王宜磊 朱陶 孟國(guó)慶 張海麗 袁琴琴 王傳寶 諶志偉

摘要 [目的]研究?jī)?yōu)化啤酒酵母海藻糖提取工藝。[方法] 以啤酒廢酵母為原料，使用各種不同的方法（微波破壁法、高溫處理破壁、煮沸提取法）提取海藻糖，以海藻糖得率以及工藝的效益性為指標(biāo)考察料液比、浸提時(shí)間、浸提溫度、輔助因素處理等單因素對(duì)海藻糖提取的影響，從而確定從廢酵母中提取海藻糖的較佳工藝。[結(jié)果] 試驗(yàn)得出，微波破碎法耗時(shí)少，但不易工業(yè)化且提取率不高，比較發(fā)現(xiàn)煮沸提取的工藝方法相對(duì)最佳。以水作提取劑從廢酵母中提取海藻糖的最佳條件是：煮沸80 min，海藻糖提取率為8.147 mg/g干酵母。[結(jié)論]研究可為海藻糖的提取及進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供參考。

關(guān)鍵詞 啤酒廢酵母;海藻糖; 蒽銅-濃硫酸比色法; 3，5-二硝基水楊酸比色法

中圖分類(lèi)號(hào) S609.9 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2014）33-11884-04

Study on Beer Yeast Trehalose Extraction Technology

WANG Yi-lei， ZHU Tao， MENG Guo-qing et al

（Department of Life Science， Heze University， Heze， Shandong 274015）

Abstract [Objective] To optimize the technique for extracting trehalose from beer yeast. [Method] Using beer waste yeast as material， various methods（microwave， high temperature， boiling）were adopted to extract trehalose. With trehalose yield and the benefits of technology as indicators， effects of solid-liquid ratio， soaking time， temperature， auxiliary factors on trehalose extraction were investigated， the optimal technique was obtained. [Result] Comparison found that boiling extraction technology is the best relatively. The extraction rate of trehalose was 8.147 mg /g dry yeast cells under the optimum technical conditions with boiling 80 min. [Conclusion] The study can provide reference for trehalose extraction and further utilization.

Key words Waste beer yeast; Trehalose; Anthracene copper-sulfuric acid colorimetry; 3，5-two nitro salicylic acid colorimetry

基金項(xiàng)目 山東省科技計(jì)劃資助項(xiàng)目（2011GSF2114）;菏澤市科技計(jì)劃項(xiàng)目（2010S002）。

作者簡(jiǎn)介 王宜磊（1964-），男，山東巨野人，教授，從事微生物生理學(xué)方面研究。

收稿日期 2014-10-15

海藻糖（Trehalose）是一種由2個(gè)葡萄糖分子通過(guò)半縮醛羥基以α-1，1糖苷鍵結(jié)合的非還原性雙糖[1]。有“21世紀(jì)生命之糖”稱(chēng)號(hào)的海藻糖具有非特異性的保護(hù)功能，引起了全球科研人員的研究熱潮[2-3]。它不僅可作為生物體內(nèi)的能量?jī)?chǔ)備，也具有在干燥條件下保護(hù)核酸、蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)不受侵害的功能，更值得關(guān)注的是，外源性的海藻糖同樣也可以保護(hù)細(xì)胞和生命大分子[4]，對(duì)蛋白質(zhì)變性具有保水作用和保護(hù)作用[5]。海藻糖的這些特性決定了它在疫苗、菌苗、食品、醫(yī)藥衛(wèi)生、化妝品等領(lǐng)域的生產(chǎn)中有著廣闊的應(yīng)用前景。

海藻糖最初是Wiggers從黑麥的麥角中首次分離出來(lái)的，后來(lái)發(fā)現(xiàn)在其他真菌、細(xì)菌、昆蟲(chóng)血、地衣、酵母以及無(wú)脊椎動(dòng)物中亦有廣泛存在[6]。特別是在酵母中含量豐富[7]， 且由于酵母容易培養(yǎng)、生長(zhǎng)快速，目前世界各國(guó)產(chǎn)海藻糖的主要方法是從酵母菌中提取。目前海藻糖的生產(chǎn)主要存在的問(wèn)題是海藻糖資源不夠和生產(chǎn)費(fèi)用太高。隨著生產(chǎn)技術(shù)與工藝的改進(jìn)與提高，它將更加廣泛地用于食品、醫(yī)藥等多個(gè)領(lǐng)域內(nèi)。從酵母細(xì)胞內(nèi)提取海藻糖，大都采用乙醇回流提取工藝。但是該傳統(tǒng)方法大多表現(xiàn)為提取時(shí)間太長(zhǎng)、海藻糖收率很低、雜質(zhì)溶出過(guò)多等諸多問(wèn)題。隨著人們對(duì)其破壁提取技術(shù)的進(jìn)一步研究與探索和我國(guó)科技的快速發(fā)展，通過(guò)不同方法如：反復(fù)凍融法破壁、高壓脈沖電場(chǎng)破壁、微珠渦流發(fā)破壁、雙螺桿擠壓膨化法破壁、酶法等大大改善了傳統(tǒng)的方法，提高了破壁率、海藻糖提取率。

在查閱大量文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，筆者以啤酒廢酵母為原料，使用各種不同的方法（微波破壁法、高溫處理破壁、煮沸提取法）提取海藻糖，然后以海藻糖得率以及工藝的效益性來(lái)確定從廢酵母中提取海藻糖的較佳工藝。分別用微波破壁啤酒酵母提取海藻糖、對(duì)啤酒酵母高溫處理破壁提取海藻糖，煮沸啤酒酵母提取海藻糖，然后比較這3種方法中的各因素對(duì)海藻糖提取率的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1

原料。啤酒廢酵母：由青島啤酒廠提供。該試驗(yàn)經(jīng)預(yù)處理獲得的廢酵母每100 g濕酵母可獲得25.4 g干酵母。

1.1.2

主要儀器。電子分析天平（型號(hào)FA1604），上海天平儀器廠;微波爐（型號(hào)EM-183SM1），合肥容事達(dá)三洋電器股份有限公司;臺(tái)式低速離心機(jī)（型號(hào)TDL-5-A），上海安亭儀器廠;分光光度計(jì)（型號(hào)7230G），北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;三用電熱恒溫水箱（型號(hào)S·HH·WZ1-Cr），北京長(zhǎng)安科學(xué)儀器廠。

1.1.3

主要試劑與配制方法。氯仿∶正丁醇試劑：氯仿∶正丁醇=5∶1配制。蒽酮-濃硫酸試劑：200 mg蒽酮，100 ml濃硫酸配制而成的，一定邊加邊攪拌，得到黃色透明溶液體，將其置于棕色瓶中，要求現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.2 方法

1.2.1

檢測(cè)方法。海藻糖得率以提取液中海藻糖的含量作為指標(biāo)。配制海藻糖標(biāo)準(zhǔn)液，按照蒽酮-濃硫酸比色法測(cè)定其吸光度，得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程。

1.2.2

海藻糖提取率的計(jì)算公式。公式如下：

海藻糖的提取率（%）=[（海藻糖濃度（g/L）×總體積（L）×稀釋倍數(shù)）/干酵母質(zhì)量（g）]×100

1.2.3

廢酵母的預(yù)處理。

因?yàn)槠【粕a(chǎn)末期排放出來(lái)的廢液中除了酵母，還有大量的麥殼、碎米渣、酒花沉淀物等雜質(zhì)，這些都不利于提取，所以要先洗滌除雜、得到純凈的啤酒廢酵母。其工藝流程如下：啤酒廢酵母→加蒸餾水稀釋→100分樣篩篩分一次→3 000 r/min離心分離→純凈的啤酒廢酵母。

1.2.4

海藻糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制。配制100 mg/L的海藻糖標(biāo)準(zhǔn)液，取6支試管，按表1分別加入100 mg/L的海藻糖標(biāo)準(zhǔn)液、蒸餾水、蒽酮-濃硫酸試劑。

表1 海藻糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作

加入蒽酮-濃硫酸試劑之后，一起浸沸水浴中加熱5 min。煮完取出，用自來(lái)水沖冷，然后在分光光度計(jì)上進(jìn)行比色。調(diào)整波長(zhǎng)為590 nm，用1號(hào)管調(diào)零點(diǎn)，測(cè)出1～6號(hào)管的OD值。以O(shè)D值為縱坐標(biāo)，海藻糖濃度為橫坐標(biāo)，做出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

1.2.5

微波處理。

不同處理時(shí)間：定量稱(chēng)取廢濕酵母5份，每份0.1 g置于50 ml燒杯中，并均勻地鋪在燒杯底部，然后置微波爐內(nèi)能量分布均勻的位置，800 W功率分別處理90、120、180、240、300 s。然后分別加入10 ml的蒸餾水，讓酵母充分溶解后靜置10 min，用移液槍分別取上清液3.3 ml于5支試管內(nèi)，再向試管里分別加入0.66 ml的Sevage試劑（氯仿∶正丁醇=5∶1），充分振蕩后，以3 000 r/min離心10 min，然后分別取離心管內(nèi)的上清液2.00 ml于5支試管內(nèi)，再取1支試管加入2.00 ml蒸餾水（空白對(duì)照），再往6支試管內(nèi)分別加入8.00 ml的蒽酮-濃硫酸試劑，放置沸水中加熱5 min，然后用自來(lái)水沖冷，然后在分光光度計(jì)上進(jìn)行比色，調(diào)整波長(zhǎng)為590 nm，用空白對(duì)照試管調(diào)零，測(cè)出1～5號(hào)管的OD值。通過(guò)海藻糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出各自的海藻糖濃度。

不同料液比處理：定量稱(chēng)取廢濕酵母5份，每份0.1 g置于50 ml燒杯中，并均勻地鋪在燒杯底部，然后置微波爐內(nèi)能量分布均勻的位置，800 W功率處理180 s，然后分別加入8、10、12、14 ml的蒸餾水，讓酵母充分溶解后靜置10 min，用移液槍分別取上清液3.3 ml于5支試管內(nèi)，再向試管里分別加入0.66 ml的Sevage試劑（氯仿∶正丁醇=5∶1），充分振蕩后，以3 000 r/min離心10 min，然后分別取離心管內(nèi)的上清液2.00 ml于5支試管內(nèi)，再取1支試管加入2.00 ml蒸餾水（空白對(duì)照），再往6支試管內(nèi)分別加入8.00 ml的蒽酮-濃硫酸試劑，放置沸水中加熱5 min，然后用自來(lái)水沖冷，然后在分光光度計(jì)上進(jìn)行比色，調(diào)整波長(zhǎng)為590 nm，用空白對(duì)照試管調(diào)零，測(cè)出1～5號(hào)管的OD值。通過(guò)海藻糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出各自的海藻糖濃度。

1.2.6

高溫處理。

不同處理時(shí)間：量取廢濕酵母5份，每份0.1 g置于50 ml燒杯中，并均勻地鋪在燒杯底部，然后放在80 ℃的恒水浴中分別處理20、30、40、50、60 min。然后分別加入10 ml的蒸餾水，讓酵母充分溶解后靜置10 min，用移液槍分別取上清液3.3 ml于5支試管內(nèi)，再向試管里分別加入0.66 ml的Sevage試劑（氯仿∶正丁醇=5∶1），充分振蕩后，以3 000 r/min離心10 min，然后分別取離心管內(nèi)的上清液2.00 ml于5支試管內(nèi)，再取1支試管加入2.00 ml蒸餾水（空白對(duì)照），再往6支試管內(nèi)分別加入8.00 ml的蒽酮-濃硫酸試劑，放置沸水中加熱5 min，然后用自來(lái)水沖冷，然后在分光光度計(jì)上進(jìn)行比色，調(diào)整波長(zhǎng)為590 nm，用空白對(duì)照試管調(diào)零，測(cè)出1～5號(hào)管的OD值。通過(guò)海藻糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出各自的海藻糖濃度。

不同處理溫度：量取廢濕酵母5份，每份0.1 g置于50 ml燒杯中，并均勻地鋪在燒杯底部，然后分別放進(jìn)先前調(diào)好的5個(gè)恒溫水浴鍋中，恒溫水浴鍋溫度分別為60、70、80、90、100 ℃。處理40 min后，分別向5 個(gè)燒杯中加入10 ml的蒸餾水，讓酵母充分溶解后靜置10 min，用移液槍分別取上清液3.3 ml于5支試管內(nèi)，再向試管里分別加入0.66 ml的Sevage試劑（氯仿∶正丁醇=5∶1），充分振蕩后，以3 000 r/min離心10 min，然后分別取離心管內(nèi)的上清液2.00 ml于5支試管內(nèi)，再取1支試管加入2.00 ml蒸餾水（空白對(duì)照），再往6支試管內(nèi)分別加入8.00 ml的蒽酮-濃硫酸試劑，放置沸水中加熱5 min，然后用自來(lái)水沖冷，然后在分光光度計(jì)上進(jìn)行比色，調(diào)整波長(zhǎng)為590 nm，用空白對(duì)照試管調(diào)零，測(cè)出1～5號(hào)管的OD值。通過(guò)海藻糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出各自的海藻糖濃度。

不同料液比處理：量取廢濕酵母5份，每份0.1 g置于50 ml燒杯中，并均勻地鋪在燒杯底部，然后在80 ℃的恒溫水浴鍋中處理40 min，處理后分別向5個(gè)燒杯中加入8、9、10、11、12 ml的蒸餾水，讓酵母充分溶解后靜置10 min，用移液槍分別取上清液3.3 ml于5支試管內(nèi)，再向試管里分別加入0.66 ml的Sevage試劑（氯仿∶正丁醇=5∶1），充分振蕩后，以3 000 r/min離心10 min，然后分別取離心管內(nèi)的上清液2.00 ml于5支試管內(nèi)，再取1支試管加入2.00 ml蒸餾水（空白對(duì)照），再往6支試管內(nèi)分別加入8.00 ml的蒽酮-濃硫酸試劑，放置沸水中加熱5 min，然后用自來(lái)水沖冷，然后在分光光度計(jì)上進(jìn)行比色，調(diào)整波長(zhǎng)為590 nm，用空白對(duì)照試管調(diào)零，測(cè)出1～5號(hào)管的OD值。通過(guò)海藻糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出各自的海藻糖濃度。

1.2.7

沸水處理。稱(chēng)取廢濕酵母5份，每份0.1 g置于50 ml燒杯中，并均勻地鋪在燒杯底部，加一定量的蒸餾水混合，用電鍋煮沸，此過(guò)程會(huì)有大量的水蒸出， 要不斷補(bǔ)加水，每10 min補(bǔ)加相同的水分，提取過(guò)程要注意不斷攪拌。從沸騰開(kāi)始計(jì)時(shí)，每經(jīng)過(guò)20 min停止對(duì)一只燒杯煮沸。這樣對(duì)5支燒杯分別處理了20、40、60、80、100 min。然后靜置10 min，用移液槍分別取上清液3.3 ml于5支試管內(nèi)，再向試管里分別加入0.66 ml的Sevage試劑（氯仿∶正丁醇=5∶1），充分振蕩后，以3 000 r/min離心10 min，然后分別取離心管內(nèi)的上清液2.00 ml于5支試管內(nèi)，再取1支試管加入2.00 ml蒸餾水（空白對(duì)照），再往6支試管內(nèi)分別加入8.00 ml的蒽酮-濃硫酸試劑，放置沸水中加熱5 min，然后用自來(lái)水沖冷，然后在分光光度計(jì)上進(jìn)行比色，調(diào)整波長(zhǎng)為590 nm，用空白對(duì)照試管調(diào)零，測(cè)出1～5號(hào)管的OD值。通過(guò)海藻糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出各自的海藻糖濃度。

2 結(jié)果與分析

2.1 海藻糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)與方程

如圖1得到的直線(xiàn)方程為y=0.012 7x+0.001 2，相關(guān)系數(shù)為0.999 1，表明海藻糖濃度在0～75 mg/ml的范圍內(nèi)與吸光度呈正相關(guān)，方程中的y為吸光度，x為海藻糖的質(zhì)量濃度。

圖1 海藻糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

2.2 微波處理啤酒酵母的情況下海藻糖的提取率

微波破碎啤酒酵母細(xì)胞是由于胞內(nèi)物質(zhì)局部受熱、內(nèi)壓快速升高而使細(xì)胞發(fā)生破碎的。微波具有穿透力強(qiáng)、升溫快的特點(diǎn)，通過(guò)微波處理后，酵母細(xì)胞不僅實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞破碎，胞內(nèi)海藻糖酶活性也會(huì)快速喪失活性[8]。該試驗(yàn)通過(guò)考慮微波處理的時(shí)間不同、料液比不同得到的海藻糖提取率的變化情況如圖2、3所示。

圖2 微波時(shí)間對(duì)海藻糖提取率的影響

圖3 微波處理下料液比對(duì)海藻糖提取率的影響

由圖2、3可知，微波處理可在比較短的時(shí)間里滅活海藻糖酶和對(duì)細(xì)胞的破壁，大大方便了細(xì)胞內(nèi)海藻糖的提取。在微波處理時(shí)間和料液比這2個(gè)影響因素中，微波處理不但滅活了海藻糖酶，還破壞了酵母細(xì)胞壁和細(xì)胞膜，大大減小了提取阻力。因此，綜合考慮各種因素的影響，確定采用微波預(yù)處理方法提取海藻糖的最佳條件是：微波作用180 s，料液比1∶100 g/ml下用水為提取液提取，海藻糖提取率為4.985 mg/g干酵母。

2.3 高溫處理啤酒酵母的情況下海藻糖的提取率

高溫可使海藻糖酶變性失活，高溫干燥還可使酵母細(xì)胞壁受到嚴(yán)重?fù)p壞，使其表面形成許多的裂縫，從而使酵母細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)容易流出來(lái)[9]。因此可以采用高溫破碎廢酵母細(xì)胞達(dá)到提取海藻糖的目的。該試驗(yàn)通過(guò)考慮高溫處理的時(shí)間不同、溫度不同、料液比不同得到的海藻糖提取率變化情況如圖4～6所示。

圖4 高溫處理不同時(shí)間對(duì)海藻糖提取率的影響

圖5 高溫處理不同溫度對(duì)海藻糖提取率的影響

圖6 高溫處理不同的料液比對(duì)海藻糖的提取率的影響

由圖4、5、6可知，高溫處理溫度和處理時(shí)間對(duì)海藻糖提取率影響較大。綜合考慮各影響因素以及考慮到經(jīng)濟(jì)因素得到的高溫預(yù)處理方法的最佳條件為：90 ℃烘箱中處理40 min，料液比為1∶100 g/ml，此時(shí)的海藻糖最大得率為7.992 mg/g干酵母。

2.4 沸水處理啤酒酵母的情況下海藻糖的提取率

煮沸提取可做到滅活海藻糖酶、破碎細(xì)胞以及提取同時(shí)進(jìn)行[10]。經(jīng)過(guò)煮沸處理時(shí)間不同后得到的海藻糖提取率變化情況如圖7所示。

圖7 沸水浴處理不同時(shí)間對(duì)海藻糖提取率的影響

圖7可以看出，在80 min內(nèi)，隨著時(shí)間的增加，海藻糖的提取率大幅增加，但繼續(xù)增加處理時(shí)間，海藻糖的提取率增幅趨于平穩(wěn)，考慮綜合因素，確定以水作提取劑從廢酵母中提取海藻糖的最佳條件是：煮沸80 min，海藻糖提取率為8.147 mg/g。

2.5 廢酵母不同處理方法提取海藻糖的比較

[11-12] 由表2可見(jiàn)，微波破碎法雖然用時(shí)較少，但不容易工業(yè)化使用且提取率不高。高溫處理廢酵母， 如高溫干燥和煮沸提取，得到的海藻糖提取率較高，分別為 7.992 mg/g干酵母和8.147 mg/g干酵母。而且這2種方法使酵母細(xì)胞內(nèi)的海藻糖酶容易失活同時(shí)也使啤酒酵母細(xì)胞內(nèi)的海藻糖變得容易提取。其原因可能是以下2點(diǎn)：一是高溫（熱）處理時(shí)，酵母從室溫升到高溫使其死亡的溫度之前，由于受到高溫的傷害，細(xì)胞內(nèi)海藻糖的含量增加;二是高溫作用使酵母細(xì)胞內(nèi)的海藻糖酶完全失活，使海藻糖不被降解，使其容易提取。高溫干燥和沸水處理雖然都能有效提高海藻糖的提取率，但是在試驗(yàn)過(guò)程中可以發(fā)現(xiàn)高溫干燥處理的一些缺點(diǎn)。一是高溫干燥要除去酵母中的水分，能耗大，不經(jīng)濟(jì)環(huán)保; 二是酵母干燥后往往使酵母硬結(jié)成塊，提取前需要將其粉碎，造成了提取工藝的不必要的復(fù)雜與不便。而煮沸提取可做到滅活海藻糖酶、破碎細(xì)胞以及提取同時(shí)進(jìn)行，簡(jiǎn)化了提取工藝，提高了海藻糖提取率。所以該試驗(yàn)確定水為提取劑、采用煮沸提取的方法作為最佳提取工藝。

3 結(jié)論與討論

3.1 結(jié)論

該試驗(yàn)以水作提取劑從廢酵母中提取海藻糖，考察了用微波破碎細(xì)胞后提取、高溫處理后提取、煮沸后提取3種方法，結(jié)果得出，微波破碎法耗時(shí)少，但不易工業(yè)化且提取率不高，比較發(fā)現(xiàn)煮沸提取的工藝方法相對(duì)最佳。以水作提取劑從廢酵母中提取海藻糖的最佳條件是：煮沸80 min，海藻糖提取率為8.147 mg/g干酵母。

表2 不同處理方法的比較

3.2 討論

通過(guò)查閱文獻(xiàn)獲知，用水作提取劑和用乙醇作提取劑的提取率相差不大，而且水提取的溫度高于乙醇水溶液提取，但提取時(shí)間比乙醇水溶液短，考慮到乙醇的成本比水的成本高，回收比較麻煩。所以，對(duì)工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)，選擇水提取方法來(lái)制備海藻糖比較適宜。

酵母細(xì)胞內(nèi)海藻糖的提取必須抑制海藻糖酶的活性，該試驗(yàn)設(shè)計(jì)的3種方法都能有效抑制海藻糖酶的活性，例如微波具有穿透力強(qiáng)、升溫快的特點(diǎn)，通過(guò)微波處理可迅速使海藻糖酶喪失活性。海藻糖酶在微波場(chǎng)中失活很快，經(jīng)短時(shí)間微波處理后，酵母細(xì)胞不僅破碎了，而且胞內(nèi)海藻糖酶活性也已完全喪失。微波破細(xì)胞與高壓勻漿、珠磨等細(xì)胞破碎方法最大的區(qū)別在于，微波破碎細(xì)胞是基于胞內(nèi)物質(zhì)局部受熱、內(nèi)壓升高而使細(xì)胞發(fā)生破碎的，微波破壁只使細(xì)胞表面出現(xiàn)孔洞和裂紋，小分子物質(zhì)可以自由進(jìn)出細(xì)胞，但并未將細(xì)胞內(nèi)容物完全釋放到胞外，細(xì)胞仍保持其形態(tài)，雜質(zhì)溶出少，為后面的提取工作提供方便。高溫處理和沸水處理都利用了酶的性質(zhì)，高溫使海藻糖酶活性喪失，而且同時(shí)由于酵母細(xì)胞受高溫影響使其細(xì)胞壁破裂，從而使海藻糖容易流出，易于提取。再者，該試驗(yàn)采用的是物理方法，相比于其他化學(xué)或者生物方法處理酵母，從根本上減少了對(duì)化學(xué)試劑的使用，減少了環(huán)境的污染，更加經(jīng)濟(jì)、高效、環(huán)保。另外，物理法破壁還有很多種，如反復(fù)凍融法、超聲波破壁法等，該試驗(yàn)沒(méi)有用反復(fù)凍融法，是因?yàn)樵摲椒üに囅鄬?duì)復(fù)雜，耗時(shí)長(zhǎng)，難以工業(yè)化生產(chǎn)。

從試驗(yàn)結(jié)果可以看出，海藻糖的提取率不是很高，可能的原因：一是該試驗(yàn)所用的啤酒廢酵母放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，其體內(nèi)的海藻糖酶分解了一部分海藻糖;二是在試驗(yàn)過(guò)程中經(jīng)過(guò)微波處理或高溫處理后，酵母過(guò)于干燥凝結(jié)成塊，對(duì)其溶解時(shí)不完全，造成少部分的海藻糖丟失。以后如果再次研究該方面的課題以考慮在破壁處理時(shí)添加一些輔助工作，如在物理場(chǎng)輔助下進(jìn)行或者添加一些生物酶。在輔助條件下用這3種方法（微波處理、高溫處理、沸水處理）處理酵母，應(yīng)該破壁效果更佳，海藻糖提取率更高，更加利于工業(yè)化大生產(chǎn)。

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