宋利，趙好冬，杜延佳，曲朋，張輝，孫佳明

(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長(zhǎng)春 130117)

*

張輝，教授，研究方向：中藥與天然藥物有效成分；E-mail：zhanghui_8080@163.com；

孫佳明，副研究員，研究方向：中藥與天然藥物有效成分；E-mail：sun_jiaming2000@163.com

一年蓬不同部位中焦袂康酸的含量測(cè)定

宋利，趙好冬，杜延佳，曲朋，張輝*，孫佳明*

(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長(zhǎng)春 130117)

目的建立一年蓬中焦袂康酸的HPLC含量測(cè)定方法，并對(duì)一年蓬藥材不同部位中焦袂康酸含量進(jìn)行測(cè)定。方法采用Unitary C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，以甲醇-1‰三氟乙酸水溶液(5∶95)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm，柱溫為30 ℃，流速為1.0 mL·min-1。結(jié)果焦袂康酸的線性范圍為0.25～62.0 μg·mL-1(r=0.999 3)，平均加樣回收率為98.4%，RSD=1.2%(n=6)。一年蓬花、葉、莖中焦袂康酸含量分別為2.56，0.40，0.08 mg·g-1，根中含量低于0.012 mg·g-1。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可以作為一年蓬中焦袂康酸的含量測(cè)定方法，為合理利用一年蓬藥材提供參考依據(jù)。

一年蓬；焦袂康酸；高效液相色譜法

一年蓬Erigeronannuus(L.)Pers.[AsterannuusL.]是菊科飛蓬屬植物，以全草入藥，又名女菀、野蒿、牙腫消、牙根消等。其味甘、苦，性涼，具有解毒，止血，消食，截瘧的功能，主治淋巴結(jié)炎，齒齦炎，瘧疾，消化不良，胃腸炎，血尿，毒蛇咬傷[1]。一年蓬化學(xué)成分包括黃酮類[2-3]、萜類和甾醇類[4-6]、有機(jī)酸類[7-9]等。其中，一年蓬全草含焦袂康酸[2]。張人偉等[10]研究表明焦袂康酸有升壓作用，其葡萄糖苷有降壓和鎮(zhèn)靜催眠作用。李鐵軍等[11]研究證明燈盞花中焦袂康酸苷(ES)對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷有保護(hù)作用，其抗氧化和抗活性氧作用可能是其保護(hù)作用機(jī)制之一。孫漢董等[12]研究證明焦袂康酸及其葡萄糖苷具有顯著增加腦血管流量，改善腦血循環(huán)，降低腦血管阻力，提高血腦屏障的通透性，增加心肌營(yíng)養(yǎng)回流的作用，同時(shí)具備提高機(jī)體巨噬細(xì)胞免疫功能和較強(qiáng)的抑制內(nèi)凝血等作用。此外，焦袂康酸也是制備香味增效劑麥芽酚、乙基麥芽酚的重要中間體[13]。目前尚未見有文獻(xiàn)報(bào)道測(cè)定一年蓬不同部位焦袂康酸含量的方法。本研究建立了一年蓬中焦袂康酸的HPLC測(cè)定方法，并對(duì)一年蓬藥材不同部位中焦袂康酸含量進(jìn)行測(cè)定。

1 儀器與材料

1.1 儀器

AgiLent 1260系列高效液相色譜儀，Sartorius BSA124S-CW型電子天平，KQ-3200B型超聲波清洗器。

1.2 材料

一年蓬藥材采于吉林省蛟河市，經(jīng)長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)張輝教授鑒定為菊科飛蓬屬一年蓬Erigeronannuus(L.)Pers.[AsterannuusL.]的全草。將該藥材分揀為花、葉、莖、根，晾干，粉碎，過三號(hào)篩，備用。

焦袂康酸對(duì)照品為本實(shí)驗(yàn)室從一年蓬中分離得到，經(jīng)波譜分析鑒定結(jié)構(gòu)，HPLC面積歸一化法檢測(cè)純度>98.0%。甲醇、三氟乙酸為色譜純，水為娃哈哈純凈水，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Unitary C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相：甲醇-1‰三氟乙酸水溶液(5∶95)，檢測(cè)波長(zhǎng)：270 nm，柱溫：30 ℃，流速：1.0 mL·min-1，進(jìn)樣量：10 μL。在上述色譜條件下對(duì)照品和樣品的色譜圖見圖1。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱定焦袂康酸對(duì)照品0.006 2 g，置100 mL量瓶中，甲醇溶解，定容，搖勻，配制成濃度為0.062 mg·mL-1的焦袂康酸對(duì)照品溶液，備用。

2.3 供試品溶液的制備

取一年蓬花、葉、莖、根粉末各約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率50 kHz)1 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失質(zhì)量，搖勻，靜置，取上清液，0.45 μm濾膜濾過，即得供試品溶液。

1.焦袂康酸A.對(duì)照品 B.莖 C.花 D.根 E.葉圖1 焦袂康酸對(duì)照品及一年蓬不同部位HPLC圖

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液0.04，1，4，8，10 mL，甲醇定溶于10 mL量瓶中，搖勻。分別吸取10 μL注入色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積。以濃度為橫坐標(biāo)(Χ)、峰面積為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行線性回歸，所得焦袂康酸的回歸方程為Y=60.099Χ-14.549(r=0.999 3)。結(jié)果表明，焦袂康酸在0.25～62.0 μg·mL-1與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

取2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液1 mL，甲醇定溶于10 mL量瓶中，搖勻，按2.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)得焦袂康酸峰面積的RSD=0.16%，試驗(yàn)表明儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

按2.3項(xiàng)下的供試品溶液的制備方法平行制備一年蓬花的供試品溶液5份，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定焦袂康酸平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.56 mg·g-1，RSD=1.70%，表明此法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密稱取2.3項(xiàng)下制備的一年蓬花供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件每2 h進(jìn)樣1次，進(jìn)樣6次，計(jì)算得焦袂康酸峰面積的RSD=0.97%，結(jié)果表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的一年蓬花細(xì)粉6份，分別精密加入2.2項(xiàng)下焦袂康酸對(duì)照品溶液10 mL，照2.3項(xiàng)下方法制成加樣回收供試液，按上述色譜條件依法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表1。

表1 一年蓬花中焦袂康酸加樣回收率試驗(yàn)

2.9 樣品含量測(cè)定

按2.3項(xiàng)下方法分別制備一年蓬花、葉、莖、根樣品溶液各3份，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測(cè)得峰面積，計(jì)算焦袂康酸的含量。測(cè)得一年蓬花、葉、莖中焦袂康酸的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為2.56，0.40，0.08 mg·g-1，根中焦袂康酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)低于0.012 mg·g-1。

3 討論

取甲醇溶解的焦袂康酸對(duì)照品溶液，以甲醇為空白，在200～400 nm進(jìn)行光譜掃描，可見焦袂康酸在270 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，因此選擇270 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。焦袂康酸為3-羥基-4-吡喃酮，具有弱酸性，經(jīng)嘗試最終選用使峰形較好的甲醇-1‰三氟乙酸水溶液(5∶95)作為流動(dòng)相。

應(yīng)用本法測(cè)定了一年蓬藥材不同部位中焦袂康酸的含量，結(jié)果顯示各部位焦袂康酸含量為花>葉>莖>根，且各部位含量差異較為明顯，其中根中幾乎不含焦袂康酸，而花中的焦袂康酸含量是葉的6倍左右、莖的30余倍，因此判定花為一年蓬中富含焦袂康酸的主要藥用部位。這提示我們?cè)谫Y源可持續(xù)利用的原則下，只采收一年蓬的地上部分就可獲得該植物中絕大多數(shù)的焦袂康酸。本研究建立的方法不僅能夠快速準(zhǔn)確地測(cè)定一年蓬中焦袂康酸的含量，也為一年蓬藥材的合理采收和開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

[1] 南京中醫(yī)藥大學(xué).中藥大辭典[M].第二版.上冊(cè).上海：上?？茖W(xué)出版社，2006：3.

[2] 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典[M].上冊(cè).上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社,1977：3.

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DeterminationofPyromeconicacidinDifferentPartsofErigeronannus

SONGLi，ZHAOHaodong，DUYanjia，QUPeng，ZHANGHui*，SUNJiaming*

(ChangchunUniversityofChineseMedicine，Changchun130117，China)

Objective：To establish a method for the determination of pyromeconic acid inErigeronannusby HPLC，and determine the contents of pyromeconic acid in different parts ofE.annus.MethodsUnitary C18column(4.6 mm×250 mm，5 μm)was used with a mobile phase consisting of methanol-1‰ trifluoroacetic acid aqueous(5∶95).The detection wavelength was 270 nm.Column temperature was 30 ℃.The flow rate was 1.0 mL·min-1.ResultsThe linear range of pyromeconic acid was 0.25～62.0 μg·mL-1(r=0.999 3)and The mean recoveries rate was 98.4 %，RSD 1.2%(n=6).The contents of Pyromeconic acid in flower，leaf，stem were 2.56，0.40，0.08 mg·g-1，while root was lower than 0.012 mg·g-1.ConclusionThe method is simple，accurate，reproducible，and can be used as the determination method of pyromeconic acid inE.annus，and meanwhile，can provide reference basis for the rational use ofE.annus.

Erigeronannus；Pyromeconic acid；HPLC

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.06.006

2014-01-16)