劉敏杰

摘 要：為了研究金銀花的離體快繁技術(shù)，采用不同培養(yǎng)基配方對(duì)金銀花的芽尖進(jìn)行誘導(dǎo)、增殖并生根處理。結(jié)果表明：叢生芽誘導(dǎo)以MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1培養(yǎng)基為宜；增殖培養(yǎng)以MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.2mg·L-1培養(yǎng)基為宜，可獲得理想的效果，增殖倍數(shù)可達(dá)3.7倍；在1/2MS+IBA3.0mg·L-1+0.15%活性炭培養(yǎng)基上，可形成較發(fā)達(dá)的根系；試管苗移栽對(duì)基質(zhì)要求不嚴(yán)，移栽到疏松透氣的蛭石+珍珠+園土（1∶1∶1）混合基質(zhì)中，成活率高達(dá)92%。

關(guān)鍵詞：金銀花；組織培養(yǎng)；快速繁殖；培養(yǎng)基配方

中圖分類(lèi)號(hào) R282.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2014）21-21-02

金銀花（Lonicera japonica Thunb.）是忍冬科忍冬屬的多年生半常綠藤本植物，是一種珍貴的觀賞植物，也是我國(guó)特有的名貴中藥材，具有清熱、解毒、抗菌、增強(qiáng)免疫力等功效[1]。扦插繁殖和播種繁殖是金銀花的常用繁殖方式，然而這2種繁殖方式都易造成金銀花植株攜帶病毒、細(xì)菌等，使植株生長(zhǎng)不良，生產(chǎn)性能下降，植株及產(chǎn)品品質(zhì)下降。通過(guò)組織培養(yǎng)的方式繁育金銀花種苗，可使金銀花植株脫毒，且繁殖速度快、繁殖系數(shù)高，從而提高金銀花的產(chǎn)量和質(zhì)量[2]。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 信陽(yáng)當(dāng)?shù)匾吧疸y花，采自河南信陽(yáng)前進(jìn)鄉(xiāng)三橋村。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 外植體滅菌 取頂芽作為外植體，沖洗2～3遍，在低濃度的洗衣粉溶液中浸泡30min，再用軟刷刷洗，流水沖洗干凈。將外植體置于超凈工作臺(tái)中，用75%酒精浸泡30s，無(wú)菌水沖洗2～3次，再用0.1%升汞溶液消毒5min，無(wú)菌水沖洗4～5次，然后用消毒濾紙吸干表面水分，備用[3]。

1.2.2 誘導(dǎo)培養(yǎng) 金銀花誘導(dǎo)培養(yǎng)選用MS作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并加入不同種類(lèi)和配比的植物生長(zhǎng)物質(zhì)。將經(jīng)過(guò)消毒滅菌處理的外植體，分別接種于不同培養(yǎng)基中，每種處理接30瓶，每瓶接種1個(gè)外植體，重復(fù)3次，篩選出芽萌動(dòng)率高的培養(yǎng)基。

1.2.3 增殖培養(yǎng) 增殖培養(yǎng)以MS培養(yǎng)基加不同種類(lèi)的細(xì)胞分裂素，將叢生芽分別接種于繼代培養(yǎng)基中進(jìn)行金銀花的增殖培養(yǎng)。每種處理接種30瓶，每瓶接種1個(gè)外植體，重復(fù)3次，觀察不定芽的分化情況，選出分化率較高的激素配比。

1.2.4 生根培養(yǎng) 待叢生芽長(zhǎng)至2cm高時(shí)，轉(zhuǎn)接到1/2MS及1/2MS加不同濃度IBA的生根培養(yǎng)基上，并各加0.15%的活性炭。每種處理接種30個(gè)幼苗，重復(fù)3次，觀察不定根的形成過(guò)程，選出最佳生根培養(yǎng)基。

1.2.5 培養(yǎng)條件 MS培養(yǎng)基中蔗糖濃度為30g·L-1，1/2MS培養(yǎng)基中的蔗糖濃度為20g·L-1，瓊脂濃度均為7g·L-1，pH值為6.0。接種材料置于培養(yǎng)箱中，設(shè)定溫度為24～26℃，光照強(qiáng)度為1 500～2 000lx，光照時(shí)間為12～14h/d。

1.3 馴化移栽 把生根好的試管苗拿到室溫下，不打開(kāi)瓶蓋煉苗1～2d后，再打開(kāi)瓶蓋煉苗3～5d。然后取出試管苗，洗凈根部粘附的培養(yǎng)基，栽植于配比為蛭石∶珍珠巖∶園土為1∶1∶1的基質(zhì)中，澆透水，蓋上塑料薄膜，并注意保溫、保濕。當(dāng)金銀花試管苗長(zhǎng)出新葉時(shí)，煉苗移栽就真正成功了，觀察并統(tǒng)計(jì)成活率。

2 結(jié)果與分析

2.3 不同培養(yǎng)基對(duì)試管苗生根的影響 從表3可以看出，芽苗在5種不同的生根培養(yǎng)基上均能生根，根的數(shù)量和長(zhǎng)度隨IBA濃度的提高而增加；當(dāng)IBA濃度為3.0mg·L-1時(shí)，植株生長(zhǎng)健壯，葉色濃綠。因此，適宜金銀花生根的最佳培養(yǎng)基為1/2MS+IBA3.0mg·L-1+0.15%活性炭。

2.4 生根苗馴化移栽結(jié)果 試驗(yàn)結(jié)果表明，金銀花試管苗在栽培基質(zhì)上，移栽成活率高，幼苗生長(zhǎng)健壯，葉色嫩綠，成活率高達(dá)92%。

3 結(jié)論與討論

植物生長(zhǎng)物質(zhì)的種類(lèi)，以及細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素的比例，對(duì)植物組織分化出苗或快速增殖影響十分顯著。6-BA主要作用于芽的分化、促進(jìn)側(cè)芽萌發(fā)生長(zhǎng)[4]。NAA具有較低濃度下促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)，高濃度下促進(jìn)細(xì)胞成熟衰老的作用。IBA是試管苗生根中最常用的生根劑之一[5]，其濃度過(guò)低，不能很好地促進(jìn)組培苗生根，濃度過(guò)高，則會(huì)誘導(dǎo)出大量的愈傷組織，從而降低生根率[6]。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，6-BA濃度過(guò)高也會(huì)抑制腋芽的形成，一定濃度的NAA有利于促進(jìn)腋芽生長(zhǎng)，只有生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素同時(shí)存在時(shí)才能很好地誘導(dǎo)叢生芽。IBA為3.0mg·L-1時(shí)，植株生長(zhǎng)健壯，葉色濃綠。

參考文獻(xiàn)

[1]石任兵，陸蘊(yùn)如.我國(guó)藥用金銀花資源、化學(xué)成分及藥理研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，1999，34（11）：724-727.

[2]梁小梅，龔福寶.金銀花快繁的研究現(xiàn)狀[J].河北林業(yè)科技，2009，4.

[3]趙賢慧，劉慶華，張德鋒.紅金銀花組織培養(yǎng)外植體滅菌的研究[J].江蘇林業(yè)科技，2007，34（1）.

[4]李明軍.懷山藥組織培養(yǎng)及應(yīng)用[M].北京：科學(xué)出版社，2004，20.

[5]李明軍，陳明霞，洪森榮，等.NAA、IBA和PP333對(duì)懷山藥試管苗生長(zhǎng)發(fā)育的影響 [J].廣西植物，2004，24（4）：376-379.

[6]陳明霞，張曉麗，龔玉佳，等.“金峰一號(hào)”金銀花組織培養(yǎng)技術(shù)研究[J].北方園藝，2010（23）：126-129. （責(zé)編：張宏民）endprint

摘 要：為了研究金銀花的離體快繁技術(shù)，采用不同培養(yǎng)基配方對(duì)金銀花的芽尖進(jìn)行誘導(dǎo)、增殖并生根處理。結(jié)果表明：叢生芽誘導(dǎo)以MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1培養(yǎng)基為宜；增殖培養(yǎng)以MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.2mg·L-1培養(yǎng)基為宜，可獲得理想的效果，增殖倍數(shù)可達(dá)3.7倍；在1/2MS+IBA3.0mg·L-1+0.15%活性炭培養(yǎng)基上，可形成較發(fā)達(dá)的根系；試管苗移栽對(duì)基質(zhì)要求不嚴(yán)，移栽到疏松透氣的蛭石+珍珠+園土（1∶1∶1）混合基質(zhì)中，成活率高達(dá)92%。

關(guān)鍵詞：金銀花；組織培養(yǎng)；快速繁殖；培養(yǎng)基配方

中圖分類(lèi)號(hào) R282.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2014）21-21-02

金銀花（Lonicera japonica Thunb.）是忍冬科忍冬屬的多年生半常綠藤本植物，是一種珍貴的觀賞植物，也是我國(guó)特有的名貴中藥材，具有清熱、解毒、抗菌、增強(qiáng)免疫力等功效[1]。扦插繁殖和播種繁殖是金銀花的常用繁殖方式，然而這2種繁殖方式都易造成金銀花植株攜帶病毒、細(xì)菌等，使植株生長(zhǎng)不良，生產(chǎn)性能下降，植株及產(chǎn)品品質(zhì)下降。通過(guò)組織培養(yǎng)的方式繁育金銀花種苗，可使金銀花植株脫毒，且繁殖速度快、繁殖系數(shù)高，從而提高金銀花的產(chǎn)量和質(zhì)量[2]。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 信陽(yáng)當(dāng)?shù)匾吧疸y花，采自河南信陽(yáng)前進(jìn)鄉(xiāng)三橋村。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 外植體滅菌 取頂芽作為外植體，沖洗2～3遍，在低濃度的洗衣粉溶液中浸泡30min，再用軟刷刷洗，流水沖洗干凈。將外植體置于超凈工作臺(tái)中，用75%酒精浸泡30s，無(wú)菌水沖洗2～3次，再用0.1%升汞溶液消毒5min，無(wú)菌水沖洗4～5次，然后用消毒濾紙吸干表面水分，備用[3]。

1.2.2 誘導(dǎo)培養(yǎng) 金銀花誘導(dǎo)培養(yǎng)選用MS作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并加入不同種類(lèi)和配比的植物生長(zhǎng)物質(zhì)。將經(jīng)過(guò)消毒滅菌處理的外植體，分別接種于不同培養(yǎng)基中，每種處理接30瓶，每瓶接種1個(gè)外植體，重復(fù)3次，篩選出芽萌動(dòng)率高的培養(yǎng)基。

1.2.3 增殖培養(yǎng) 增殖培養(yǎng)以MS培養(yǎng)基加不同種類(lèi)的細(xì)胞分裂素，將叢生芽分別接種于繼代培養(yǎng)基中進(jìn)行金銀花的增殖培養(yǎng)。每種處理接種30瓶，每瓶接種1個(gè)外植體，重復(fù)3次，觀察不定芽的分化情況，選出分化率較高的激素配比。

1.2.4 生根培養(yǎng) 待叢生芽長(zhǎng)至2cm高時(shí)，轉(zhuǎn)接到1/2MS及1/2MS加不同濃度IBA的生根培養(yǎng)基上，并各加0.15%的活性炭。每種處理接種30個(gè)幼苗，重復(fù)3次，觀察不定根的形成過(guò)程，選出最佳生根培養(yǎng)基。

1.2.5 培養(yǎng)條件 MS培養(yǎng)基中蔗糖濃度為30g·L-1，1/2MS培養(yǎng)基中的蔗糖濃度為20g·L-1，瓊脂濃度均為7g·L-1，pH值為6.0。接種材料置于培養(yǎng)箱中，設(shè)定溫度為24～26℃，光照強(qiáng)度為1 500～2 000lx，光照時(shí)間為12～14h/d。

1.3 馴化移栽 把生根好的試管苗拿到室溫下，不打開(kāi)瓶蓋煉苗1～2d后，再打開(kāi)瓶蓋煉苗3～5d。然后取出試管苗，洗凈根部粘附的培養(yǎng)基，栽植于配比為蛭石∶珍珠巖∶園土為1∶1∶1的基質(zhì)中，澆透水，蓋上塑料薄膜，并注意保溫、保濕。當(dāng)金銀花試管苗長(zhǎng)出新葉時(shí)，煉苗移栽就真正成功了，觀察并統(tǒng)計(jì)成活率。

2 結(jié)果與分析

2.3 不同培養(yǎng)基對(duì)試管苗生根的影響 從表3可以看出，芽苗在5種不同的生根培養(yǎng)基上均能生根，根的數(shù)量和長(zhǎng)度隨IBA濃度的提高而增加；當(dāng)IBA濃度為3.0mg·L-1時(shí)，植株生長(zhǎng)健壯，葉色濃綠。因此，適宜金銀花生根的最佳培養(yǎng)基為1/2MS+IBA3.0mg·L-1+0.15%活性炭。

2.4 生根苗馴化移栽結(jié)果 試驗(yàn)結(jié)果表明，金銀花試管苗在栽培基質(zhì)上，移栽成活率高，幼苗生長(zhǎng)健壯，葉色嫩綠，成活率高達(dá)92%。

3 結(jié)論與討論

植物生長(zhǎng)物質(zhì)的種類(lèi)，以及細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素的比例，對(duì)植物組織分化出苗或快速增殖影響十分顯著。6-BA主要作用于芽的分化、促進(jìn)側(cè)芽萌發(fā)生長(zhǎng)[4]。NAA具有較低濃度下促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)，高濃度下促進(jìn)細(xì)胞成熟衰老的作用。IBA是試管苗生根中最常用的生根劑之一[5]，其濃度過(guò)低，不能很好地促進(jìn)組培苗生根，濃度過(guò)高，則會(huì)誘導(dǎo)出大量的愈傷組織，從而降低生根率[6]。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，6-BA濃度過(guò)高也會(huì)抑制腋芽的形成，一定濃度的NAA有利于促進(jìn)腋芽生長(zhǎng)，只有生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素同時(shí)存在時(shí)才能很好地誘導(dǎo)叢生芽。IBA為3.0mg·L-1時(shí)，植株生長(zhǎng)健壯，葉色濃綠。

參考文獻(xiàn)

[1]石任兵，陸蘊(yùn)如.我國(guó)藥用金銀花資源、化學(xué)成分及藥理研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，1999，34（11）：724-727.

[2]梁小梅，龔福寶.金銀花快繁的研究現(xiàn)狀[J].河北林業(yè)科技，2009，4.

[3]趙賢慧，劉慶華，張德鋒.紅金銀花組織培養(yǎng)外植體滅菌的研究[J].江蘇林業(yè)科技，2007，34（1）.

[4]李明軍.懷山藥組織培養(yǎng)及應(yīng)用[M].北京：科學(xué)出版社，2004，20.

[5]李明軍，陳明霞，洪森榮，等.NAA、IBA和PP333對(duì)懷山藥試管苗生長(zhǎng)發(fā)育的影響 [J].廣西植物，2004，24（4）：376-379.

[6]陳明霞，張曉麗，龔玉佳，等.“金峰一號(hào)”金銀花組織培養(yǎng)技術(shù)研究[J].北方園藝，2010（23）：126-129. （責(zé)編：張宏民）endprint

摘 要：為了研究金銀花的離體快繁技術(shù)，采用不同培養(yǎng)基配方對(duì)金銀花的芽尖進(jìn)行誘導(dǎo)、增殖并生根處理。結(jié)果表明：叢生芽誘導(dǎo)以MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1培養(yǎng)基為宜；增殖培養(yǎng)以MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.2mg·L-1培養(yǎng)基為宜，可獲得理想的效果，增殖倍數(shù)可達(dá)3.7倍；在1/2MS+IBA3.0mg·L-1+0.15%活性炭培養(yǎng)基上，可形成較發(fā)達(dá)的根系；試管苗移栽對(duì)基質(zhì)要求不嚴(yán)，移栽到疏松透氣的蛭石+珍珠+園土（1∶1∶1）混合基質(zhì)中，成活率高達(dá)92%。

關(guān)鍵詞：金銀花；組織培養(yǎng)；快速繁殖；培養(yǎng)基配方

中圖分類(lèi)號(hào) R282.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2014）21-21-02

金銀花（Lonicera japonica Thunb.）是忍冬科忍冬屬的多年生半常綠藤本植物，是一種珍貴的觀賞植物，也是我國(guó)特有的名貴中藥材，具有清熱、解毒、抗菌、增強(qiáng)免疫力等功效[1]。扦插繁殖和播種繁殖是金銀花的常用繁殖方式，然而這2種繁殖方式都易造成金銀花植株攜帶病毒、細(xì)菌等，使植株生長(zhǎng)不良，生產(chǎn)性能下降，植株及產(chǎn)品品質(zhì)下降。通過(guò)組織培養(yǎng)的方式繁育金銀花種苗，可使金銀花植株脫毒，且繁殖速度快、繁殖系數(shù)高，從而提高金銀花的產(chǎn)量和質(zhì)量[2]。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 信陽(yáng)當(dāng)?shù)匾吧疸y花，采自河南信陽(yáng)前進(jìn)鄉(xiāng)三橋村。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 外植體滅菌 取頂芽作為外植體，沖洗2～3遍，在低濃度的洗衣粉溶液中浸泡30min，再用軟刷刷洗，流水沖洗干凈。將外植體置于超凈工作臺(tái)中，用75%酒精浸泡30s，無(wú)菌水沖洗2～3次，再用0.1%升汞溶液消毒5min，無(wú)菌水沖洗4～5次，然后用消毒濾紙吸干表面水分，備用[3]。

1.2.2 誘導(dǎo)培養(yǎng) 金銀花誘導(dǎo)培養(yǎng)選用MS作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并加入不同種類(lèi)和配比的植物生長(zhǎng)物質(zhì)。將經(jīng)過(guò)消毒滅菌處理的外植體，分別接種于不同培養(yǎng)基中，每種處理接30瓶，每瓶接種1個(gè)外植體，重復(fù)3次，篩選出芽萌動(dòng)率高的培養(yǎng)基。

1.2.3 增殖培養(yǎng) 增殖培養(yǎng)以MS培養(yǎng)基加不同種類(lèi)的細(xì)胞分裂素，將叢生芽分別接種于繼代培養(yǎng)基中進(jìn)行金銀花的增殖培養(yǎng)。每種處理接種30瓶，每瓶接種1個(gè)外植體，重復(fù)3次，觀察不定芽的分化情況，選出分化率較高的激素配比。

1.2.4 生根培養(yǎng) 待叢生芽長(zhǎng)至2cm高時(shí)，轉(zhuǎn)接到1/2MS及1/2MS加不同濃度IBA的生根培養(yǎng)基上，并各加0.15%的活性炭。每種處理接種30個(gè)幼苗，重復(fù)3次，觀察不定根的形成過(guò)程，選出最佳生根培養(yǎng)基。

1.2.5 培養(yǎng)條件 MS培養(yǎng)基中蔗糖濃度為30g·L-1，1/2MS培養(yǎng)基中的蔗糖濃度為20g·L-1，瓊脂濃度均為7g·L-1，pH值為6.0。接種材料置于培養(yǎng)箱中，設(shè)定溫度為24～26℃，光照強(qiáng)度為1 500～2 000lx，光照時(shí)間為12～14h/d。

1.3 馴化移栽 把生根好的試管苗拿到室溫下，不打開(kāi)瓶蓋煉苗1～2d后，再打開(kāi)瓶蓋煉苗3～5d。然后取出試管苗，洗凈根部粘附的培養(yǎng)基，栽植于配比為蛭石∶珍珠巖∶園土為1∶1∶1的基質(zhì)中，澆透水，蓋上塑料薄膜，并注意保溫、保濕。當(dāng)金銀花試管苗長(zhǎng)出新葉時(shí)，煉苗移栽就真正成功了，觀察并統(tǒng)計(jì)成活率。

2 結(jié)果與分析

2.3 不同培養(yǎng)基對(duì)試管苗生根的影響 從表3可以看出，芽苗在5種不同的生根培養(yǎng)基上均能生根，根的數(shù)量和長(zhǎng)度隨IBA濃度的提高而增加；當(dāng)IBA濃度為3.0mg·L-1時(shí)，植株生長(zhǎng)健壯，葉色濃綠。因此，適宜金銀花生根的最佳培養(yǎng)基為1/2MS+IBA3.0mg·L-1+0.15%活性炭。

2.4 生根苗馴化移栽結(jié)果 試驗(yàn)結(jié)果表明，金銀花試管苗在栽培基質(zhì)上，移栽成活率高，幼苗生長(zhǎng)健壯，葉色嫩綠，成活率高達(dá)92%。

3 結(jié)論與討論

植物生長(zhǎng)物質(zhì)的種類(lèi)，以及細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素的比例，對(duì)植物組織分化出苗或快速增殖影響十分顯著。6-BA主要作用于芽的分化、促進(jìn)側(cè)芽萌發(fā)生長(zhǎng)[4]。NAA具有較低濃度下促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)，高濃度下促進(jìn)細(xì)胞成熟衰老的作用。IBA是試管苗生根中最常用的生根劑之一[5]，其濃度過(guò)低，不能很好地促進(jìn)組培苗生根，濃度過(guò)高，則會(huì)誘導(dǎo)出大量的愈傷組織，從而降低生根率[6]。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，6-BA濃度過(guò)高也會(huì)抑制腋芽的形成，一定濃度的NAA有利于促進(jìn)腋芽生長(zhǎng)，只有生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素同時(shí)存在時(shí)才能很好地誘導(dǎo)叢生芽。IBA為3.0mg·L-1時(shí)，植株生長(zhǎng)健壯，葉色濃綠。

參考文獻(xiàn)

[1]石任兵，陸蘊(yùn)如.我國(guó)藥用金銀花資源、化學(xué)成分及藥理研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，1999，34（11）：724-727.

[2]梁小梅，龔福寶.金銀花快繁的研究現(xiàn)狀[J].河北林業(yè)科技，2009，4.

[3]趙賢慧，劉慶華，張德鋒.紅金銀花組織培養(yǎng)外植體滅菌的研究[J].江蘇林業(yè)科技，2007，34（1）.

[4]李明軍.懷山藥組織培養(yǎng)及應(yīng)用[M].北京：科學(xué)出版社，2004，20.

[5]李明軍，陳明霞，洪森榮，等.NAA、IBA和PP333對(duì)懷山藥試管苗生長(zhǎng)發(fā)育的影響 [J].廣西植物，2004，24（4）：376-379.

[6]陳明霞，張曉麗，龔玉佳，等.“金峰一號(hào)”金銀花組織培養(yǎng)技術(shù)研究[J].北方園藝，2010（23）：126-129. （責(zé)編：張宏民）endprint