潘自紅，李青彬，王亞波，李慧芳，邱 曉，孟煥新

（平頂山學(xué)院 化學(xué)化工學(xué)院－環(huán)境化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河南 平頂山467000）

氧氟沙星，（±）－9－氟－2，3－二氫－3－甲基－10－（4－甲基－1－哌嗪基）－7－氧代－7H－吡啶并［1，2，3－de］－4－苯并噁嗪－6－羧酸和諾氟沙星，1－乙基－6－氟－1，4－二氫－4－氧代－7－（1－哌嗪基）－3－喹啉羧酸，是兩個(gè)重要的合成氟喹諾酮類（FQ）衍生物，均具有廣譜抗菌作用，尤其對需氧革蘭陰性桿菌的抗菌活性較高，因而在臨床分析上應(yīng)用較為廣泛.

目前，已報(bào)道的氧氟沙星和諾氟沙星的測定方法主要有高效液相色譜法［1－2］，電化學(xué)分析法［3－6］、流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光分析法［7－8］、毛細(xì)管電泳分析法［9－10］、熒光光譜分析法［11－12］和散射光譜分析法［13－14］等.喹諾酮類藥物分子具有大的共軛體系，且含有相鄰的羧基和酮基，易與金屬離子形成絡(luò)合物［15］，以及氟喹諾酮藥物氧氟沙星和諾氟沙星可與鐵（III）反應(yīng)生成橙黃色絡(luò)合物，引起反應(yīng)體系吸收光譜的變化，由此作者建立了分光光度法測定藥物制劑中的氧氟沙星和諾氟沙星含量的新方法.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器及試劑

UV－2550型雙光束紫外可見分光光度計(jì)（日本島津分光公司）；722s型可見分光光度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；CS－501型超級恒溫儀（重慶實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠）.

氧氟沙星和諾氟沙星（中國生物制品研究所，北京）：用3%乙醇溶解，配成400mg／L標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（4℃時(shí)避光保存），分析時(shí)用水逐級稀釋至所需濃度.硫酸鐵銨溶液（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）：準(zhǔn)確稱取6.027 5g硫酸鐵銨溶于1.0mL 18.0mol／L的濃硫酸中并稀釋至500mL，即得到0.025mol／L Fe（III）的0.036mol／L的硫酸溶液.硫酸溶液：取5.0mL 18.0mol／L濃硫酸稀釋至500mL，配成濃度為0.18 mol／L的硫酸溶液.用時(shí)稀釋為所需濃度的工作液.所用試劑均為分析純.

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

準(zhǔn)確移取7.00mL 0.025mol／L硫酸鐵銨溶液加入25mL容量瓶中，然后依次加入2.00mL 0.18mol／L硫酸溶液，適量的氧氟沙星或諾氟沙星標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣品溶液，用水稀釋至刻度線，搖勻，用1cm比色皿，以試劑空白溶液為參比液，在436nm處測其吸光度.

2 結(jié)果與討論

2.1 吸收光譜

按分析步驟配制溶液，測試其吸收光譜，結(jié)果見圖1.硫酸鐵銨溶液在430～600nm范圍內(nèi)沒有吸收，但微量氧氟沙星或諾氟沙星與硫酸鐵銨絡(luò)合成穩(wěn)定的橙黃色配合物，其最大吸收波長位于436nm.為消除試劑干擾，以空白試劑為參比，于436nm處測量生成物的吸光度.

圖1 體系的吸收光譜Fig.1 Absorption spectra of the system

2.2 條件優(yōu)化

2.2.1 反應(yīng)時(shí)間及體系的穩(wěn)定性

考察了反應(yīng)時(shí)間對兩種藥物測定體系吸光度的影響.結(jié)果表明，在室溫及最佳反應(yīng)條件下，吸光度在所有溶液完全混合后即可達(dá)到穩(wěn)定，且至少能穩(wěn)定30min以上，滿足定量測定的要求.

2.2.2 鐵（III）溶液用量的影響

考察了鐵（III）溶液用量對體系吸光度的影響.實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，隨著鐵（III）溶液用量的增加，生成絡(luò)合物的量也增加，反應(yīng)體系的吸光度也隨之增大.當(dāng)鐵（III）溶液用量大于7.00mL時(shí)，吸光度最大且基本恒定.故實(shí)驗(yàn)確定0.025mol／L硫酸鐵銨的用量為7.00mL.

2.2.3 硫酸用量的影響

在鐵（III）溶液用量最優(yōu)化的條件下，考察了加入不同量的硫酸對體系吸光度的影響，發(fā)現(xiàn)硫酸濃度對方法的靈敏度幾乎沒有影響.為穩(wěn)定體系的酸度，實(shí)驗(yàn)確定0.18mol／L硫酸的用量為2.00mL.

2.2.4 溫度的影響

考察了溫度對體系吸光度的影響.按照實(shí)驗(yàn)方法配制成待測溶液，分別放置在室溫（20℃）、30、40、50、60、70、80℃恒溫水槽中10min，然后冷卻至室溫測定.實(shí)驗(yàn)表明，不同溫度下，短時(shí)間加熱對體系吸光度影響不明顯，故實(shí)驗(yàn)選擇在室溫條件下操作.

2.3 干擾研究

分析了幾種常見離子對64.0mg／L的氧氟沙星和諾氟沙星測定的干擾情況.結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)控制測量誤差在±5%左右，在氧氟沙星測定時(shí)，共存物質(zhì)允許存在的濃度（mg／L）為：Cu2＋（1 536），Al3＋（1 080），Mg2＋、Na＋（380），蔗糖（2 738），Zn2＋（896），甘氨酸（600），K＋（650），Mn2＋（440）；在諾氟沙星測定時(shí)，共存物質(zhì)允許存在的濃度（mg／L）為：Cu2＋（1 024），Al3＋（432），Mg2＋（288），Na＋（920），蔗糖（2 738），Zn2＋（1 040）甘氨酸（600），K＋（1 560），Mn2＋（440），Li＋（280）.由此可見，共存物質(zhì)均允許以較高的濃度存在.

2.4 工作曲線、檢出限和精密度

配置藥物的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別測定其吸光度，然后以吸光度為縱坐標(biāo)，以藥物的濃度為橫坐標(biāo)作圖.結(jié)果表明，氧氟沙星和諾氟沙星的濃度分別在2.24～192mg／L和8.0～248mg／L范圍內(nèi)與體系的吸光度呈良好的線性關(guān)系，其線性回歸方程分別為：氧氟沙星，A＝0.009 06＋0.005 7c（c，mg／L，r＝0.999 3）；諾氟沙星，A＝0.001 23＋0.003 04c（c，mg／L，r＝0.999 8），方法的檢出限分別為0.41和0.76mg／L.對濃度為64.0mg／L的氧氟沙星或諾氟沙星平行測定11次，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.6%和0.8%.

2.5 絡(luò)合物組成測定

配置5.0×10－4mol／L的Fe（III）溶液、氧氟沙星溶液及諾氟沙星溶液，固定Fe（III）的用量，應(yīng)用飽和法及保持鐵（III）和藥物溶液的總體積為10.00mL，采用等摩爾連續(xù)變換法分別測定了氧氟沙星或諾氟沙星和鐵（III）的絡(luò)合物的組成比.兩種方法的測定的藥物與Fe（III）的絡(luò)合比均為2∶1.

2.6 樣品分析

為了評價(jià)該分析方法的可靠程度及實(shí)際應(yīng)用價(jià)值，按照實(shí)驗(yàn)步驟分別測定了市售藥物制劑中氧氟沙星和諾氟沙星的含量.分別取不同廠家的氧氟沙星或諾氟沙星的膠囊或片劑適量，準(zhǔn)確稱取相當(dāng)于主成分200 mg，用3%乙醇定容于500mL容量瓶中.過濾，取適量中段濾液，按實(shí)驗(yàn)方法和藥典法［16］進(jìn)行測定，同時(shí)進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果列于表1中.由表1可見，實(shí)驗(yàn)結(jié)果令人滿意.

表1 藥物制劑中氧氟沙星和諾氟沙星含量及回收率測定（n＝6）Table 1 The determination of ascorbic acid in pharmaceutical samples

3 結(jié)論

利用酸性介質(zhì)中，氧氟沙星和諾氟沙星能與三價(jià)鐵離子形成橙黃色配合物的特性，建立了測定藥物中氧氟沙星和諾氟沙星的新方法.考察了分光光度法測定藥物的影響因素及適宜的反應(yīng)條件，測定了藥物制劑中相應(yīng)藥物的含量.所建立的方法靈敏度高、儀器設(shè)備簡單、操作簡便快速，可用于實(shí)際樣品的測定，為其進(jìn)一步在臨床方面的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ).

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