宋玉國，張新茹，李秀芬，彭振宇

(1.吉林省食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 長春 130033；2.吉林大學(xué) 第二醫(yī)院,吉林 長春 130041)

*

宋玉國，主管藥師，研究方向：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；E-mail:songyuguo.813@163.com

HPLC測定清咳平喘顆粒中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量

宋玉國1*，張新茹2，李秀芬1，彭振宇1

(1.吉林省食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 長春 130033；2.吉林大學(xué) 第二醫(yī)院,吉林 長春 130041)

目的建立測定清咳平喘顆粒中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量測定方法。方法采用高效液相色譜法，Apollo C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)分析柱，流動(dòng)相為乙腈-0.2%磷酸(5∶95)；流速為0.8 mL·min-1,檢測波長為210 nm。結(jié)果鹽酸麻黃堿線性范圍0.051 8～0.518 μg，r=0.999 8，平均回收率為94.5%；RSD=0.64%(n=6)；鹽酸偽麻黃堿線性范圍0.019 58～0.19 58 μg,r=0.999 4,平均回收率為90.6%；RSD=0.95%(n=6)。結(jié)論該法操作簡便、準(zhǔn)確、分離度與穩(wěn)定性好、專屬性強(qiáng)，可作為控制該藥品的質(zhì)量方法。

清咳平喘顆粒；高效液相色譜法；鹽酸麻黃堿；鹽酸偽麻黃堿；含量測定；質(zhì)量控制

清咳平喘顆粒為長春遠(yuǎn)大國奧制藥有限公司(原長春海王生物制藥有限公司)與山西神泉保健品有限公司太原分公司合作開發(fā)的中藥三類新藥，藥品標(biāo)準(zhǔn)號(hào)為YBZ02472004-2009。其方是由石膏、金蕎麥、魚腥草、蜜麻黃、炒苦杏仁、川貝母、矮地茶、枇杷葉、炒紫蘇子、炙甘草等10味中藥組成；具有清熱宣肺，止咳平喘功能。用于急性支氣管炎、慢性支氣管炎急性發(fā)作屬痰熱郁肺證，癥見：咳嗽氣急，甚或喘息，咯痰色黃或不爽，發(fā)熱，咽痛，便干，苔黃或黃膩等。方中蜜麻黃潤肺止咳，多用于表證已解，氣喘咳嗽，其主要成分為鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿。原標(biāo)準(zhǔn)只對(duì)鹽酸麻黃堿進(jìn)行含量測定，為嚴(yán)格控制其含量，以控制該制劑內(nèi)在質(zhì)量,保證其安全、可靠。采用高效液相色譜法同時(shí)對(duì)方中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量進(jìn)行測定，并以二者為指標(biāo)來控制本品的質(zhì)量。

1 儀器、試藥與試劑

AgiLent1200高效液相色譜儀；天平：Sartorius BS 124S；Sartorius BT-125D；KQ-500E超聲儀(500 W,40 Hz)；Cary50紫外光分光光度計(jì)；MILLIPORE超純水器。

鹽酸麻黃堿對(duì)照品(批號(hào)：171241-200506，含量測定用)、鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品(批號(hào)：171237-200807，純度99.9%，含量測定用)，購自中國食品藥品檢定研究院。清咳平喘顆粒(長春遠(yuǎn)大國奧制藥有限公司，批號(hào)：110501，110503，110601，111201，111202，111203)。缺蜜麻黃的陰性樣品(自制)。乙腈、磷酸為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為ApoLLo C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；以乙腈-0.2%磷酸(5∶95)為流動(dòng)相；流速0.8 mL·min-1,；檢測波長為210 nm。柱溫為35 ℃。進(jìn)樣量為10 μL；分離度大于1.5；理論塔板數(shù)定為以鹽酸麻黃堿計(jì)不得低于5 000。色譜圖見圖1～3。

圖1 鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品HPLC圖

圖2 清咳平喘顆粒供試品HPLC圖

圖3 缺蜜麻黃的陰性對(duì)照品HPLC圖

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品適量，加鹽酸-甲醇(1∶100)制成每1 mL含鹽酸麻黃堿50 μg和鹽酸偽麻黃堿20 μg的溶液,搖勻，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取裝量差異項(xiàng)下的本品，研細(xì)，取約5.0 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入1 moL·L-1的鹽酸溶液50 mL，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)40 min，放冷，用上述鹽酸溶液補(bǔ)足減失的重量，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液10 mL，置分液漏斗中，加入6 moL·L-1氫氧化鈉溶液2 mL，加入氯化鈉2 g，用乙醚提取5次(20，10，10，10，10 mL)，合并提取液，加入酸性乙醇(鹽酸1→20)1 mL，低溫蒸干，殘?jiān)欲}酸-甲醇(1∶100)使溶解，移至10 mL量瓶中，加鹽酸-甲醇(1∶100)至刻度，搖勻，即得。

2.4 陰性對(duì)照品溶液的制備

取不含蜜麻黃的陰性對(duì)照樣品，按2.3項(xiàng)下方法制備。

2.5 線性關(guān)系考察

精密稱取鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品適量，加鹽酸-甲醇(1∶100)制成每1 mL含0.051 8，0.019 6 mg的溶液，分別精密吸取1，3，5，7，9 μL測定，以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的回歸方程分別為：Y= 266 2.7X+6.037 2(r=0.999 8)；Y= 266 4.9X+2.298(r=0.999 4)。結(jié)果表明，鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿進(jìn)樣量分別在0.051 8～0.518 μg和0.019 58～0.195 8 μg呈良好線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液(批號(hào)：110503)5 μL，注入液相色譜儀，重復(fù)6次，測定其色譜峰面積，計(jì)算鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿峰面積的RSD分別為0.26%，0.40%，結(jié)果表明精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密稱定同一批樣品(批號(hào)：110503)適量，按2.3制備供試品溶液后，按含量測定方法，分別在0，8，16，24，36，48 h測定，記錄色譜峰面積，計(jì)算鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿峰面積的RSD分別為0.98%，結(jié)果表明供試品溶液在48 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一批樣品(批號(hào)：110503)樣品5.0 g，共6份，分別置具塞錐形瓶中；按供試品溶液制備方法制備，測定，二者總含量平均值為0.869 9 mg·g-1，RSD=0.98%(n=6)，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.9 回收率試驗(yàn)

2.9.1 加樣回收用的對(duì)照品貯備液制備 精密稱取鹽酸麻黃堿對(duì)照品15.09 mg和鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品6.26 mg，置500 mL量瓶，加1 moL·L-1的鹽酸適量使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。

2.9.2 回收率測定 精密稱取同一樣品(批號(hào)：110503)樣品2.5g(含鹽酸麻黃堿0.596 2 mg·g-1；鹽酸偽麻黃堿0.276 9 mg·g-1)，共6份，分別置具塞錐形瓶中；精密加入上述加樣回收用的對(duì)照品貯備液50 mL，按供試品溶液制備方法制備，測定，結(jié)果見表1、2。

表1 清咳平喘顆粒中鹽酸麻黃堿回收率試驗(yàn)

注：鹽酸麻黃堿對(duì)照品加入量均為1.509 mg

表2 清咳平喘顆粒中鹽酸偽麻黃堿回收率試驗(yàn)

注：鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品加入量均為0.626 mg

2.10 樣品測定結(jié)果

取6批樣品，按擬定含量測定方法操作，測定，結(jié)果見表3。

表3 清咳平喘顆粒中鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿含量測定 /mg·g-1

3 討論

3.1 色譜柱的選擇

實(shí)驗(yàn)中比較了Apollo C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)、Capcell PAK-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，Dimasil-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)4種色譜柱，按擬定含量測定方法操作，在使用不同色譜柱的情況下，結(jié)果均能較好地將鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿堿兩種成分分離，且主峰前后無雜峰，結(jié)果選用ApoLLo C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱。參照《中國藥典》2010年版麻黃項(xiàng)下【含量測定】的規(guī)定[1]，理論塔板數(shù)定為以鹽酸麻黃堿計(jì)不得低于5 000。

3.2 測定波長的選擇

精密稱取鹽酸麻黃堿對(duì)照品5.36 mg和鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品5.42 mg，分別置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，在紫外區(qū)190～400 nm掃描，結(jié)果表明，鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿在205 nm處有最大吸收，與《中國藥典》2010版一部麻黃項(xiàng)下所采用的檢測波長(210 nm)基本一致。故選定210 nm作為本品的測定波長。

3.3 流動(dòng)相的選擇

考察了5種流動(dòng)相系統(tǒng)：①乙腈-含0.2%三乙胺的0.02 moL·L-1磷酸二氫鉀溶液(3∶97)，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.7[1]，②甲醇-磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH為2.5)(6∶94)[2]，③乙腈-0.2%磷酸(5∶95)[3]，④乙腈-含0.3%三乙胺的0.02 moL·L-1磷酸二氫鉀溶液(5∶95)，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0[4]，⑤ 乙腈-0.1%磷酸(3∶97)[5]；結(jié)果①④鹽酸偽麻黃堿和鹽酸麻黃堿分離度不好；②⑤色譜條件下保留時(shí)間長，故未采用；③色譜條件出峰時(shí)間快，分離度好；故選擇其作為流動(dòng)相。

3.4 提取方法的考察[1-2]

分別考察了提取方法溶劑種類(加氨水2 mL,再加入三氯甲烷40 mL超聲；加水50 mL,再加入濃氨試液1 mL，超聲后用乙醚提??；加1 moL·L-1的鹽酸溶液50 mL，超聲后加入6 moL·L-1氫氧化鈉溶液調(diào)pH值，乙醚提取)及提取時(shí)間(30，40，50 min)對(duì)測定結(jié)果的影響，結(jié)果表明，采用加入1 moL·L-1的鹽酸溶液50 mL，超聲處理40 min，加入6 moL·L-1氫氧化鈉溶液2 mL調(diào)pH值，用乙醚提取，提取率相對(duì)較高。故作為含量提取方法。

實(shí)驗(yàn)建立的清咳平喘顆粒中鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿含量測定方法，操作簡便、準(zhǔn)確、分離度與穩(wěn)定性好、專屬性強(qiáng)，可用于該藥品的質(zhì)量控制。

[1] 國家藥典委員會(huì).中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2010：300,1055-1056.

[2] 國家藥品監(jiān)督管理局.中成藥地方標(biāo)準(zhǔn)上升國家標(biāo)準(zhǔn)部分[S].內(nèi)科肺系一分冊(cè).2002：504-506.

[3] 太成梅,那微,趙曉霞，等.HPLC法測定小兒肺熱咳喘口服液中鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的含量[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn),2010,11(5)：380-383.

[4] 李娜，周愛軍，黃鶴歸，等.HPLC法測定大青龍湯顆粒劑中鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的含量[J].中國藥師,2012,15(12)：230-232.

[5] 付莉，張淼.HPLC法測定麻黃浸膏中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量[J].中國藥事,2012,26(6)：611-616.

DeterminationofEphedrineHydrochLorideandPseudophedrineHydrochLorideinQingkePingchuanGrainsbyHPLC

SONGYuguo1*,ZHANGXinru2,LIXiufen1,PENGZhenyu1

(1.JilinInstituteforFoodandDrugControl,Changchun130033,China;2.TheSecondHospitalofJilinUniversity,Changchun130041,China)

Objective：To establish quality control methed of Ephedrine hydrochloride and Pseudophedrine hydrochloride in Qingke Pingchuan Grains.MethedsThe column was Apollo C18(Φ250 mm ×4.6 mm,5μm)and a mixture of acetonitrile and 0.2% phosphoric acid as the mobile phase was adopted.The flow rate was 0.8 mL·min-1and The UV detection wavelength was 210 nm.ResultsThe linear range of Ephedrine hydrochloride was 0.0518～0.518 μg(r=0.999 8),the average recovery was 94.5%,RSD=0.64%(n=6).The linear range of Pseudophedrine hydrochloride was 0.019 58～0.195 8 μg(r=0.999 4),the average recovery was 90.6%；RSD=0.95%(n=6);ConclusionThe method was simple,accurate,applicable and can be used for the quality control of Qingke Pingchuan Grains.

Qingke Pingchuan Grains;HPLC;Ephedrine hydrochloride;Pseudophedrine hydrochloride;Determination;Quality control

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.04.015

2013-06-13)