張敏等

[摘要] 目的 探討大鼠妊娠早期暴露有機(jī)磷農(nóng)藥毒死蜱對(duì)子代鼠成年后大腦氧化損傷與機(jī)制。方法 在母鼠妊娠后第6天至子鼠出生后第21天給予灌胃染毒，染毒劑量1/50LD50、1/100LD50、1/180LD50濃度的CPF和玉米油組。待子鼠長(zhǎng)到第8周后處死，處死取腦做勻漿測(cè)大腦勻漿中丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活力、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PXD）活力。結(jié)果 隨著染毒劑量的增加，SOD的活力、GSH-PX的活力下降；而MDA的含量增加，并呈現(xiàn)出一定的劑量反應(yīng)關(guān)系。各暴露染毒劑量組的上述指標(biāo)還與玉米油對(duì)照組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 妊娠期毒死蜱暴露對(duì)8周齡子鼠大腦組織具有神經(jīng)毒性，其機(jī)制可能與毒死蜱暴露至大腦氧化損傷有關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 毒死蜱；脂質(zhì)過氧化；丙二醛；超氧化物歧化酶；谷胱甘肽過氧化物酶

[中圖分類號(hào)] R473.6 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2014）03（c）-0003-03

[Abstract] Objective To discuss whether there is any oxidative damage in the adult offspring rats brain because of wistar rats exposed to organ phosphorus pesticide chlorpyrifos in early pregnancy.Methods Stomach virus infected dose of 1/50 LD50， 1/100 LD50 group， 1/180 LD50 concentration of CPF and corn oil were given to the mother rats intragastrically from the sixth day that the mother rats getting pregnancy to the twenty-first day after the rats born. The rats were put to death 8 weeks after born， then malondialdehyde （MDA） content， superoxide dismutase （SOD） activity and glutathione peroxidase （GSH-PX） dynamic of brain were tested. Results As the increase of decreasing dose， the vigor of SOD and GSH-PX reduced； the content of MDA increased， and there was a dose-response relationship. There were statistically significant differences in the above indicators between every infected dose and corn oil control group （P<0.05）.Conclusion There is certain oxidative damage on the brain of 8-week old rat adult offspring because of gestational exposure to low concentration chlorpyrifos.

[Key words] Chlorpyrifos； Lipid peroxidation； Malondialdehyde； Superoxide dismutase；Glutathione peroxidase

毒死蜱是美國(guó)陶氏化學(xué)公司于1965年開發(fā)研制出來的一種高效、低毒、廣譜、低殘留和低抗藥性的有機(jī)磷殺蟲殺螨劑[1] 。毒死蜱在使用中容易在瓜果蔬菜表面殘留，以及其在生物體內(nèi)富集，導(dǎo)致毒死蜱暴露者——人和動(dòng)物產(chǎn)生多種毒性反應(yīng)[2]。由于毒死蜱具有親脂性，進(jìn)入體內(nèi)的毒死蜱可以通過血腦屏障進(jìn)入大腦。而且毒死蜱還可以通過胎盤屏障進(jìn)入胎兒的體內(nèi)[3]。故毒死蜱的廣泛大量的使用引起了人們對(duì)其慢性毒性作用以及對(duì)生態(tài)環(huán)境影響的擔(dān)憂和重視，雖然國(guó)內(nèi)外已就毒死蜱的全身及慢性中毒作用開展了研究探討，但是毒死蜱對(duì)生物體妊娠期暴露染毒致子代成年后神經(jīng)系統(tǒng)的損傷和脂質(zhì)過氧化機(jī)制研究報(bào)道所見不多，因此2012年6—12月間就此開展動(dòng)物體內(nèi)妊娠期毒死蜱暴露染毒致子代成年后神經(jīng)系統(tǒng)損傷以及有關(guān)機(jī)制研究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康3周齡wistar大鼠：雌鼠40只，體重60～80 g；雄鼠20只，體重70～90 g。動(dòng)物購(gòu)于內(nèi)蒙古實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，符合國(guó)家二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，合格證號(hào)8806R011。自由飲水及進(jìn)食。

1.1.2 主要試劑 97﹪毒死蜱農(nóng)藥；MDA、SOD、GSH-PX試劑盒。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物模型的建立 選擇3周齡Wistar大鼠，40只雌鼠與20只雄鼠，自由飲水及進(jìn)食，養(yǎng)至成年。成年后雌雄以2∶1的比例合籠交配，確認(rèn)雌鼠妊娠后將其隨機(jī)分為4組：對(duì)照組（玉米油溶劑組）和CPF濃度分別為1/50LD50、1/100LD50、1/180LD50（LD50為135 mg）的3個(gè)暴露組，于GD6（gestation days，GD，妊娠后6 d）～PND21（postnatal days，PND，出生后21 d）經(jīng)灌胃給予雌鼠染毒。子鼠出生后21 d斷乳，并繼續(xù)自由飼養(yǎng)至8周齡處死。

因經(jīng)口暴露染毒能更好的控制劑量，故采用灌胃染毒。而胎鼠和新生鼠則通過母鼠間接染毒即CPF通過胎盤和乳汁對(duì)仔鼠染毒。同時(shí)，GD6到PND21是子鼠大腦器官形成到神經(jīng)發(fā)育成熟時(shí)期。本實(shí)驗(yàn)選擇通過母鼠染毒子鼠神經(jīng)發(fā)育敏感階段間接暴露毒死蜱的。以評(píng)價(jià)受試物毒死蜱在整個(gè)神經(jīng)發(fā)育階段染毒對(duì)子代出生后發(fā)育影響的毒性作用。

1.2.2 10%大腦組織勻漿的制備 子鼠飼養(yǎng)8周齡末乙醚麻醉，心臟采血處死；即刻分離摘取大腦，并將其縱向分成兩半，左側(cè)大腦稱重后甲醛固定待檢；右側(cè)大腦稱重后放入離心管中，加入其重量9倍體積的預(yù)冷0.9%的生理鹽水，用組織勻漿機(jī)充分研磨制備10%大腦組織勻漿，繼而3 000 r/min、10 min離心，上清備用。

1.2.3 腦組織神經(jīng)毒性及其氧化損傷指標(biāo)的檢測(cè) 利用南京建成生物工程研究所試劑盒檢測(cè)8周齡子鼠10%大腦組織勻漿中谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA），具體操作按照說明書實(shí)施。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)統(tǒng)計(jì)分析。體重、腦重、臟器系數(shù)、MDA含量、SOD活力、GSH—PX活力等為計(jì)量資料采用方差分析各組差異；非正態(tài)資料和方差不齊的資料用秩和檢驗(yàn)分析。2 結(jié)果

2.1 毒死蜱對(duì)子代鼠臟器系數(shù)的影響

臟器系數(shù)的計(jì)算公式： 臟器系數(shù)（%）=（臟器重量/體重）×100%

經(jīng)SPSS軟件的方差分析，各劑量組間8周齡大鼠體重和大腦重的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=0.23，P=0.88>0.05；F=0.67，P=0.58>0.05），但伴隨染毒劑量的增加大鼠體重和大腦重均呈現(xiàn)下降趨勢(shì)；同時(shí)各劑量組間大腦臟器系數(shù)隨染毒劑量的增加也有下降的趨勢(shì)（F=0.67，P=0.58>0.05），見表1。

2.2 妊娠期毒死蜱暴露對(duì)8周齡子鼠大腦SOD活力的影響

GD6～PND21毒死蜱暴露后，各暴露染毒劑量組8周齡子鼠的SOD活力的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=44.77，P<0.05），經(jīng)SNK法進(jìn)一步兩兩比較發(fā)現(xiàn)各染毒劑量組的SOD活力均低于玉米油溶劑對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。而1/100LD50組與1/50LD50組間SOD活力的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.61>0.05），但仍然能看出隨著CPF劑量下降，腦中SOD活力有下降的趨勢(shì)，見表2。

2.3 妊娠期暴露CPF對(duì)8周齡子鼠成年后GSH-PX活力的影響

上述各劑量組的數(shù)據(jù)資料基本服從正太分布，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），因方差不齊，后經(jīng)自然對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換發(fā)差齊且P>0.1，各暴露染毒劑量組間GSH-PX活力的差異經(jīng)SPSS分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=23.45，P<0.05）。進(jìn)一步SNK法比較顯示：1/180LD50劑量組與玉米油對(duì)照組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.36>0.05）；而1/100 LD50與1/50LD50組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.744>0.05）。但是1/100LD50組、1/50LD50組中分別與1/180LD50組、玉米油對(duì)照組比較，GSH-PX活力差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且隨著染毒劑量的增加有下降趨勢(shì)。見表3。

2.4 妊娠期暴露毒死蜱對(duì)8周齡子鼠大腦中MDA含量的影響

經(jīng)過方差分析可見，各暴露染毒劑量組8周齡子鼠大腦中MDA含量的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=53.49，P<0.05）。經(jīng)SNK法進(jìn)一步兩兩比較發(fā)現(xiàn)，任意兩組間總體均數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。各劑量組MDA的含量隨著染毒劑量的增加而增加，并呈現(xiàn)劑量-反應(yīng)關(guān)系。見表4。

3 討論

臟器系數(shù)又稱臟體比，是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物某臟器的重量與其體重之比值。通常各臟器與體重的比值比較恒定。動(dòng)物染毒后，受損臟器重量可以發(fā)生改變，故臟器系數(shù)也隨之而改變。該次實(shí)驗(yàn)根據(jù)設(shè)計(jì)選擇大鼠大腦組織，結(jié)果顯示各劑量組體重、大腦重及臟器系數(shù)的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；但這些指標(biāo)卻伴隨著染毒劑量的增加均有下降趨勢(shì)，該下降趨勢(shì)提示大腦可能是毒死蜱毒作用的潛在靶器官。

SOD是一種廣泛存在生物體內(nèi)，能夠清除生物體內(nèi)的超氧陰離子自由基，維持機(jī)體中自由基產(chǎn)生和清除動(dòng)態(tài)平衡的一種金屬酶，具有保護(hù)生物體，防止衰老和治療疾病等作用 [4] 。是細(xì)胞內(nèi)抗脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的酶的保護(hù)系統(tǒng)的重要成分[5]。該研究實(shí)驗(yàn)顯示：毒死蜱各染毒暴露劑量組的子鼠腦SOD活力均低于溶劑對(duì)照組（玉米油組）。提示毒死蜱可能造成大腦的氧化損傷。且損傷程度（SOD活力的下降）可能與毒死蜱染毒劑量呈負(fù)相關(guān)。而結(jié)果中1/100LD50組與1/50LD50組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能源于已近成熟的8周子鼠身體是代償機(jī)制的補(bǔ)償作用所致。

GSH-PX是生物機(jī)體內(nèi)重要的抗氧化酶之一，它可以消除機(jī)體內(nèi)的過氧化氫及脂質(zhì)過氧化物，阻斷活性氧自由基對(duì)機(jī)體的進(jìn)一步損傷，是生物體內(nèi)重要的活性氧自由基清除劑[6]。該實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示：1/180LD50劑量組和玉米油組GSH-PX活力高于1/50LD50、1/100LD50劑量組，說明低劑量暴露組子鼠大腦中可致大腦損傷的自由基較少，從而GSH-PX消耗相應(yīng)就少；但是中劑量暴露組與高劑量暴露組之間、低劑量暴露組和玉米油對(duì)照組之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其原因可能是子代鼠在生長(zhǎng)發(fā)育過程中通過母體暴露毒死蜱的劑量往往不利控制，加之子鼠個(gè)體的差異和生理的代償機(jī)制的差異的影響。

MDA是氧自由基引起脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物，是反映氧自由基損害程度的重要指標(biāo)[7] 。組織中MDA含量的多少表示脂質(zhì)過氧化的強(qiáng)度。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：MDA的含量隨著染毒劑量的增加而升高，且呈現(xiàn)出劑量-反應(yīng)關(guān)系。說明各染毒暴露劑量組的子鼠大腦受到不同程度的氧化損傷，而染毒的劑量越高，產(chǎn)生的脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物越多。

生物體內(nèi)的氧化代謝會(huì)產(chǎn)生少量的自由基，但是在一些損傷因素作用下可以誘導(dǎo)體內(nèi)大量自由基的堆積，細(xì)胞中抗氧化保護(hù)機(jī)制不足時(shí)，使活性氧產(chǎn)生堆積并對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性，從而產(chǎn)生氧化和抗氧化的不平衡狀態(tài)，這種狀態(tài)稱為氧化應(yīng)激。所以大腦在受到損傷后，抗氧化應(yīng)激的酶類SOD和GSH-PX就會(huì)產(chǎn)生消耗。該實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)也顯示出來隨著劑量的增加這兩個(gè)酶活力的變化趨勢(shì)，表明抗氧化系統(tǒng)啟動(dòng)，腦組織受到氧化損傷。而氧化損傷的終產(chǎn)物MDA更是由劑量反應(yīng)關(guān)系反應(yīng)了腦組織的損傷程度。實(shí)驗(yàn)提示大家在1/50LD50、1/100LD50、1/180LD50劑量的毒死蜱還是會(huì)通過母體造成孩子成年后的腦組織的氧化損傷，要引起人們的重視。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 李亞楠，劉晶晶，陳少華，等.毒死蜱的應(yīng)用現(xiàn)狀及降解研究進(jìn)展[J].廣州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011（6）：92-97.

[2] 羅鵬飛，張永青，蘇健，等.毒死蜱的毒性及其對(duì)人類的危害[J].江蘇預(yù)防醫(yī)學(xué)，2013（7）：36-38.

[3] Parran DK.Magnin G，Li W，et al.ChlorpyrifosaltersfunctiongalintegrityandstructureofaninvitroBBBmodel：co-culturesofbpvineendothelialcellsandneonatalratastrocytes[J].Neurotoxicology，2005，26（1）：77-78.

[4] 李勇.超氧化物歧化酶（SOD）的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].生物化工材料工程研究，2007，12，24（6）：9-11.

[5] 雷小英，李素平.毒死蜱對(duì)大鼠脂質(zhì)過氧化的影響[J].工業(yè)衛(wèi)生與職業(yè)病，2010，36（5）：258-260.

[6] 鄒劍鋒，呂紹武.具有谷胱甘肽過氧化物酶活力的含硒四肽[J].高等學(xué)?；瘜W(xué)學(xué)報(bào)，2012，（5）：983-987.

[7] 郭占京，黃宏妙，梁曉艷，等，肉桂水提高對(duì)腦缺血在灌注損傷大鼠各組織中丙二醛和超氧化物歧化酶的影響[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2011，22（12）：2900-2901.

（收稿日期：2013-12-11）

1.2.2 10%大腦組織勻漿的制備 子鼠飼養(yǎng)8周齡末乙醚麻醉，心臟采血處死；即刻分離摘取大腦，并將其縱向分成兩半，左側(cè)大腦稱重后甲醛固定待檢；右側(cè)大腦稱重后放入離心管中，加入其重量9倍體積的預(yù)冷0.9%的生理鹽水，用組織勻漿機(jī)充分研磨制備10%大腦組織勻漿，繼而3 000 r/min、10 min離心，上清備用。

1.2.3 腦組織神經(jīng)毒性及其氧化損傷指標(biāo)的檢測(cè) 利用南京建成生物工程研究所試劑盒檢測(cè)8周齡子鼠10%大腦組織勻漿中谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA），具體操作按照說明書實(shí)施。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)統(tǒng)計(jì)分析。體重、腦重、臟器系數(shù)、MDA含量、SOD活力、GSH—PX活力等為計(jì)量資料采用方差分析各組差異；非正態(tài)資料和方差不齊的資料用秩和檢驗(yàn)分析。2 結(jié)果

2.1 毒死蜱對(duì)子代鼠臟器系數(shù)的影響

臟器系數(shù)的計(jì)算公式： 臟器系數(shù)（%）=（臟器重量/體重）×100%

經(jīng)SPSS軟件的方差分析，各劑量組間8周齡大鼠體重和大腦重的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=0.23，P=0.88>0.05；F=0.67，P=0.58>0.05），但伴隨染毒劑量的增加大鼠體重和大腦重均呈現(xiàn)下降趨勢(shì)；同時(shí)各劑量組間大腦臟器系數(shù)隨染毒劑量的增加也有下降的趨勢(shì)（F=0.67，P=0.58>0.05），見表1。

2.2 妊娠期毒死蜱暴露對(duì)8周齡子鼠大腦SOD活力的影響

GD6～PND21毒死蜱暴露后，各暴露染毒劑量組8周齡子鼠的SOD活力的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=44.77，P<0.05），經(jīng)SNK法進(jìn)一步兩兩比較發(fā)現(xiàn)各染毒劑量組的SOD活力均低于玉米油溶劑對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。而1/100LD50組與1/50LD50組間SOD活力的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.61>0.05），但仍然能看出隨著CPF劑量下降，腦中SOD活力有下降的趨勢(shì)，見表2。

2.3 妊娠期暴露CPF對(duì)8周齡子鼠成年后GSH-PX活力的影響

上述各劑量組的數(shù)據(jù)資料基本服從正太分布，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），因方差不齊，后經(jīng)自然對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換發(fā)差齊且P>0.1，各暴露染毒劑量組間GSH-PX活力的差異經(jīng)SPSS分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=23.45，P<0.05）。進(jìn)一步SNK法比較顯示：1/180LD50劑量組與玉米油對(duì)照組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.36>0.05）；而1/100 LD50與1/50LD50組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.744>0.05）。但是1/100LD50組、1/50LD50組中分別與1/180LD50組、玉米油對(duì)照組比較，GSH-PX活力差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且隨著染毒劑量的增加有下降趨勢(shì)。見表3。

2.4 妊娠期暴露毒死蜱對(duì)8周齡子鼠大腦中MDA含量的影響

經(jīng)過方差分析可見，各暴露染毒劑量組8周齡子鼠大腦中MDA含量的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=53.49，P<0.05）。經(jīng)SNK法進(jìn)一步兩兩比較發(fā)現(xiàn)，任意兩組間總體均數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。各劑量組MDA的含量隨著染毒劑量的增加而增加，并呈現(xiàn)劑量-反應(yīng)關(guān)系。見表4。

3 討論

臟器系數(shù)又稱臟體比，是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物某臟器的重量與其體重之比值。通常各臟器與體重的比值比較恒定。動(dòng)物染毒后，受損臟器重量可以發(fā)生改變，故臟器系數(shù)也隨之而改變。該次實(shí)驗(yàn)根據(jù)設(shè)計(jì)選擇大鼠大腦組織，結(jié)果顯示各劑量組體重、大腦重及臟器系數(shù)的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；但這些指標(biāo)卻伴隨著染毒劑量的增加均有下降趨勢(shì)，該下降趨勢(shì)提示大腦可能是毒死蜱毒作用的潛在靶器官。

SOD是一種廣泛存在生物體內(nèi)，能夠清除生物體內(nèi)的超氧陰離子自由基，維持機(jī)體中自由基產(chǎn)生和清除動(dòng)態(tài)平衡的一種金屬酶，具有保護(hù)生物體，防止衰老和治療疾病等作用 [4] 。是細(xì)胞內(nèi)抗脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的酶的保護(hù)系統(tǒng)的重要成分[5]。該研究實(shí)驗(yàn)顯示：毒死蜱各染毒暴露劑量組的子鼠腦SOD活力均低于溶劑對(duì)照組（玉米油組）。提示毒死蜱可能造成大腦的氧化損傷。且損傷程度（SOD活力的下降）可能與毒死蜱染毒劑量呈負(fù)相關(guān)。而結(jié)果中1/100LD50組與1/50LD50組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能源于已近成熟的8周子鼠身體是代償機(jī)制的補(bǔ)償作用所致。

GSH-PX是生物機(jī)體內(nèi)重要的抗氧化酶之一，它可以消除機(jī)體內(nèi)的過氧化氫及脂質(zhì)過氧化物，阻斷活性氧自由基對(duì)機(jī)體的進(jìn)一步損傷，是生物體內(nèi)重要的活性氧自由基清除劑[6]。該實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示：1/180LD50劑量組和玉米油組GSH-PX活力高于1/50LD50、1/100LD50劑量組，說明低劑量暴露組子鼠大腦中可致大腦損傷的自由基較少，從而GSH-PX消耗相應(yīng)就少；但是中劑量暴露組與高劑量暴露組之間、低劑量暴露組和玉米油對(duì)照組之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其原因可能是子代鼠在生長(zhǎng)發(fā)育過程中通過母體暴露毒死蜱的劑量往往不利控制，加之子鼠個(gè)體的差異和生理的代償機(jī)制的差異的影響。

MDA是氧自由基引起脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物，是反映氧自由基損害程度的重要指標(biāo)[7] 。組織中MDA含量的多少表示脂質(zhì)過氧化的強(qiáng)度。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：MDA的含量隨著染毒劑量的增加而升高，且呈現(xiàn)出劑量-反應(yīng)關(guān)系。說明各染毒暴露劑量組的子鼠大腦受到不同程度的氧化損傷，而染毒的劑量越高，產(chǎn)生的脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物越多。

生物體內(nèi)的氧化代謝會(huì)產(chǎn)生少量的自由基，但是在一些損傷因素作用下可以誘導(dǎo)體內(nèi)大量自由基的堆積，細(xì)胞中抗氧化保護(hù)機(jī)制不足時(shí)，使活性氧產(chǎn)生堆積并對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性，從而產(chǎn)生氧化和抗氧化的不平衡狀態(tài)，這種狀態(tài)稱為氧化應(yīng)激。所以大腦在受到損傷后，抗氧化應(yīng)激的酶類SOD和GSH-PX就會(huì)產(chǎn)生消耗。該實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)也顯示出來隨著劑量的增加這兩個(gè)酶活力的變化趨勢(shì)，表明抗氧化系統(tǒng)啟動(dòng)，腦組織受到氧化損傷。而氧化損傷的終產(chǎn)物MDA更是由劑量反應(yīng)關(guān)系反應(yīng)了腦組織的損傷程度。實(shí)驗(yàn)提示大家在1/50LD50、1/100LD50、1/180LD50劑量的毒死蜱還是會(huì)通過母體造成孩子成年后的腦組織的氧化損傷，要引起人們的重視。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 李亞楠，劉晶晶，陳少華，等.毒死蜱的應(yīng)用現(xiàn)狀及降解研究進(jìn)展[J].廣州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011（6）：92-97.

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[3] Parran DK.Magnin G，Li W，et al.ChlorpyrifosaltersfunctiongalintegrityandstructureofaninvitroBBBmodel：co-culturesofbpvineendothelialcellsandneonatalratastrocytes[J].Neurotoxicology，2005，26（1）：77-78.

[4] 李勇.超氧化物歧化酶（SOD）的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].生物化工材料工程研究，2007，12，24（6）：9-11.

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[6] 鄒劍鋒，呂紹武.具有谷胱甘肽過氧化物酶活力的含硒四肽[J].高等學(xué)校化學(xué)學(xué)報(bào)，2012，（5）：983-987.

[7] 郭占京，黃宏妙，梁曉艷，等，肉桂水提高對(duì)腦缺血在灌注損傷大鼠各組織中丙二醛和超氧化物歧化酶的影響[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2011，22（12）：2900-2901.

（收稿日期：2013-12-11）

1.2.2 10%大腦組織勻漿的制備 子鼠飼養(yǎng)8周齡末乙醚麻醉，心臟采血處死；即刻分離摘取大腦，并將其縱向分成兩半，左側(cè)大腦稱重后甲醛固定待檢；右側(cè)大腦稱重后放入離心管中，加入其重量9倍體積的預(yù)冷0.9%的生理鹽水，用組織勻漿機(jī)充分研磨制備10%大腦組織勻漿，繼而3 000 r/min、10 min離心，上清備用。

1.2.3 腦組織神經(jīng)毒性及其氧化損傷指標(biāo)的檢測(cè) 利用南京建成生物工程研究所試劑盒檢測(cè)8周齡子鼠10%大腦組織勻漿中谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA），具體操作按照說明書實(shí)施。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)統(tǒng)計(jì)分析。體重、腦重、臟器系數(shù)、MDA含量、SOD活力、GSH—PX活力等為計(jì)量資料采用方差分析各組差異；非正態(tài)資料和方差不齊的資料用秩和檢驗(yàn)分析。2 結(jié)果

2.1 毒死蜱對(duì)子代鼠臟器系數(shù)的影響

臟器系數(shù)的計(jì)算公式： 臟器系數(shù)（%）=（臟器重量/體重）×100%

經(jīng)SPSS軟件的方差分析，各劑量組間8周齡大鼠體重和大腦重的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=0.23，P=0.88>0.05；F=0.67，P=0.58>0.05），但伴隨染毒劑量的增加大鼠體重和大腦重均呈現(xiàn)下降趨勢(shì)；同時(shí)各劑量組間大腦臟器系數(shù)隨染毒劑量的增加也有下降的趨勢(shì)（F=0.67，P=0.58>0.05），見表1。

2.2 妊娠期毒死蜱暴露對(duì)8周齡子鼠大腦SOD活力的影響

GD6～PND21毒死蜱暴露后，各暴露染毒劑量組8周齡子鼠的SOD活力的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=44.77，P<0.05），經(jīng)SNK法進(jìn)一步兩兩比較發(fā)現(xiàn)各染毒劑量組的SOD活力均低于玉米油溶劑對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。而1/100LD50組與1/50LD50組間SOD活力的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.61>0.05），但仍然能看出隨著CPF劑量下降，腦中SOD活力有下降的趨勢(shì)，見表2。

2.3 妊娠期暴露CPF對(duì)8周齡子鼠成年后GSH-PX活力的影響

上述各劑量組的數(shù)據(jù)資料基本服從正太分布，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），因方差不齊，后經(jīng)自然對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換發(fā)差齊且P>0.1，各暴露染毒劑量組間GSH-PX活力的差異經(jīng)SPSS分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=23.45，P<0.05）。進(jìn)一步SNK法比較顯示：1/180LD50劑量組與玉米油對(duì)照組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.36>0.05）；而1/100 LD50與1/50LD50組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.744>0.05）。但是1/100LD50組、1/50LD50組中分別與1/180LD50組、玉米油對(duì)照組比較，GSH-PX活力差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且隨著染毒劑量的增加有下降趨勢(shì)。見表3。

2.4 妊娠期暴露毒死蜱對(duì)8周齡子鼠大腦中MDA含量的影響

經(jīng)過方差分析可見，各暴露染毒劑量組8周齡子鼠大腦中MDA含量的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=53.49，P<0.05）。經(jīng)SNK法進(jìn)一步兩兩比較發(fā)現(xiàn)，任意兩組間總體均數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。各劑量組MDA的含量隨著染毒劑量的增加而增加，并呈現(xiàn)劑量-反應(yīng)關(guān)系。見表4。

3 討論

臟器系數(shù)又稱臟體比，是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物某臟器的重量與其體重之比值。通常各臟器與體重的比值比較恒定。動(dòng)物染毒后，受損臟器重量可以發(fā)生改變，故臟器系數(shù)也隨之而改變。該次實(shí)驗(yàn)根據(jù)設(shè)計(jì)選擇大鼠大腦組織，結(jié)果顯示各劑量組體重、大腦重及臟器系數(shù)的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；但這些指標(biāo)卻伴隨著染毒劑量的增加均有下降趨勢(shì)，該下降趨勢(shì)提示大腦可能是毒死蜱毒作用的潛在靶器官。

SOD是一種廣泛存在生物體內(nèi)，能夠清除生物體內(nèi)的超氧陰離子自由基，維持機(jī)體中自由基產(chǎn)生和清除動(dòng)態(tài)平衡的一種金屬酶，具有保護(hù)生物體，防止衰老和治療疾病等作用 [4] 。是細(xì)胞內(nèi)抗脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的酶的保護(hù)系統(tǒng)的重要成分[5]。該研究實(shí)驗(yàn)顯示：毒死蜱各染毒暴露劑量組的子鼠腦SOD活力均低于溶劑對(duì)照組（玉米油組）。提示毒死蜱可能造成大腦的氧化損傷。且損傷程度（SOD活力的下降）可能與毒死蜱染毒劑量呈負(fù)相關(guān)。而結(jié)果中1/100LD50組與1/50LD50組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能源于已近成熟的8周子鼠身體是代償機(jī)制的補(bǔ)償作用所致。

GSH-PX是生物機(jī)體內(nèi)重要的抗氧化酶之一，它可以消除機(jī)體內(nèi)的過氧化氫及脂質(zhì)過氧化物，阻斷活性氧自由基對(duì)機(jī)體的進(jìn)一步損傷，是生物體內(nèi)重要的活性氧自由基清除劑[6]。該實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示：1/180LD50劑量組和玉米油組GSH-PX活力高于1/50LD50、1/100LD50劑量組，說明低劑量暴露組子鼠大腦中可致大腦損傷的自由基較少，從而GSH-PX消耗相應(yīng)就少；但是中劑量暴露組與高劑量暴露組之間、低劑量暴露組和玉米油對(duì)照組之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其原因可能是子代鼠在生長(zhǎng)發(fā)育過程中通過母體暴露毒死蜱的劑量往往不利控制，加之子鼠個(gè)體的差異和生理的代償機(jī)制的差異的影響。

MDA是氧自由基引起脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物，是反映氧自由基損害程度的重要指標(biāo)[7] 。組織中MDA含量的多少表示脂質(zhì)過氧化的強(qiáng)度。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：MDA的含量隨著染毒劑量的增加而升高，且呈現(xiàn)出劑量-反應(yīng)關(guān)系。說明各染毒暴露劑量組的子鼠大腦受到不同程度的氧化損傷，而染毒的劑量越高，產(chǎn)生的脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物越多。

生物體內(nèi)的氧化代謝會(huì)產(chǎn)生少量的自由基，但是在一些損傷因素作用下可以誘導(dǎo)體內(nèi)大量自由基的堆積，細(xì)胞中抗氧化保護(hù)機(jī)制不足時(shí)，使活性氧產(chǎn)生堆積并對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性，從而產(chǎn)生氧化和抗氧化的不平衡狀態(tài)，這種狀態(tài)稱為氧化應(yīng)激。所以大腦在受到損傷后，抗氧化應(yīng)激的酶類SOD和GSH-PX就會(huì)產(chǎn)生消耗。該實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)也顯示出來隨著劑量的增加這兩個(gè)酶活力的變化趨勢(shì)，表明抗氧化系統(tǒng)啟動(dòng)，腦組織受到氧化損傷。而氧化損傷的終產(chǎn)物MDA更是由劑量反應(yīng)關(guān)系反應(yīng)了腦組織的損傷程度。實(shí)驗(yàn)提示大家在1/50LD50、1/100LD50、1/180LD50劑量的毒死蜱還是會(huì)通過母體造成孩子成年后的腦組織的氧化損傷，要引起人們的重視。

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（收稿日期：2013-12-11）