★ 楊建冬 余蔥蔥

(1.宜春市食品藥品檢驗所 江西宜春336000;2.四川省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院亞健康監(jiān)測與評估實驗室 四川成都610041)

中西醫(yī)結(jié)合是我國現(xiàn)代衛(wèi)生事業(yè)發(fā)展的一大顯著特色。合理的中西藥聯(lián)用可使臨床療效增強，近年來一些制假者和不法商販利用中成藥所含成分復雜、質(zhì)量標準不完善的缺點，在中成藥和保健食品中非法添加化學藥品，而中成藥中擅自加入西藥成分，可能會產(chǎn)生不可預(yù)知的嚴重后果。鹽酸西布曲明作為一種新型減肥藥，其效果是顯著的，但近年來鹽酸西布曲明在歐盟、澳大利亞等國家和地區(qū)進行的臨床研究顯示，使用該藥可能增加受試者嚴重心血管疾病風險，包括非致死性心梗，非致死性卒中，可復蘇的心臟驟停，心血管死亡等?；趪H上對該品種的最新評估結(jié)果，2010年10月國家食品藥品監(jiān)督管理局決定停止鹽酸西布曲明制劑和原料藥在我國的生產(chǎn)、銷售和使用。然而，在中成藥中擅自非法添加鹽酸西布曲明的事件仍有發(fā)生。本實驗通過利用TLC和HPLC法建立中成藥中添加鹽酸西布曲明的定性分析方法，該方法能快速有效的檢出中成藥中的鹽酸西布曲明，為消費者的用藥安全提供保障。

1 儀器和材料

1.1 儀器 惠普HP1100高效液相色譜儀;N2000色譜工作站;硅膠G板為(自制);929型全自動簿層鋪板器;TU1901紫外分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)。

1.2 材料 鹽酸西布曲明對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號100624-200401);試驗樣品為市場隨機抽檢所得;甲醇為色譜純和分析純;三氯甲烷，醋酸乙酯，乙酸均為分析純，改良碘化鉍鉀溶液。

2 方法

2.1 對照品溶液的配制 取鹽酸西布曲明對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，即得。

2.2 供試品溶液的配制 取本品(口服液5支，混勻，取半支量;膠囊10粒，內(nèi)容物混勻，稱取2粒的量;片劑取10片，研細，混勻，稱取相當于2片的量)，置25mL容量瓶中，加甲醇適量，固體制劑超聲15min，放冷，加甲醇至刻度，濾過，取續(xù)濾液。即得。

2.3 TLC鑒別 分別取供試品溶液，對照品溶液各10μL，點于經(jīng)活化的硅膠G板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇(16∶0.5∶0.5)，并滴加乙酸2滴為展開劑，飽和20min后，展開，取出，晾干，噴以改良碘化鉍鉀溶液顯色。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，不得顯相同顏色的斑點。

2.4 HPLC檢查 用十八烷基硅膠鍵合硅膠為填充劑色譜柱，以甲醇-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(60∶40，用磷酸調(diào)至2.9～3.1)為流動相，檢測波長為223nm，進樣量均為10μL，注入液相色譜儀中。供試品色譜中，不得出現(xiàn)與對照品保留時間相同的色譜峰。

3 結(jié)果與討論

3.1 TLC鑒別 觀察TLC簿層色譜圖，其斑點顏色及位置，對應(yīng)于鹽酸西布曲明對照品及陽性對照，供試品呈現(xiàn)出相同的橘紅色斑點，樣品中其他成分能與西布曲明很好的分離，不干擾鑒別。

3.1.1 展開劑的選擇 此實驗中由于我們是在中等極性溶劑體系中進行，根據(jù)多數(shù)文獻中報道該類化合物中展開劑選擇，最終選擇以甲苯-乙酸乙酯-異丙醇 -濃氨試液(12∶6∶3∶0.5)為展開劑［1］和以氯仿-甲醇(8∶1)為展開劑［2］進行實驗摸索，經(jīng)過考慮環(huán)保與實驗效果，選擇以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇為展開劑，在不斷的混合配比后，發(fā)現(xiàn)比例在(16∶0.5∶0.5)時能很好的符合上述展開劑的條件，但斑點有拖尾現(xiàn)象，考慮鹽酸西布曲明具酸性，于是在原比例展開劑中滴加乙酸2滴并混和，發(fā)現(xiàn)展開后組分分離效果好;斑點圓而且集中。

3.1.2 顯色劑的選擇 一般來說在TLC需要顯色，先采用紫外光顯色，如果紫外光顯色不能成功再考慮使用顯色劑。在本實驗中由于照紫外后發(fā)現(xiàn)其顯色效果沒有使用顯色劑好。參考部分文獻后，采用4%氫氧化鈉溶液及稀碘化鉍鉀為顯色劑進行顯色［1］和改良碘化鉍鉀溶液顯［2］，實驗探索后，發(fā)現(xiàn)在選用改良碘化鉍鉀溶液顯色進行顯色，靈敏度高，斑點顏色穩(wěn)定、斑點與背景間的對比度好，斑點的大小及顏色的深度與物質(zhì)的量成正比。

3.1.3 簿層檢測的樣品檢測結(jié)果

陽性某生物科技有限公司 20060410 陽性某保健品公司 20070106 陰性某藥業(yè)公司 20070915生產(chǎn)廠家 批號 結(jié)果某藥業(yè)公司(美國) 20070206陰性

3.2 HPLC定性分析

3.2.1 檢測波長的選擇 分取一定量甲醇和對照品溶液，先取適量甲醇置于1cm的石英吸收池中，在200nm～400nm處進行基線校準，將第一個吸收池吸中的甲醇溶液倒出，取適量對照品溶液，加入到吸收池中，在200nm～400nm處進行掃描，發(fā)現(xiàn)在222nm和200nm附近有吸收峰，但是考慮到甲醇溶液的末端吸收和部分文獻的選擇，而且該波長出的波基線平穩(wěn)波形好。所以選擇223nm作為檢測波長。

圖1 高效液相色譜圖

3.2.2 流動相的選擇 實驗中參考部分文獻，以文獻記載流動相:甲醇 - 水(80∶20，pH4.5)［2］為基礎(chǔ)，為考慮實驗效果，分別采用10%，20%，70%，80%，90%，100%的甲醇(或乙睛)和0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液的混合液作為流動相，改變甲醇(或乙睛)溶液和磷酸二氫鉀溶液的比值，發(fā)現(xiàn)當該比值在(40∶60)在相較于其他比例時更容易出峰，然后用100%的甲醇/水(或緩沖溶液)進行試驗，這樣可以很快地得到分離結(jié)果，然后根據(jù)出峰情況調(diào)整有機溶劑甲醇的比例和用磷酸調(diào)節(jié)pH。每次減少10%的有機溶劑甲醇的量，保留因子約增加3倍，調(diào)整的過程中，觀察各個峰的分離情況，發(fā)現(xiàn)當甲醇100%/0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液且流動相pH為2.9～3.1時出峰好，分離效果佳，而西布曲明用甲醇做時觀察峰的分離能達到理想效果，實驗中由于時間有限，所以在沒做乙腈做流動相時的實驗，所以最終選定100%的甲醇和和0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(60∶40，用磷酸調(diào)至pH2.9～3.1)作為流動相。

3.2.3 樣品的高效液相色譜圖 見圖1。

3.3 討論 確定樣品中有沒有加入鹽酸西布曲明相對較容易，通過簿層色譜就能分離檢視了，做簿層色譜中發(fā)現(xiàn)在鹽酸西布曲明的相應(yīng)斑點處有相應(yīng)的斑點。若是要最終確定是否添加有西布曲明則需要進一步的實驗確定。應(yīng)采用高效液相色譜法進行定性的檢測，對確定為西布曲明有決定性的作用。

曾分別采用50%甲醇，甲醇，二次水為溶劑，進行樣品的提取溶劑的比較，試驗結(jié)果證明，在其他條件完全相同的情況下，其中50%甲醇會使藥品中的有效成分溶解不完全，而二次水提取的樣品雜質(zhì)峰較多，所以選擇了甲醇作為溶劑本實驗在開始時供試品溶液的制備時采用了超聲10，15，20min比較，發(fā)現(xiàn)15min的效果要好于10min的，但是20min的于15min的無明顯差異。所以采用以甲醇為溶劑經(jīng)過超聲處理15min的提取方法。

以上結(jié)果表明:本實驗?zāi)苡行У臋z測出中成藥中非法添加的鹽酸西布曲明，對于控制中藥品種質(zhì)量有實際意義。

［1］劉吉金，李軍等.減肥食品或保健品中非法添加鹽酸西布曲明、鹽酸芬氟拉明、酚酞的快速檢測方法研究［J］.藥物分析雜志，2006，26(6):793.

［2］胡娟，鄭春松，朱新法的等.減肥中成藥中添加西布曲明西藥成分的檢測［J］.中國藥學雜志，2006，41(12):945.