王萍萍 黃秀清 林勇 劉黎星

【摘 要】目的：構(gòu)建莆田市漢族人群妊娠高血壓疾病患者及健康對(duì)照孕婦的基因組DNA標(biāo)本庫(kù)及臨床生化資料信息數(shù)據(jù)庫(kù)，為臨床妊娠高血壓疾病的遺傳易感性研究及防治提供良好的基礎(chǔ)及研究平臺(tái)。方法：收集妊娠高血壓疾病患者153例及健康孕婦168例外周靜脈血，設(shè)計(jì)科學(xué)而高效的實(shí)驗(yàn)流程，提取基因組DNA，，并對(duì)臨床生化資料等信息數(shù)據(jù)進(jìn)行采集、整理、保存，構(gòu)建妊娠高血壓疾病的基因組DNA及臨床綜合信息數(shù)據(jù)庫(kù)。結(jié)果：完成福建莆田地區(qū)漢族女性妊娠高血壓疾病患者和健康孕婦外周靜脈血基因組DNA的提取，并對(duì)其臨床生化資料信息錄入計(jì)算機(jī)歸檔管理，可隨時(shí)調(diào)用和查找。結(jié)論：福建莆田地區(qū)漢族女性妊娠高血壓疾病及健康對(duì)照基因組DNA標(biāo)本資源庫(kù)的初步建立為今后相關(guān)的妊娠高血壓疾病的研究搭建服務(wù)平臺(tái)。

【關(guān)鍵詞】妊娠高血壓疾病；DNA標(biāo)本庫(kù)；意義

【中圖分類號(hào)】R246 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1004-7484（2014）06-3480-02

妊娠高血壓疾病是妊娠期特有的疾病。發(fā)病率我國(guó)9.4%～10.4%，國(guó)外7%～12%。本病命名強(qiáng)調(diào)生育年齡婦女發(fā)生高血壓、蛋白癥狀與妊娠之間的因果關(guān)系。[1]。而建立153例妊娠高血壓子癇前期組和168例正常妊娠組的基因DNA標(biāo)本和臨床數(shù)據(jù)等綜合信息，對(duì)妊娠高血壓疾病基礎(chǔ)研究和臨床研究將具有重要價(jià)值，DNA標(biāo)本庫(kù)的建立同其他標(biāo)本一樣涉及標(biāo)本的采集、處理、保存和使用以及相關(guān)信息的儲(chǔ)存、管理[2]。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象：研究對(duì)象：本研究患者均為漢族人。遵循知情同意的原則，選取2012年至2013年福建莆田學(xué)院附屬醫(yī)院收治的妊娠高血壓疾病子癇前期患者153例（病例組），隨機(jī)選擇同期門診產(chǎn)檢及住院分娩的正常孕婦168例（對(duì)照組）作為健康對(duì)照，各組年齡、孕周及孕產(chǎn)次比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。兩組均排除原發(fā)性高血壓、肝腎疾病及其他內(nèi)外科并發(fā)癥。

1.2 主要試劑：血液基因組DNA提取試劑盒（北京天根生物科技有限公司）、瓊脂糖、DNA green、DNA Maker、無(wú)水乙醇等。

1.4 血液標(biāo)本的收集

取患者和正常組孕婦外周靜脈血3mI，1ml酸性枸櫞酸葡萄糖ACD抗凝，保存在-20℃冰箱中備用。

1.5 血液DNA的提取

采用天根全血基因組DNA提取試劑盒提取外周靜脈血基因組DNA.

1.6 DNA濃度及純度檢測(cè)

洗脫后的DNA溶液2.0ul，利用紫外分光光度計(jì)測(cè)得的OD值和觀察紫外吸收峰評(píng)價(jià)提取DNA的濃度和純度。

1.7 DNA標(biāo)本的凍存

對(duì)于符合要求的DNA，采用小容量的聚丙烯管分裝保存，避免使用時(shí)反復(fù)凍融使DNA片段變小。做好試管編號(hào)和貼標(biāo)簽分裝后直接放入-80℃冰箱凍存，并登記數(shù)據(jù)，錄入電腦。

2 結(jié)果

2.1血液DNA標(biāo)本的收集和信息的錄入

已完成妊娠高血壓疾病子癇組和健康孕婦外周靜脈血基因組DNA的提取并凍存。采用Excel 軟件，對(duì)所收集標(biāo)本的流行病學(xué)及臨床資料信息錄入計(jì)算機(jī)歸檔管理。

2.1.1 錄入標(biāo)本信息，冰箱號(hào)、原裝號(hào)、分裝號(hào)、標(biāo)本量、采集日期、凍存日期等。

2.1.2 錄入病歷信息， 如患者姓名、性別、年齡、籍貫、民族、病例號(hào)、臨床診斷、主要生化指標(biāo)、治療等。

2.1.3標(biāo)本的應(yīng)用記錄：使用日期、使用編號(hào)、使用量、使用人。

2.2如圖一，外周血基因組DNA瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果

結(jié)果顯示外周血基因組DNA條帶清晰，無(wú)雜帶及拖尾現(xiàn)象，說(shuō)明成功提取DNA，可用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

3 討論

妊娠高血壓疾病是導(dǎo)致胎兒早產(chǎn)、胎死宮內(nèi)以及胎盤早期剝離、孕產(chǎn)婦和圍產(chǎn)兒病死率及死亡率升高的主要原因，病因至今不明，病因主要有4種學(xué)說(shuō)：免疫學(xué)說(shuō)、胎盤或滋養(yǎng)細(xì)胞缺血學(xué)說(shuō)、氧化應(yīng)激學(xué)說(shuō)、遺傳學(xué)說(shuō)[3]。妊娠高血壓疾病發(fā)生的高危因素除受到低齡或高齡初產(chǎn)、營(yíng)養(yǎng)缺乏、多胎妊娠和曾有原發(fā)性高血壓、腎炎、糖尿病病史等環(huán)境因素影響外，還具有明顯的遺傳傾向[4]。

妊娠高血壓疾病目前沒(méi)有有效的早期診斷方法，不能做到早期的防治，只能根據(jù)患者的臨床癥狀和結(jié)合臨床生化指標(biāo)來(lái)判斷。近年來(lái)，隨著生物醫(yī)學(xué)研究的深入， 臨床醫(yī)學(xué)、生物化學(xué)、免疫學(xué)、酶學(xué)、基因組學(xué)和分子生物學(xué)等學(xué)科技術(shù)的高速發(fā)展。每一份DNA標(biāo)本都可視作一個(gè)小型的遺傳信息平臺(tái)，經(jīng)過(guò)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范的保存并且擁有完整病例信息的標(biāo)本不僅是現(xiàn)在研究計(jì)劃的資源保障，而且在未來(lái)基礎(chǔ)和臨床研究中可繼續(xù)扮演信息資源庫(kù)的角色[5]。為此，通過(guò)收集妊娠高血壓疾病患者的外周靜脈血，提取血液基因組DNA進(jìn)行深入研究，有利于臨床上早日對(duì)妊娠高血壓疾病早期做出安全準(zhǔn)確的診斷。妊娠高血壓疾病基因組DNA標(biāo)本庫(kù)，是研究妊娠高血壓疾病的基礎(chǔ)，可適用于酶切、PCR、文庫(kù)構(gòu)建、Southern雜交等重大科研實(shí)驗(yàn)，為科學(xué)研究提供研究素材和臨床研究提供標(biāo)本來(lái)源。標(biāo)本信息的記錄，可以方便在系統(tǒng)上查詢標(biāo)本的臨床詳細(xì)信息，高效的利用標(biāo)本資源，使研究人員使用時(shí)發(fā)現(xiàn)新的診斷標(biāo)記和新靶點(diǎn)的可能[6]。建立妊娠高血壓疾病基因組DNA標(biāo)本資源庫(kù)， 為今后相關(guān)的妊娠高血壓疾病的研究搭建服務(wù)平臺(tái)。因此，充分合理利用標(biāo)本庫(kù)的巨大資源優(yōu)勢(shì)， 協(xié)助深入開(kāi)展妊娠高血壓疾病的基礎(chǔ)研究， 對(duì)保障母嬰健康、降低患病率及孕產(chǎn)婦死亡率具有重要意義。

參考文獻(xiàn)

[1] 樂(lè) 杰主編. 妊娠期高血壓疾病. 婦產(chǎn)科學(xué)[M]. 第7版. 北京： 人民衛(wèi)生出版社， 2012： 92-99.

[2] 楊春，葛蓮英，賀海平等.腫瘤血清標(biāo)本庫(kù)的建立及意義[J].中國(guó)癌癥防治雜志，2009，1（4）：307-309.

[3] 林其德.妊娠高血壓綜合征病因?qū)W研究進(jìn)展與展望[J].中華婦產(chǎn)科雜志，2003，38（8）：471-473.

[4] 鄭四維.妊娠高血壓疾病的相關(guān)因素臨床分析[J]. 中國(guó)醫(yī)藥指南，2010，8（11）：79-80.

[5] 從憲玲，孫然，王涵，孔祥波，張學(xué)文.國(guó)內(nèi)外組織標(biāo)本庫(kù)發(fā)展的現(xiàn)狀及啟示[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2010，14（1）：148-150.

[6] 楊宗澤，吳正谷，譚維維等. 腫瘤組織標(biāo)本庫(kù)的創(chuàng)建與管理 [ J].華西醫(yī)學(xué)， 2012， 27（5）767-770.