梁霄　莫建光　劉布鳴　黃艷　高微　黎凱群　黎奕良

【摘要】目的：建立金花茶葉的薄層色譜鑒別方法。方法：采用薄層色譜法分別鑒別金花茶葉中的齊墩果酸、蘆丁和人參皂苷Rg1等化學(xué)成分。結(jié)果：齊墩果酸、蘆丁和人參皂苷Rg1分別在以石油醚-乙酸乙酯-丙酮（7∶2∶1）、乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸（9∶2∶1∶01）和氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水（3∶8∶44∶16）為展開劑的條件下獲得理想分離，且在同一點樣量和展開條件下，三個金花茶品種中的齊墩果酸、蘆丁、人參皂苷Rg1斑點均有明顯差異。結(jié)論：該方法簡便、快速，可更好地控制金花茶葉的藥材質(zhì)量。

【關(guān)鍵詞】金花茶葉； 齊墩果酸；蘆丁；人參皂苷Rg1；TLC

【中圖分類號】R2842【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2014）21-0008-02

金花茶（Camellia chrysantha）是山茶科山茶屬金花茶組金花茶系植物。它是廣西壯族民間的一種傳統(tǒng)中草藥，其葉味微苦、澀，性平，主治痢疾，瘡瘍[1]?，F(xiàn)代研究證實，金花茶葉具有抑制惡性腫瘤、抑制肝癌作用，還具有降血脂、抗氧化和防止動脈粥樣硬化等作用[2-5]。金花茶暫未錄入 《中華人民共和國藥典》，關(guān)于其質(zhì)量控制標準的規(guī)定，目前尚屬空白，且金花茶品種較多，至今已知的金花茶有32種和7個變種[6]，不同品種含有的具體化學(xué)成分差別仍需進一步研究。文獻報道金花茶中含有齊墩果酸[7] 、蘆丁[8]、人參皂苷Rg1[9]等化學(xué)成分，因此本實驗分別對普通、東興、顯脈金花茶葉中該三種已知化學(xué)成分進行了薄層色譜鑒別研究，現(xiàn)報道如下。

1儀器與試藥

11儀器數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州國華電器有限公司）；KQ-5200B型超聲波清洗器（昆山市超聲清洗器有限公司）； ZF-I型三用紫外分析儀（上海顧村電光儀器廠）；100mm×0.5mm點樣毛細管（國藥集團化學(xué)試劑有限公司）；929薄層制版器（四川省中藥研究所重慶貝可得儀器技術(shù)公司）。

12試劑人參皂苷Rg1、齊墩果酸、蘆丁標準品（批號分別為：110703-200323；110709-200304；100080-201408；中國食品藥品檢定研究院）；薄層層析硅膠G（青島海洋化工有限公司分廠）；薄層層析硅膠GF254（青島海洋化工有限公司）；10cm×10cm硅膠G薄層層析板 （自制）；10cm×10cm GF254硅膠薄層層析板 （自制）；10cm×10 cm聚酰胺薄膜（上海摩速科學(xué)器材有限公司）；所用試劑均為分析純。

13藥材普通金花茶、東興金花茶、顯脈金花茶葉，于2013年7月采集于廣西防城港市，由廣西中醫(yī)藥研究院中藥研究所賴茂祥研究員鑒定為普通金花茶（Camellia nitidissima）、東興金花茶（Camellia tunghinensis）、顯脈金花茶（Camellia euphlebia Merrex Sealy）。陰干，粉碎機粉碎，過70目篩，即得。

2方法與結(jié)果

21齊墩果酸TLC鑒別

211對照品溶液的制備稱取齊墩果酸標準品適量置于5ml容量瓶中，純甲醇溶解，制得每毫升約含004mg齊墩果酸的對照品溶液。

212供試品溶液的制備分別稱取1g普通金花茶、東興金花茶、顯脈金花茶藥材，置于具塞錐形瓶中，加入95%乙醇50ml，靜置浸泡30min，超聲提取1h；過濾，取續(xù)濾液，蒸干，殘渣用甲醇溶解，置于5ml容量瓶中，定容，得供試品A（普通金花茶）、B（東興金花茶）、C（顯脈金花茶）。

213薄層色譜鑒別方法普通硅膠板點樣，取齊墩果酸對照品溶液、供試品A、供試品B、供試品C點樣，點樣量為9μl，石油醚-乙酸乙酯-丙酮（7∶2∶1）為展開劑，預(yù)飽和10min，10%硫酸乙醇溶液顯色，105℃的烘箱中烘7min，紫外燈（365nm）下檢視。結(jié)果見圖1。在齊墩果酸對照品斑點相同位置上，三個品種中普通金花茶齊墩果酸斑點明顯，顯脈金花茶齊墩果酸斑點較淡，東興金花茶齊墩果酸未見明顯斑點。

22蘆丁TLC鑒別

221對照品溶液的制備精密稱取蘆丁對照品適量置于5ml容量瓶中，純甲醇溶解，制得每毫升約含004mg蘆丁的對照品溶液。

222供試品溶液的制備分別稱取1g普通金花茶、東興金花茶、顯脈金花茶藥材，置于具塞錐形瓶中，加40ml氯仿溶液，60℃恒溫水浴鍋中加熱回流1h，過濾，棄去氯仿液，揮干藥渣，05ml蒸餾水?dāng)嚢铦櫇?，加?0ml水飽和正丁醇溶液，超聲處理30min，過濾，取濾液蒸干，殘渣用甲醇溶解并定容至5ml容量瓶中制得供試品D（普通金花茶）、E（東興金花茶）、F（顯脈金花茶）。

223薄層色譜鑒別方法GF254硅膠板點樣，點樣量9μL，乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸（9∶2∶1∶01）為展開劑，預(yù)飽和10min，展畢除去展開劑后于紫外燈光（254nm）下檢視。結(jié)果見圖2。在蘆丁對照品斑點相同位置上，三個品種中普通金花茶蘆丁斑點明顯，顯脈金花茶蘆丁斑點較淡，東興金花茶蘆丁未見斑點。

23人參皂苷TLC鑒別

231對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Rg1對照品適量，純甲醇溶解，制得每毫升約含004mg人參皂苷Rg1的對照品溶液。

232供試品溶液的制備分別精密稱取1g普通金花茶、東興金花茶、顯脈金花茶藥材，置于具塞錐形瓶中，加50%乙醇50ml，靜置浸泡30min，超聲提取1h；過濾，取續(xù)濾液，蒸干，殘渣用甲醇溶解，置于5ml容量瓶中，定容，得供試品G（普通金花茶）、H（東興金花茶）、I（顯脈金花茶）。

233薄層色譜鑒別方法 普通硅膠板點樣，點樣量為12μl，氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水（3∶8∶44∶16）為展開劑，預(yù)飽和10min，10%硫酸乙醇溶液顯色，105℃的烘箱中烘10min，紫外燈（365nm）下檢視。結(jié)果見圖3。在人參皂苷Rg1對照品斑點相同位置上，三個品種中普通金花茶人參皂苷Rg1斑點明顯，顯脈金花茶人參皂苷Rg1斑點較淡，東興金花茶人參皂苷Rg1未見明顯斑點。endprint

3討論

31展開劑的選擇在齊墩果酸TCL鑒別展開劑的選擇中，分別考察了石油醚-乙酸乙酯-丙酮（7∶2∶1）、正己烷-乙酸乙酯（10∶3）、氯仿-甲醇-冰醋酸（20∶1∶02）為展開劑，結(jié)果以石油醚-乙酸乙酯-丙酮（7∶2∶1）為展開劑展開斑點成點、清晰、圓整，干擾少；在蘆丁TCL鑒別展開劑選擇中，分別考察了乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸（9∶2∶1∶01）、乙醇-丙酮-水（7∶5∶6）、乙酸乙酯-甲酸-水（8∶1∶1）為展開劑，結(jié)果以乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸（9∶2∶1∶01）為展開劑展開斑點成點、清晰、圓整，干擾少；在人參皂苷Rg1的TCL鑒別展開劑選擇中，分別考察了氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水（3∶8∶44∶16）、氯仿-乙酸乙酯-甲醇-丙酮-甲酸（5∶1∶1∶1∶02）、氯仿-甲醇-水（13∶7∶2）為展開劑，結(jié)果以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水（3∶8∶44∶16）為展開劑展開斑點成點、清晰、圓整，干擾少。

32顯色劑的選擇在齊墩果酸和人參皂苷Rg1顯色劑的選擇中，分別以10%硫酸乙醇溶液、3%香草醛～5%硫酸乙醇溶液顯色，結(jié)果均顯示以10%硫酸乙醇溶液顯色斑點清晰，檢視效果好。

33提取方法的選擇在齊墩果酸提取條件的選擇中，取普通金花茶葉分別用50%乙醇、95%乙醇、50%甲醇、95%甲醇超聲提取，制得4份供試品溶液，同一薄層色譜條件展開，結(jié)果顯示95%乙醇提取的樣品溶液中齊墩果酸斑點最為清晰、明顯；在蘆丁提取條件的選擇中，取普通金花茶葉分別用50%乙醇、95%乙醇、50%甲醇、95%甲醇超聲提取，另按照222樣品溶液的制備的方法提取，共制得5份樣品溶液，同一薄層色譜條件展開，結(jié)果以222樣品溶液制備的方法所得的斑點成點、最清晰、干擾少；在人參皂苷Rg1提取條件的選擇中，取普通金花茶葉分別用50%乙醇、95%乙醇、50%甲醇、95%甲醇超聲提取，另按《中國藥典》中人參的人參皂苷Rg1薄層鑒別[10]方法提取，共制得5份供試品溶液，同一薄層色譜條件展開，結(jié)果顯示50%乙醇提取的樣品溶液中人參皂苷Rg1斑點最為清晰、明顯、干擾斑點少。

34薄層板的選擇在蘆丁薄層板的選擇中，分別考察了普通硅膠板、GF254硅膠板、聚酰胺薄膜進行比較，結(jié)果以GF254硅膠板上蘆丁斑點成點、清晰、圓整，干擾少，故以GF254硅膠薄層層析板作為金花茶葉中蘆丁鑒別的薄層板。

4結(jié)論

本實驗薄層色譜結(jié)果顯示，不同品種的金花茶中化學(xué)成分基本相似，但相同成分的含量相差較大，這三種成分均以普通金花茶中含量最高，東興金花茶中含量最低。但是，這三種成分是否為金花茶的主要藥效成分及這些成分含量的高低與金花茶的藥理作用相關(guān)性，還有待于進一步研究。

參考文獻

[1] 廣西醫(yī)藥研究所.廣西藥用植物名錄[M].廣西南寧：廣西人民出版社，1979：155.

[2] 秦小明，寧恩創(chuàng)，李建強.金花茶食品新資源的開發(fā)利用[J].廣西熱帶農(nóng)業(yè)，2005，（2）：20-22.

[3] 段小嫻，唐小嵐，蘇建家，等.金花茶對二乙基亞硝胺致大鼠肝癌抑制作用研究[J].醫(yī)學(xué)研究雜志，2006，35（6）：14-16.

[4] 寧恩創(chuàng)，秦小明，楊宏.金花茶葉水提物的降脂功能實驗研究[J].廣西大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2004，29（4）：350-352.

[5] 秦小明，林華娟，寧恩創(chuàng)，等.金花茶葉水提物的抗氧化活性研究[J].食品科技，2008，2：189-191.

[6] 蘇孔武.廣西金花茶開發(fā)探討[J].廣西農(nóng)學(xué)報，2010，25（4）：98-100.

[7] 黃艷，劉鵬，莫建光，等.顯脈金花茶葉的化學(xué)成分研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（28）：11336，11379.

[8] 黃永林，文永新，劉金磊，等.5種金花茶中總黃酮含量的測定[J].中國中醫(yī)藥科技，2009，16（1）：38-39.

[9] 蘇琳，莫建光，韋英亮，等.金花茶葉皂苷類成分研究[J].中草藥，2012， 43（5）：877-879.

[10] 中國國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S]（一部）.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010，22.

（收稿日期：20140807）endprint

3討論

31展開劑的選擇在齊墩果酸TCL鑒別展開劑的選擇中，分別考察了石油醚-乙酸乙酯-丙酮（7∶2∶1）、正己烷-乙酸乙酯（10∶3）、氯仿-甲醇-冰醋酸（20∶1∶02）為展開劑，結(jié)果以石油醚-乙酸乙酯-丙酮（7∶2∶1）為展開劑展開斑點成點、清晰、圓整，干擾少；在蘆丁TCL鑒別展開劑選擇中，分別考察了乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸（9∶2∶1∶01）、乙醇-丙酮-水（7∶5∶6）、乙酸乙酯-甲酸-水（8∶1∶1）為展開劑，結(jié)果以乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸（9∶2∶1∶01）為展開劑展開斑點成點、清晰、圓整，干擾少；在人參皂苷Rg1的TCL鑒別展開劑選擇中，分別考察了氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水（3∶8∶44∶16）、氯仿-乙酸乙酯-甲醇-丙酮-甲酸（5∶1∶1∶1∶02）、氯仿-甲醇-水（13∶7∶2）為展開劑，結(jié)果以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水（3∶8∶44∶16）為展開劑展開斑點成點、清晰、圓整，干擾少。

32顯色劑的選擇在齊墩果酸和人參皂苷Rg1顯色劑的選擇中，分別以10%硫酸乙醇溶液、3%香草醛～5%硫酸乙醇溶液顯色，結(jié)果均顯示以10%硫酸乙醇溶液顯色斑點清晰，檢視效果好。

33提取方法的選擇在齊墩果酸提取條件的選擇中，取普通金花茶葉分別用50%乙醇、95%乙醇、50%甲醇、95%甲醇超聲提取，制得4份供試品溶液，同一薄層色譜條件展開，結(jié)果顯示95%乙醇提取的樣品溶液中齊墩果酸斑點最為清晰、明顯；在蘆丁提取條件的選擇中，取普通金花茶葉分別用50%乙醇、95%乙醇、50%甲醇、95%甲醇超聲提取，另按照222樣品溶液的制備的方法提取，共制得5份樣品溶液，同一薄層色譜條件展開，結(jié)果以222樣品溶液制備的方法所得的斑點成點、最清晰、干擾少；在人參皂苷Rg1提取條件的選擇中，取普通金花茶葉分別用50%乙醇、95%乙醇、50%甲醇、95%甲醇超聲提取，另按《中國藥典》中人參的人參皂苷Rg1薄層鑒別[10]方法提取，共制得5份供試品溶液，同一薄層色譜條件展開，結(jié)果顯示50%乙醇提取的樣品溶液中人參皂苷Rg1斑點最為清晰、明顯、干擾斑點少。

34薄層板的選擇在蘆丁薄層板的選擇中，分別考察了普通硅膠板、GF254硅膠板、聚酰胺薄膜進行比較，結(jié)果以GF254硅膠板上蘆丁斑點成點、清晰、圓整，干擾少，故以GF254硅膠薄層層析板作為金花茶葉中蘆丁鑒別的薄層板。

4結(jié)論

本實驗薄層色譜結(jié)果顯示，不同品種的金花茶中化學(xué)成分基本相似，但相同成分的含量相差較大，這三種成分均以普通金花茶中含量最高，東興金花茶中含量最低。但是，這三種成分是否為金花茶的主要藥效成分及這些成分含量的高低與金花茶的藥理作用相關(guān)性，還有待于進一步研究。

參考文獻

[1] 廣西醫(yī)藥研究所.廣西藥用植物名錄[M].廣西南寧：廣西人民出版社，1979：155.

[2] 秦小明，寧恩創(chuàng)，李建強.金花茶食品新資源的開發(fā)利用[J].廣西熱帶農(nóng)業(yè)，2005，（2）：20-22.

[3] 段小嫻，唐小嵐，蘇建家，等.金花茶對二乙基亞硝胺致大鼠肝癌抑制作用研究[J].醫(yī)學(xué)研究雜志，2006，35（6）：14-16.

[4] 寧恩創(chuàng)，秦小明，楊宏.金花茶葉水提物的降脂功能實驗研究[J].廣西大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2004，29（4）：350-352.

[5] 秦小明，林華娟，寧恩創(chuàng)，等.金花茶葉水提物的抗氧化活性研究[J].食品科技，2008，2：189-191.

[6] 蘇孔武.廣西金花茶開發(fā)探討[J].廣西農(nóng)學(xué)報，2010，25（4）：98-100.

[7] 黃艷，劉鵬，莫建光，等.顯脈金花茶葉的化學(xué)成分研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（28）：11336，11379.

[8] 黃永林，文永新，劉金磊，等.5種金花茶中總黃酮含量的測定[J].中國中醫(yī)藥科技，2009，16（1）：38-39.

[9] 蘇琳，莫建光，韋英亮，等.金花茶葉皂苷類成分研究[J].中草藥，2012， 43（5）：877-879.

[10] 中國國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S]（一部）.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010，22.

（收稿日期：20140807）endprint

3討論

31展開劑的選擇在齊墩果酸TCL鑒別展開劑的選擇中，分別考察了石油醚-乙酸乙酯-丙酮（7∶2∶1）、正己烷-乙酸乙酯（10∶3）、氯仿-甲醇-冰醋酸（20∶1∶02）為展開劑，結(jié)果以石油醚-乙酸乙酯-丙酮（7∶2∶1）為展開劑展開斑點成點、清晰、圓整，干擾少；在蘆丁TCL鑒別展開劑選擇中，分別考察了乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸（9∶2∶1∶01）、乙醇-丙酮-水（7∶5∶6）、乙酸乙酯-甲酸-水（8∶1∶1）為展開劑，結(jié)果以乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸（9∶2∶1∶01）為展開劑展開斑點成點、清晰、圓整，干擾少；在人參皂苷Rg1的TCL鑒別展開劑選擇中，分別考察了氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水（3∶8∶44∶16）、氯仿-乙酸乙酯-甲醇-丙酮-甲酸（5∶1∶1∶1∶02）、氯仿-甲醇-水（13∶7∶2）為展開劑，結(jié)果以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水（3∶8∶44∶16）為展開劑展開斑點成點、清晰、圓整，干擾少。

32顯色劑的選擇在齊墩果酸和人參皂苷Rg1顯色劑的選擇中，分別以10%硫酸乙醇溶液、3%香草醛～5%硫酸乙醇溶液顯色，結(jié)果均顯示以10%硫酸乙醇溶液顯色斑點清晰，檢視效果好。

33提取方法的選擇在齊墩果酸提取條件的選擇中，取普通金花茶葉分別用50%乙醇、95%乙醇、50%甲醇、95%甲醇超聲提取，制得4份供試品溶液，同一薄層色譜條件展開，結(jié)果顯示95%乙醇提取的樣品溶液中齊墩果酸斑點最為清晰、明顯；在蘆丁提取條件的選擇中，取普通金花茶葉分別用50%乙醇、95%乙醇、50%甲醇、95%甲醇超聲提取，另按照222樣品溶液的制備的方法提取，共制得5份樣品溶液，同一薄層色譜條件展開，結(jié)果以222樣品溶液制備的方法所得的斑點成點、最清晰、干擾少；在人參皂苷Rg1提取條件的選擇中，取普通金花茶葉分別用50%乙醇、95%乙醇、50%甲醇、95%甲醇超聲提取，另按《中國藥典》中人參的人參皂苷Rg1薄層鑒別[10]方法提取，共制得5份供試品溶液，同一薄層色譜條件展開，結(jié)果顯示50%乙醇提取的樣品溶液中人參皂苷Rg1斑點最為清晰、明顯、干擾斑點少。

34薄層板的選擇在蘆丁薄層板的選擇中，分別考察了普通硅膠板、GF254硅膠板、聚酰胺薄膜進行比較，結(jié)果以GF254硅膠板上蘆丁斑點成點、清晰、圓整，干擾少，故以GF254硅膠薄層層析板作為金花茶葉中蘆丁鑒別的薄層板。

4結(jié)論

本實驗薄層色譜結(jié)果顯示，不同品種的金花茶中化學(xué)成分基本相似，但相同成分的含量相差較大，這三種成分均以普通金花茶中含量最高，東興金花茶中含量最低。但是，這三種成分是否為金花茶的主要藥效成分及這些成分含量的高低與金花茶的藥理作用相關(guān)性，還有待于進一步研究。

參考文獻

[1] 廣西醫(yī)藥研究所.廣西藥用植物名錄[M].廣西南寧：廣西人民出版社，1979：155.

[2] 秦小明，寧恩創(chuàng)，李建強.金花茶食品新資源的開發(fā)利用[J].廣西熱帶農(nóng)業(yè)，2005，（2）：20-22.

[3] 段小嫻，唐小嵐，蘇建家，等.金花茶對二乙基亞硝胺致大鼠肝癌抑制作用研究[J].醫(yī)學(xué)研究雜志，2006，35（6）：14-16.

[4] 寧恩創(chuàng)，秦小明，楊宏.金花茶葉水提物的降脂功能實驗研究[J].廣西大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2004，29（4）：350-352.

[5] 秦小明，林華娟，寧恩創(chuàng)，等.金花茶葉水提物的抗氧化活性研究[J].食品科技，2008，2：189-191.

[6] 蘇孔武.廣西金花茶開發(fā)探討[J].廣西農(nóng)學(xué)報，2010，25（4）：98-100.

[7] 黃艷，劉鵬，莫建光，等.顯脈金花茶葉的化學(xué)成分研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（28）：11336，11379.

[8] 黃永林，文永新，劉金磊，等.5種金花茶中總黃酮含量的測定[J].中國中醫(yī)藥科技，2009，16（1）：38-39.

[9] 蘇琳，莫建光，韋英亮，等.金花茶葉皂苷類成分研究[J].中草藥，2012， 43（5）：877-879.

[10] 中國國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S]（一部）.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010，22.

（收稿日期：20140807）endprint