丁小瑩，郭長青

鄭州大學第一附屬醫(yī)院消化內科 鄭州 450052

食管癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，居腫瘤死亡的第4位，其發(fā)生發(fā)展是一個多基因、多步驟相互作用的復雜過程。SASH1基因是編碼銜接蛋白的 SLY基因家族中的一員[1]，FBXO32屬于FBX蛋白家族，二者均為新的候選抑癌基因，參與了許多惡性腫瘤的生物學行為，在結腸癌、胃癌、肺癌、黑色素瘤、神經膠質瘤等多種腫瘤組織中的表達均下降[2-6]。作者檢測了食管鱗狀細胞癌(esophageal squamous cell carcinoma，ESCC)組織及正常食管黏膜組織中SASH1和FBXO32蛋白的表達，探討二者與ESCC發(fā)生發(fā)展的關系及臨床意義。

1 材料與方法

1.1 標本來源 選用鄭州大學第一附屬醫(yī)院2012年2月至2013年3月胸外科手術中切除的食管癌標本76例及相應的正常食管黏膜組織(距癌組織邊緣的距離＞5 cm)，患者術前均未接受放化療或免疫治療，術后均經病理證實為ESCC。76例ESCC患者中男57例，女19例;年齡43～74歲;有淋巴結轉移29例，無淋巴結轉移47例;病理學分級:低分化25例，中分化33例，高分化18例;按照國際抗癌聯(lián)盟(UICC)標準進行TNM分期:Ⅰ、Ⅱ期45例，Ⅲ、Ⅳ期31例。

1.2 SASH1和FBXO32蛋白的免疫組化染色 所有標本均經甲醛固定，石蠟包埋，連續(xù)切片。SASH1、FBXO32兔抗人多克隆抗體均購自北京博奧森生物技術有限公司，使用時分別按1∶300和1∶200稀釋;免疫組化SP試劑盒及DAB顯色液均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。采用SP三步法，按照試劑盒說明進行操作，DAB顯色，蘇木素復染，鹽酸乙醇分色。以PBS取代一抗作為陰性對照。

1.3 結果判定 由兩位病理醫(yī)師雙盲閱片，SASH1陽性判定標準為細胞核中出現明顯的棕黃色顆粒，FBXO32陽性判定標準為細胞質內出現棕黃色或褐色顆粒。200倍視野下每張切片選10個代表區(qū)，計數陽性細胞，計算陽性細胞百分比。陽性程度的判斷標準如下。①按陽性細胞百分比計分:0為0分，＜10%為1分，10% ～為2分，51% ～為 3分，≥75%為4分。②按染色強度計分:無染色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。兩項積分相乘，＜3分為陰性，≥3分為陽性。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用 SPSS 11.0處理數據。應用配對χ2檢驗比較ESCC與正常食管黏膜組織中SASH1和FBXO32蛋白陽性表達率的差異，應用χ2檢驗比較不同人口學特征及臨床病理因素的ESCC患者SASH1和FBXO32蛋白陽性表達率的差異，應用列聯(lián)系數評估ESCC組織中SASH1與FBXO32蛋白表達的關聯(lián)性。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 ESCC和正常食管黏膜組織中 SASH1和FBXO32蛋白的表達 見圖1，表1、2。由表1、2知，SASH1蛋白在ESCC組織中的陽性表達率為35.5%，低于正常食管黏膜組織(53.9%);FBXO32蛋白在ESCC組織中的陽性表達率為36.8%，低于正常食管黏膜組織(55.3%)。

圖1 ESCC組織(A)及正常食管黏膜組織(B)中SASH1和FBXO32蛋白的表達(SP，×200)

表1 ESCC及正常食管黏膜組織中SASH1蛋白的表達 例

表2 ESCC及正常食管黏膜組織中FBXO32蛋白的表達 例

2.2 ESCC組織中SASH1和FBXO32蛋白的表達與患者一般人口學特征及臨床病理因素的關系ESCC組織中SASH1及FBXO32蛋白的表達與ESCC的分化程度、TNM分期及淋巴結轉移有關，與性別、年齡無關，見表3。

表3 ESCC組織中SASH1和FBXO32蛋白的表達與患者一般人口學特征及臨床病理因素的關系 陽性例數(%)

2.3 ESCC組織中SASH1和FBXO32蛋白表達的關聯(lián)性分析 見表4。ESCC組織中SASH1和FBXO32蛋白的表達呈正關聯(lián)(rP=0.417，P＜0.001)。

表4 ESCC組織中SASH1和FBXO32蛋白表達的關聯(lián)性 例

3 討論

SASH1基因是近年來發(fā)現的候選抑癌基因，除淋巴樣干細胞外，廣泛地表達于多種正常組織。SASH1蛋白包含1個SH3和2個SAM結構域，通過這兩種作用多樣化的結構域在細胞內信號轉導通路中發(fā)揮重要作用[7-8]。Zeller等[9]研究證明其在多種腫瘤組織中表達下調。有證據[6，10]證明 SASH1基因可以影響腫瘤細胞的成瘤能力及通過核質穿梭而影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展。Martini等[10]研究表明SASH1蛋白能夠抑制細胞轉移。以上研究表明SASH1基因與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切關系。該研究表明SASH1在ESCC組織中低表達，而在正常食管黏膜組織中高表達，且SASH1蛋白與TNM分期、分化程度及淋巴結轉移有關，而與性別、年齡無關。說明SASH1在ESCC的發(fā)生發(fā)展及淋巴結轉移中發(fā)揮重要作用，與上述研究相符。

FBXO32蛋白是SCF泛素蛋白連接酶的重要組成部分，參與多種細胞過程，如信號轉導、細胞周期進程和細胞泛素化等[11]。有研究[12]發(fā)現 FBXO32作為凋亡調節(jié)基因可通過前存活信號進行負性調節(jié)。此外，體內外研究[13-15]表明，FBXO32通過TGF-β/SMAD4信號通路可增加腫瘤細胞凋亡，從而抑制腫瘤生長，其表達下調可加速惡性腫瘤的增殖、浸潤、轉移及廣泛播種等生物學行為。該研究顯示FBXO32在ESCC組織中低表達，且與腫瘤TNM分期、分化程度及淋巴結轉移有關，而與性別、年齡無關。

此外，該研究結果還顯示，ESCC組織中SASH1與FBXO32蛋白的表達呈正關聯(lián)，表明在ESCC的發(fā)生發(fā)展中SASH1與FBXO32具有協(xié)同作用。

綜上所述，ESCC中SASH1與FBXO32蛋白的表達降低，且均與腫瘤的TNM分期、分化程度及淋巴結轉移有關，提示二者在ESCC的發(fā)生發(fā)展中具有協(xié)同作用;二者有望成為ESCC診斷、基因治療的新靶點以及預后判斷的重要指標。

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