIC值，推薦恩諾沙星可按每千克體重10 mg的劑量肌注給藥，一日一次。

準(zhǔn)確吸取0.25 mL血漿樣品于1.7 mL的微量離心管中，加入10 μL 25 mg/L的恩諾沙星溶液作內(nèi)標(biāo)，混勻，于旋渦混合器上混合2 min，再加入0.25 mL甲醇，于旋渦混合器上混合2 min，高速離心10 min（12 000 r/min），吸取上清液50μL作HPLC分析。色譜工作條件：Nova-pak C18（4μm，4.6mm×25 mm）不銹鋼色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-0.0174 mol/L四丁基溴化銨溶液（30∶70），磷酸調(diào)pH為3.0，流速為1.0mL/min，紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)278 nm。在上述條件下，恩諾沙星的色譜峰保留時(shí)間為5.8 min。經(jīng)本方法測(cè)定，恩諾沙星在0.1～5.0 mg/L的濃度范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的線(xiàn)性關(guān)系良好，恩諾沙星的相對(duì)回收率為（88.09±3.52）%，變異系數(shù)3.99%，日間變異系數(shù)8.07%。

1.6 數(shù)據(jù)分析處理

采用3P97藥物代謝動(dòng)力學(xué)軟件自動(dòng)處理靜注及肌注給藥的實(shí)測(cè)血漿恩諾沙星濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)，計(jì)算出有關(guān)藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)，得出各參數(shù)的平均值及標(biāo)準(zhǔn)差。

2 結(jié)果與分析

健康雞單劑量靜注、肌注恩諾沙星后，不同時(shí)間血藥濃度的實(shí)測(cè)值見(jiàn)表1。靜注給藥的藥物動(dòng)力學(xué)最佳數(shù)學(xué)模型為無(wú)吸收開(kāi)放二室模型，肌注給藥的藥物動(dòng)力學(xué)最佳數(shù)學(xué)模型為一級(jí)吸收二室模型，見(jiàn)表2。

3 討論與分析

3.1 靜注和肌注給藥后的藥動(dòng)學(xué)特征

雞靜注恩諾沙星無(wú)菌水溶液后，分布迅速，分布半衰期為（t1/2α）0.45 h；消除半衰期（t1/2β）為 7.02 h，比胡功政報(bào)道的恩諾沙星在粵黃雞的 t1/2β（5.26h）長(zhǎng)。恩諾沙星靜注給藥在雞的體清除率為0.39 L/（kg·h）。

雞肌注恩諾沙星后，分布半衰期（t1/2α）為0.60 h，達(dá)峰時(shí)間（tmax）2.44 h，比粵黃雞經(jīng)口灌服恩諾沙星的達(dá)峰時(shí)間1.77 h延遲；消除半衰期8.25 h，比 有些學(xué)者報(bào)道的雞內(nèi)服恩諾沙星消除半衰期（14.2 h）短，但比豬（6.39 h）口服恩諾沙星的要長(zhǎng)。比較可以看出，恩諾沙星在不同品種的雞體內(nèi)、不同動(dòng)物體內(nèi)，消除速率不同，在哺乳動(dòng)物體內(nèi)消除較快。

3.2 臨床用藥方案

恩諾沙星有明顯的濃度依賴(lài)性，血藥濃度大于8倍最小抑菌濃度MIC時(shí)，可發(fā)揮最佳療效。對(duì)大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、肺炎克雷伯氏桿菌、布氏桿菌、多殺性巴氏桿菌、胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌、豬丹毒桿菌、變形桿菌、化膿性棒狀桿菌、敗血波氏桿菌、金葡菌、支原體、衣原體等均有良好作用，特別是對(duì)支原體有高效，效力較泰樂(lè)菌素、泰妙菌素強(qiáng)。

乳酸恩諾沙星對(duì)主要的引起家禽疾病的病原體的MIC為：沙門(mén)氏菌0.05～0.2 μg/mL、大腸桿菌0.05～0.4 μg/mL、巴斯德氏菌0.06 μg/mL、葡萄球菌 0.2～0.4 μg/mL。試驗(yàn)結(jié)果表明，肌注給藥的恩諾沙星在給藥0.5 h后就在血液中達(dá)到（0.69±0.32）μg/mL的血藥濃度，在3 h達(dá)到峰值濃度（1.39±0.34）μg/mL，并且能在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)維持有效的血藥濃度。

根據(jù)乳酸恩諾沙星的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)、血藥濃度經(jīng)時(shí)變化過(guò)程，并結(jié)合恩諾沙星對(duì)常見(jiàn)敏感菌的MIC值，推薦恩諾沙星可按每千克體重10 mg的劑量肌注給藥，一日一次。