黃靖

摘 要：該文以蝴蝶蘭花后帶腋芽花梗節(jié)為外植體，比較了附加不同激素的MS培養(yǎng)基以及不同培養(yǎng)條件對控制外植體褐變的影響。結果表明，采用1/2MS+BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L+10%椰子汁的配方對控制花梗褐變及誘導叢生芽效果最為顯著。

關鍵詞：蝴蝶蘭；花梗；離體培養(yǎng)；褐變；控制

中圖分類號 S68 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2014）21-23-02

蝴蝶蘭（Phalaenopsis）屬蘭科植物，因其風姿綽約、體態(tài)輕盈、花色秀麗、氣質飄逸，被譽為“洋蘭王后”，其原生種的花色因種類不同而有較大的變化。由于蝴蝶蘭的種子在自然條件下發(fā)芽率極低，很難利用種子播種的方式來進行有性繁殖，而且由于蝴蝶蘭屬單莖氣生蘭，在植株上少有側枝，也難以采用常規(guī)分株法進行無性繁殖。因此，采用離體快速繁殖技術，對于擴大蝴蝶蘭的繁殖是非常必要的，利用花梗離體培養(yǎng)是當前蝴蝶蘭快速繁殖的主要途徑。但蝴蝶蘭在組培快繁生產(chǎn)中存在著極易褐變夭折的問題，褐化直接影響蝴蝶蘭離體培養(yǎng)的正常進行，包括芽的萌發(fā)和增殖效果，生長緩慢，嚴重時會導致培養(yǎng)材料死亡。為此，筆者針對蝴蝶蘭花梗腋芽離體快繁褐變問題進行了相關試驗研究，以期為蝴蝶蘭工廠化生產(chǎn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試材料 蝴蝶蘭選用V31品種，福建新世景園藝有限公司生產(chǎn)。試驗用藥品均為分析純。

1.2 試驗方法 選取健壯無病蟲害的蝴蝶蘭花梗，剝除花朵和花蕾后將花柄清凈，用解剖刀切成2～4cm段，每段帶一個腋芽。流水沖洗0.5h后用75%酒精浸泡30s，然后用無菌水沖洗干凈，在超凈工作臺上用0.1%HgCl2溶液浸泡16min，取出后用無菌水沖洗5～8次，無菌濾紙吸干用解剖刀切除外植體頂部與基部各0.5～1cm部分，形成1～2cm長莖段，每瓶接種一個外植體。然后以MS、1/2MS、1/4MS為基本培養(yǎng)基，激素采用NAA與BA，另添加椰子汁、抗壞血酸、活性炭等物質，進行蝴蝶蘭離體培養(yǎng)。在光照培養(yǎng)室溫度為25℃，光照強度2 000lx，光照時間12h/d的條件下誘導。

2 結果與分析

2.1 不同培養(yǎng)基對花梗褐變的影響 將基本培養(yǎng)基分別設置為MS、1/2MS、1/4MS，各培養(yǎng)基均加BA3.0mg/L，接種后每10d進行觀察，一個月后統(tǒng)計結果見表1。外植體接種10d后，各處理的莖段開始萌動，以后陸續(xù)萌芽，長出芽苗。MS培養(yǎng)基處理首先出現(xiàn)褐變，20d后1/2MS培養(yǎng)基處理也開始出現(xiàn)褐化現(xiàn)象；一個月后進行統(tǒng)計觀察，1/2MS培養(yǎng)基處理的外植體萌芽率最高，1/4MS培養(yǎng)基處理的外植體褐變程度最輕；60d后觀察，1/4MS培養(yǎng)基處理的腋芽生長狀態(tài)較差。因此，生產(chǎn)上應選擇1/2MS培養(yǎng)基或適時更換培養(yǎng)基，以防止無機營養(yǎng)缺乏。

2.2 不同激素配比對花梗褐變的影響 以蝴蝶蘭帶腋芽花梗節(jié)為外植體，以l/2MS為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度的6-BA和NAA，每瓶接種1個外植體，接種培養(yǎng)10d后開始觀察，培養(yǎng)一個月后統(tǒng)計結果見表2。由表2可知，培養(yǎng)基中不含外源激素時，培養(yǎng)30d后也有少量花梗腋芽萌發(fā)，但培養(yǎng)基褐化現(xiàn)象較重（43.3%）；在培養(yǎng)基中添加BA 3.0mg/L時，蝴蝶蘭花梗腋芽萌芽數(shù)最高（83個），繼續(xù)添加BA 5.0mg/L萌芽數(shù)有所降低（57個），褐變現(xiàn)象最為嚴重（73.3%）；在BA 3.0mg/L的基礎上添加NAA，BA 3.0mg/L+NAA 2.0mg/L的激素配比，萌芽數(shù)及褐變率都在最優(yōu)范圍內，分別為79個和26.7%。

2.3 不同添加物對花梗褐變的影響 椰子汁是一種天然的復合有機物，含有豐富的氨基酸、礦物質、維生素和碳水化合物等，這些物質具有促進培養(yǎng)物的生長，提高存活率，減少褐化死亡現(xiàn)象的作用?？箟难崾侵参锝M織培養(yǎng)中常用的抗褐變劑，其對外植體褐變的抑制多有報道?；钚蕴烤哂休^強的吸附能力，對抑制褐變起重要作用。本試驗以1/2MS+BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L為基礎培養(yǎng)基，分別添加5%椰子汁、10%椰子汁、50mg/LVC、100mg/LVC、500mg/L活性炭、2 000mg/L活性炭等，與未添加上達物質的培養(yǎng)一個月后統(tǒng)計結果見表3。從表3可知，附加活性炭的培養(yǎng)基能明顯抑制外植體褐變產(chǎn)生，但是由于活性炭不但對培養(yǎng)基中的醌類化合物有吸附作用，同時也吸附了部分分裂素、生長素、維生素等相關成分，在抑制褐化的同時也嚴重影響到芽的萌發(fā)和增殖效果；而添加10%的椰子汁或100mg/L抗壞血酸的培養(yǎng)基，均能有效抑制褐變，從萌芽效果看，添加椰子汁的培養(yǎng)基效果較添加抗壞血酸的優(yōu)。

2.4 不同培養(yǎng)條件對花梗褐變及生長的影響 將接種于1/2MS+BA 3.0mg/L+NAA 2.0mg/L培養(yǎng)基上的蝴蝶蘭花梗節(jié)放置于不同溫度及不同光照的培養(yǎng)環(huán)境內，比較其褐變及生長情況，結果見表4。由表4可知，蝴蝶蘭花梗節(jié)培養(yǎng)過程中溫度應比較恒定，若溫度過低，形成原球莖叢生芽所需時間較長，生長緩慢，若溫度過高，則容易造成污染褐變率也上升；同樣，暗培養(yǎng)對控制褐變有顯著效果，但由于缺乏光照，材料生長緩慢，在暗培養(yǎng)一定時間后應移至常規(guī)光照條件下放置。

3 結論與討論

國內外蝴蝶蘭離體快繁以莖尖為外植體的研究較多，盡管莖尖容易脫分化并再分化成完整植株，但由于蝴蝶蘭為單莖性植物，摘取莖尖就會犧牲母株，造成不必要的浪費。因此，在實際的生產(chǎn)中，現(xiàn)階段代替蝴蝶蘭莖尖培養(yǎng)的方法是利用蝴蝶蘭的花梗作為外植體進行培養(yǎng)，其花梗通常只有4～5個腋芽，腋芽啟動培養(yǎng)的效果直接關系到增殖培養(yǎng)時無菌材料的多少，從而影響花梗快速繁殖的效率。以蝴蝶蘭花梗為材料建立蝴蝶蘭的無性繁殖體系，比采用根尖、莖尖和種子進行蝴蝶蘭的快速無性繁殖更具有應用價值。蘭科植物在外植體誘導和原球莖分化培養(yǎng)時都存在褐變死亡的問題，因而減輕或控制褐變發(fā)生是蘭科植物組織培養(yǎng)研究的重要內容。

本研究針對蝴蝶蘭組培褐變問題進行了試驗研究，嘗試探尋蝴蝶蘭花梗腋芽培養(yǎng)過程中有效控制褐變的方法。試驗表明：適當降低無機離子濃度，有利于降低外植體褐變率；恰當?shù)募毎至阉谺A與生長素NAA配比，在控制褐變及誘導叢生芽上有增效作用；添加一定劑量的椰子汁、抗壞血酸、活性炭等均可減輕褐變，但活性炭對外源激素的吸附較大；在培養(yǎng)環(huán)境上，短期暗培養(yǎng)有利于減輕外植體的褐變，低溫雖然也能降低褐變率，但由于此條件下試驗材料生長緩慢，對于工廠化育苗意義不大。

參考文獻

[1]曾都華，郁培義，陳偉玉，等.“滿天紅”蝴蝶蘭花梗組培快繁技術研究[J].熱帶林業(yè)，2014，42（1）：46-49.

[2]王玲，陳發(fā)棣，陳鳳，等.不同培養(yǎng)基及添加物對蝴蝶蘭花梗芽壯苗生根的影響[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學，2013，41（5）：134-136.

[3]印芳，彭克勤，葛紅，等.礦質元素對蝴蝶蘭組培褐變的影響[J].北方園藝，2006（6）：137-139.

[4]張凡凡.蝴蝶蘭組培快繁中褐變問題的研究進展[J].探索，2010（5）：362. （責編：張宏民）endprint

摘 要：該文以蝴蝶蘭花后帶腋芽花梗節(jié)為外植體，比較了附加不同激素的MS培養(yǎng)基以及不同培養(yǎng)條件對控制外植體褐變的影響。結果表明，采用1/2MS+BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L+10%椰子汁的配方對控制花梗褐變及誘導叢生芽效果最為顯著。

關鍵詞：蝴蝶蘭；花梗；離體培養(yǎng)；褐變；控制

中圖分類號 S68 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2014）21-23-02

蝴蝶蘭（Phalaenopsis）屬蘭科植物，因其風姿綽約、體態(tài)輕盈、花色秀麗、氣質飄逸，被譽為“洋蘭王后”，其原生種的花色因種類不同而有較大的變化。由于蝴蝶蘭的種子在自然條件下發(fā)芽率極低，很難利用種子播種的方式來進行有性繁殖，而且由于蝴蝶蘭屬單莖氣生蘭，在植株上少有側枝，也難以采用常規(guī)分株法進行無性繁殖。因此，采用離體快速繁殖技術，對于擴大蝴蝶蘭的繁殖是非常必要的，利用花梗離體培養(yǎng)是當前蝴蝶蘭快速繁殖的主要途徑。但蝴蝶蘭在組培快繁生產(chǎn)中存在著極易褐變夭折的問題，褐化直接影響蝴蝶蘭離體培養(yǎng)的正常進行，包括芽的萌發(fā)和增殖效果，生長緩慢，嚴重時會導致培養(yǎng)材料死亡。為此，筆者針對蝴蝶蘭花梗腋芽離體快繁褐變問題進行了相關試驗研究，以期為蝴蝶蘭工廠化生產(chǎn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試材料 蝴蝶蘭選用V31品種，福建新世景園藝有限公司生產(chǎn)。試驗用藥品均為分析純。

1.2 試驗方法 選取健壯無病蟲害的蝴蝶蘭花梗，剝除花朵和花蕾后將花柄清凈，用解剖刀切成2～4cm段，每段帶一個腋芽。流水沖洗0.5h后用75%酒精浸泡30s，然后用無菌水沖洗干凈，在超凈工作臺上用0.1%HgCl2溶液浸泡16min，取出后用無菌水沖洗5～8次，無菌濾紙吸干用解剖刀切除外植體頂部與基部各0.5～1cm部分，形成1～2cm長莖段，每瓶接種一個外植體。然后以MS、1/2MS、1/4MS為基本培養(yǎng)基，激素采用NAA與BA，另添加椰子汁、抗壞血酸、活性炭等物質，進行蝴蝶蘭離體培養(yǎng)。在光照培養(yǎng)室溫度為25℃，光照強度2 000lx，光照時間12h/d的條件下誘導。

2 結果與分析

2.1 不同培養(yǎng)基對花梗褐變的影響 將基本培養(yǎng)基分別設置為MS、1/2MS、1/4MS，各培養(yǎng)基均加BA3.0mg/L，接種后每10d進行觀察，一個月后統(tǒng)計結果見表1。外植體接種10d后，各處理的莖段開始萌動，以后陸續(xù)萌芽，長出芽苗。MS培養(yǎng)基處理首先出現(xiàn)褐變，20d后1/2MS培養(yǎng)基處理也開始出現(xiàn)褐化現(xiàn)象；一個月后進行統(tǒng)計觀察，1/2MS培養(yǎng)基處理的外植體萌芽率最高，1/4MS培養(yǎng)基處理的外植體褐變程度最輕；60d后觀察，1/4MS培養(yǎng)基處理的腋芽生長狀態(tài)較差。因此，生產(chǎn)上應選擇1/2MS培養(yǎng)基或適時更換培養(yǎng)基，以防止無機營養(yǎng)缺乏。

2.2 不同激素配比對花梗褐變的影響 以蝴蝶蘭帶腋芽花梗節(jié)為外植體，以l/2MS為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度的6-BA和NAA，每瓶接種1個外植體，接種培養(yǎng)10d后開始觀察，培養(yǎng)一個月后統(tǒng)計結果見表2。由表2可知，培養(yǎng)基中不含外源激素時，培養(yǎng)30d后也有少量花梗腋芽萌發(fā)，但培養(yǎng)基褐化現(xiàn)象較重（43.3%）；在培養(yǎng)基中添加BA 3.0mg/L時，蝴蝶蘭花梗腋芽萌芽數(shù)最高（83個），繼續(xù)添加BA 5.0mg/L萌芽數(shù)有所降低（57個），褐變現(xiàn)象最為嚴重（73.3%）；在BA 3.0mg/L的基礎上添加NAA，BA 3.0mg/L+NAA 2.0mg/L的激素配比，萌芽數(shù)及褐變率都在最優(yōu)范圍內，分別為79個和26.7%。

2.3 不同添加物對花梗褐變的影響 椰子汁是一種天然的復合有機物，含有豐富的氨基酸、礦物質、維生素和碳水化合物等，這些物質具有促進培養(yǎng)物的生長，提高存活率，減少褐化死亡現(xiàn)象的作用。抗壞血酸是植物組織培養(yǎng)中常用的抗褐變劑，其對外植體褐變的抑制多有報道。活性炭具有較強的吸附能力，對抑制褐變起重要作用。本試驗以1/2MS+BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L為基礎培養(yǎng)基，分別添加5%椰子汁、10%椰子汁、50mg/LVC、100mg/LVC、500mg/L活性炭、2 000mg/L活性炭等，與未添加上達物質的培養(yǎng)一個月后統(tǒng)計結果見表3。從表3可知，附加活性炭的培養(yǎng)基能明顯抑制外植體褐變產(chǎn)生，但是由于活性炭不但對培養(yǎng)基中的醌類化合物有吸附作用，同時也吸附了部分分裂素、生長素、維生素等相關成分，在抑制褐化的同時也嚴重影響到芽的萌發(fā)和增殖效果；而添加10%的椰子汁或100mg/L抗壞血酸的培養(yǎng)基，均能有效抑制褐變，從萌芽效果看，添加椰子汁的培養(yǎng)基效果較添加抗壞血酸的優(yōu)。

2.4 不同培養(yǎng)條件對花梗褐變及生長的影響 將接種于1/2MS+BA 3.0mg/L+NAA 2.0mg/L培養(yǎng)基上的蝴蝶蘭花梗節(jié)放置于不同溫度及不同光照的培養(yǎng)環(huán)境內，比較其褐變及生長情況，結果見表4。由表4可知，蝴蝶蘭花梗節(jié)培養(yǎng)過程中溫度應比較恒定，若溫度過低，形成原球莖叢生芽所需時間較長，生長緩慢，若溫度過高，則容易造成污染褐變率也上升；同樣，暗培養(yǎng)對控制褐變有顯著效果，但由于缺乏光照，材料生長緩慢，在暗培養(yǎng)一定時間后應移至常規(guī)光照條件下放置。

3 結論與討論

國內外蝴蝶蘭離體快繁以莖尖為外植體的研究較多，盡管莖尖容易脫分化并再分化成完整植株，但由于蝴蝶蘭為單莖性植物，摘取莖尖就會犧牲母株，造成不必要的浪費。因此，在實際的生產(chǎn)中，現(xiàn)階段代替蝴蝶蘭莖尖培養(yǎng)的方法是利用蝴蝶蘭的花梗作為外植體進行培養(yǎng)，其花梗通常只有4～5個腋芽，腋芽啟動培養(yǎng)的效果直接關系到增殖培養(yǎng)時無菌材料的多少，從而影響花梗快速繁殖的效率。以蝴蝶蘭花梗為材料建立蝴蝶蘭的無性繁殖體系，比采用根尖、莖尖和種子進行蝴蝶蘭的快速無性繁殖更具有應用價值。蘭科植物在外植體誘導和原球莖分化培養(yǎng)時都存在褐變死亡的問題，因而減輕或控制褐變發(fā)生是蘭科植物組織培養(yǎng)研究的重要內容。

本研究針對蝴蝶蘭組培褐變問題進行了試驗研究，嘗試探尋蝴蝶蘭花梗腋芽培養(yǎng)過程中有效控制褐變的方法。試驗表明：適當降低無機離子濃度，有利于降低外植體褐變率；恰當?shù)募毎至阉谺A與生長素NAA配比，在控制褐變及誘導叢生芽上有增效作用；添加一定劑量的椰子汁、抗壞血酸、活性炭等均可減輕褐變，但活性炭對外源激素的吸附較大；在培養(yǎng)環(huán)境上，短期暗培養(yǎng)有利于減輕外植體的褐變，低溫雖然也能降低褐變率，但由于此條件下試驗材料生長緩慢，對于工廠化育苗意義不大。

參考文獻

[1]曾都華，郁培義，陳偉玉，等.“滿天紅”蝴蝶蘭花梗組培快繁技術研究[J].熱帶林業(yè)，2014，42（1）：46-49.

[2]王玲，陳發(fā)棣，陳鳳，等.不同培養(yǎng)基及添加物對蝴蝶蘭花梗芽壯苗生根的影響[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學，2013，41（5）：134-136.

[3]印芳，彭克勤，葛紅，等.礦質元素對蝴蝶蘭組培褐變的影響[J].北方園藝，2006（6）：137-139.

[4]張凡凡.蝴蝶蘭組培快繁中褐變問題的研究進展[J].探索，2010（5）：362. （責編：張宏民）endprint

摘 要：該文以蝴蝶蘭花后帶腋芽花梗節(jié)為外植體，比較了附加不同激素的MS培養(yǎng)基以及不同培養(yǎng)條件對控制外植體褐變的影響。結果表明，采用1/2MS+BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L+10%椰子汁的配方對控制花梗褐變及誘導叢生芽效果最為顯著。

關鍵詞：蝴蝶蘭；花梗；離體培養(yǎng)；褐變；控制

中圖分類號 S68 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2014）21-23-02

蝴蝶蘭（Phalaenopsis）屬蘭科植物，因其風姿綽約、體態(tài)輕盈、花色秀麗、氣質飄逸，被譽為“洋蘭王后”，其原生種的花色因種類不同而有較大的變化。由于蝴蝶蘭的種子在自然條件下發(fā)芽率極低，很難利用種子播種的方式來進行有性繁殖，而且由于蝴蝶蘭屬單莖氣生蘭，在植株上少有側枝，也難以采用常規(guī)分株法進行無性繁殖。因此，采用離體快速繁殖技術，對于擴大蝴蝶蘭的繁殖是非常必要的，利用花梗離體培養(yǎng)是當前蝴蝶蘭快速繁殖的主要途徑。但蝴蝶蘭在組培快繁生產(chǎn)中存在著極易褐變夭折的問題，褐化直接影響蝴蝶蘭離體培養(yǎng)的正常進行，包括芽的萌發(fā)和增殖效果，生長緩慢，嚴重時會導致培養(yǎng)材料死亡。為此，筆者針對蝴蝶蘭花梗腋芽離體快繁褐變問題進行了相關試驗研究，以期為蝴蝶蘭工廠化生產(chǎn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試材料 蝴蝶蘭選用V31品種，福建新世景園藝有限公司生產(chǎn)。試驗用藥品均為分析純。

1.2 試驗方法 選取健壯無病蟲害的蝴蝶蘭花梗，剝除花朵和花蕾后將花柄清凈，用解剖刀切成2～4cm段，每段帶一個腋芽。流水沖洗0.5h后用75%酒精浸泡30s，然后用無菌水沖洗干凈，在超凈工作臺上用0.1%HgCl2溶液浸泡16min，取出后用無菌水沖洗5～8次，無菌濾紙吸干用解剖刀切除外植體頂部與基部各0.5～1cm部分，形成1～2cm長莖段，每瓶接種一個外植體。然后以MS、1/2MS、1/4MS為基本培養(yǎng)基，激素采用NAA與BA，另添加椰子汁、抗壞血酸、活性炭等物質，進行蝴蝶蘭離體培養(yǎng)。在光照培養(yǎng)室溫度為25℃，光照強度2 000lx，光照時間12h/d的條件下誘導。

2 結果與分析

2.1 不同培養(yǎng)基對花梗褐變的影響 將基本培養(yǎng)基分別設置為MS、1/2MS、1/4MS，各培養(yǎng)基均加BA3.0mg/L，接種后每10d進行觀察，一個月后統(tǒng)計結果見表1。外植體接種10d后，各處理的莖段開始萌動，以后陸續(xù)萌芽，長出芽苗。MS培養(yǎng)基處理首先出現(xiàn)褐變，20d后1/2MS培養(yǎng)基處理也開始出現(xiàn)褐化現(xiàn)象；一個月后進行統(tǒng)計觀察，1/2MS培養(yǎng)基處理的外植體萌芽率最高，1/4MS培養(yǎng)基處理的外植體褐變程度最輕；60d后觀察，1/4MS培養(yǎng)基處理的腋芽生長狀態(tài)較差。因此，生產(chǎn)上應選擇1/2MS培養(yǎng)基或適時更換培養(yǎng)基，以防止無機營養(yǎng)缺乏。

2.2 不同激素配比對花梗褐變的影響 以蝴蝶蘭帶腋芽花梗節(jié)為外植體，以l/2MS為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度的6-BA和NAA，每瓶接種1個外植體，接種培養(yǎng)10d后開始觀察，培養(yǎng)一個月后統(tǒng)計結果見表2。由表2可知，培養(yǎng)基中不含外源激素時，培養(yǎng)30d后也有少量花梗腋芽萌發(fā)，但培養(yǎng)基褐化現(xiàn)象較重（43.3%）；在培養(yǎng)基中添加BA 3.0mg/L時，蝴蝶蘭花梗腋芽萌芽數(shù)最高（83個），繼續(xù)添加BA 5.0mg/L萌芽數(shù)有所降低（57個），褐變現(xiàn)象最為嚴重（73.3%）；在BA 3.0mg/L的基礎上添加NAA，BA 3.0mg/L+NAA 2.0mg/L的激素配比，萌芽數(shù)及褐變率都在最優(yōu)范圍內，分別為79個和26.7%。

2.3 不同添加物對花梗褐變的影響 椰子汁是一種天然的復合有機物，含有豐富的氨基酸、礦物質、維生素和碳水化合物等，這些物質具有促進培養(yǎng)物的生長，提高存活率，減少褐化死亡現(xiàn)象的作用?？箟难崾侵参锝M織培養(yǎng)中常用的抗褐變劑，其對外植體褐變的抑制多有報道?；钚蕴烤哂休^強的吸附能力，對抑制褐變起重要作用。本試驗以1/2MS+BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L為基礎培養(yǎng)基，分別添加5%椰子汁、10%椰子汁、50mg/LVC、100mg/LVC、500mg/L活性炭、2 000mg/L活性炭等，與未添加上達物質的培養(yǎng)一個月后統(tǒng)計結果見表3。從表3可知，附加活性炭的培養(yǎng)基能明顯抑制外植體褐變產(chǎn)生，但是由于活性炭不但對培養(yǎng)基中的醌類化合物有吸附作用，同時也吸附了部分分裂素、生長素、維生素等相關成分，在抑制褐化的同時也嚴重影響到芽的萌發(fā)和增殖效果；而添加10%的椰子汁或100mg/L抗壞血酸的培養(yǎng)基，均能有效抑制褐變，從萌芽效果看，添加椰子汁的培養(yǎng)基效果較添加抗壞血酸的優(yōu)。

2.4 不同培養(yǎng)條件對花梗褐變及生長的影響 將接種于1/2MS+BA 3.0mg/L+NAA 2.0mg/L培養(yǎng)基上的蝴蝶蘭花梗節(jié)放置于不同溫度及不同光照的培養(yǎng)環(huán)境內，比較其褐變及生長情況，結果見表4。由表4可知，蝴蝶蘭花梗節(jié)培養(yǎng)過程中溫度應比較恒定，若溫度過低，形成原球莖叢生芽所需時間較長，生長緩慢，若溫度過高，則容易造成污染褐變率也上升；同樣，暗培養(yǎng)對控制褐變有顯著效果，但由于缺乏光照，材料生長緩慢，在暗培養(yǎng)一定時間后應移至常規(guī)光照條件下放置。

3 結論與討論

國內外蝴蝶蘭離體快繁以莖尖為外植體的研究較多，盡管莖尖容易脫分化并再分化成完整植株，但由于蝴蝶蘭為單莖性植物，摘取莖尖就會犧牲母株，造成不必要的浪費。因此，在實際的生產(chǎn)中，現(xiàn)階段代替蝴蝶蘭莖尖培養(yǎng)的方法是利用蝴蝶蘭的花梗作為外植體進行培養(yǎng)，其花梗通常只有4～5個腋芽，腋芽啟動培養(yǎng)的效果直接關系到增殖培養(yǎng)時無菌材料的多少，從而影響花梗快速繁殖的效率。以蝴蝶蘭花梗為材料建立蝴蝶蘭的無性繁殖體系，比采用根尖、莖尖和種子進行蝴蝶蘭的快速無性繁殖更具有應用價值。蘭科植物在外植體誘導和原球莖分化培養(yǎng)時都存在褐變死亡的問題，因而減輕或控制褐變發(fā)生是蘭科植物組織培養(yǎng)研究的重要內容。

本研究針對蝴蝶蘭組培褐變問題進行了試驗研究，嘗試探尋蝴蝶蘭花梗腋芽培養(yǎng)過程中有效控制褐變的方法。試驗表明：適當降低無機離子濃度，有利于降低外植體褐變率；恰當?shù)募毎至阉谺A與生長素NAA配比，在控制褐變及誘導叢生芽上有增效作用；添加一定劑量的椰子汁、抗壞血酸、活性炭等均可減輕褐變，但活性炭對外源激素的吸附較大；在培養(yǎng)環(huán)境上，短期暗培養(yǎng)有利于減輕外植體的褐變，低溫雖然也能降低褐變率，但由于此條件下試驗材料生長緩慢，對于工廠化育苗意義不大。

參考文獻

[1]曾都華，郁培義，陳偉玉，等.“滿天紅”蝴蝶蘭花梗組培快繁技術研究[J].熱帶林業(yè)，2014，42（1）：46-49.

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