吳興萍 沙翔垠 宋 莉 羅佩娜 郭露萍

全身多種致病因素綜合作用如心肺復(fù)蘇、麻醉意外等短暫缺血造成視神經(jīng)功能損害正成為人們致殘的原因之一〔1〕。目前對(duì)其的早期治療正得到廣泛重視。近年來(lái)，銀杏葉提取物在國(guó)內(nèi)外臨床主要用于冠心病、腦梗塞、糖尿病〔2，3〕等，并且獲得了很好的效果。隨著它的研究不斷深入，在眼科疾病方面也有其獨(dú)特的療效〔4，5〕。 由于光學(xué)相干斷層掃描（Optical coherence tomography，OCT）能對(duì)評(píng)價(jià)治療視網(wǎng)膜疾病的結(jié)果提供客觀、精確、有效的依據(jù)，筆者模擬大鼠短暫缺血后所致眼部視網(wǎng)膜改變，并用OCT檢查，觀察銀杏葉提取物治療后能否有助于提高視網(wǎng)膜血流灌注，減輕視力損害。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組

Wistar雄性大鼠24只（南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供），年齡 20～25 周，體重 200～380 g，實(shí)驗(yàn)前檢查雙眼眼前節(jié)和眼底均正常。隨機(jī)分為4組：正常組、短暫缺血組、生理鹽水對(duì)照組和銀杏葉提取物治療組，每組各6只。每只鼠任取一只眼進(jìn)行研究，所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的操作和飼養(yǎng)均符合中華人民共和國(guó)《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》。

1.2 大鼠短暫缺血模型的制備

10%水合氯醛（350 mg/kg成年大鼠）腹腔注射麻醉。頸部正中橫切口，分離兩側(cè)頸總動(dòng)脈約1 cm，將缺血裝置套上頸總動(dòng)脈，即將一條硅膠管系于頸總動(dòng)脈周圍并將其穿過(guò)聚乙烯紐扣的兩個(gè)小孔，再穿過(guò)一個(gè)2cm長(zhǎng)的塑料圓筒，打結(jié)，避免血管受壓和血流受阻，簡(jiǎn)易縫合切口。將大鼠固定于定位儀上，枕部縱切口，暴露第一頸椎板及橫突板上的翼小孔，用雙極電凝針電凝雙側(cè)翼小孔內(nèi)的椎動(dòng)脈，縫合切口后待動(dòng)物完全蘇醒，將其移至籠內(nèi)飼養(yǎng)，夜間禁食，此時(shí)動(dòng)物行為正常，沒(méi)有明顯的腦損傷。24 h后在大鼠完全清醒的狀態(tài)下，夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈10分鐘，即將穿過(guò)圓筒的硅膠管拉緊，從而將動(dòng)脈緊緊壓向紐扣造成短暫缺血。此時(shí)肉眼可見(jiàn)球結(jié)膜蒼白，眼底鏡發(fā)現(xiàn)視網(wǎng)膜缺血，缺血10分鐘后解除夾閉的缺血裝置，恢復(fù)血流后見(jiàn)球結(jié)膜充血和視網(wǎng)膜血液。

1.3 檢查方法

（1）肉眼、裂隙燈及檢眼鏡鏡觀察眼部情況：排除屈光間質(zhì)和眼底異常。（2）OCT檢查：首先在鼠眼視盤中點(diǎn)下方（6:00位）2 mm處作為視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)檢查的標(biāo)記點(diǎn)。然后，將鼠眼固定于OCT（日本Topcon 3D OCT-1000型）頜架合適位置上，通過(guò)監(jiān)視屏觀察，保證OCT探測(cè)光源對(duì)準(zhǔn)處，采用直線橫向掃描方式，對(duì)視網(wǎng)膜進(jìn)行橫向斷層掃描，掃描線長(zhǎng)4 mm。重復(fù)檢測(cè)3次以上，對(duì)其中成像清晰者存盤（不少于3幅圖像）以備分析。分析測(cè)量依電腦內(nèi)裝程序，根據(jù)不同光反射強(qiáng)度來(lái)分辨視網(wǎng)膜內(nèi)界膜和色素上皮前界（呈現(xiàn)紅色），再用OCT分析儀中設(shè)置的標(biāo)尺對(duì)上述兩點(diǎn)間的距離進(jìn)行測(cè)量，將4 mm長(zhǎng)掃描圖5等分，測(cè)定5個(gè)點(diǎn)位的距離，求其平均值。

1.4 給藥方法

銀杏葉提取物治療組：短暫缺血后，即刻按5 ml/kg體重劑量尾靜脈注射1%銀杏葉提取物（舒血寧），連用10 d。生理鹽水對(duì)照組：短暫缺血后，即刻尾靜脈注射同樣體積的生理鹽水，連用10 d。短暫缺血組和正常組不做處理。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用spss 11.5軟件包，比較鼠眼正常組、短暫缺血組、生理鹽水對(duì)照組和銀杏葉提取物治療組的OCT檢查視網(wǎng)膜厚度平均值的變化。采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

視網(wǎng)膜厚度的比較：短暫缺血組6只實(shí)驗(yàn)大鼠均顯示視網(wǎng)膜厚度增加，神經(jīng)上皮層（除光感受器外）的反射性增強(qiáng)；銀杏葉提取物治療組則視網(wǎng)膜厚度和神經(jīng)上皮層反射性均比短暫缺血時(shí)的鼠眼有所減低；而上述類似改變?cè)谏睇}水對(duì)照組則不明顯。對(duì)鼠眼正常組（圖1）、短暫缺血組（圖2）、生理鹽水對(duì)照組（圖3）和銀杏葉提取物治療組（圖4）的視網(wǎng)膜厚度平均值的OCT檢查結(jié)果，進(jìn)行兩者均值t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的是：短暫缺血組與正常組（t=4.489，P＜0.01)；銀杏葉提取物治療組與短暫缺血組（t=3.366，P＜0.01)；銀杏葉提取物治療組與生理鹽水對(duì)照組（t=6.765，P＜0.01)。而銀杏葉提取物治療組與正常組（t=1.939，P＞0.05）;生理鹽水對(duì)照組與短暫缺血組比較（t=0.579，P＞0.05），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 各組鼠眼視網(wǎng)膜厚度的OCT檢查結(jié)果（±s，μm）

表1 各組鼠眼視網(wǎng)膜厚度的OCT檢查結(jié)果（±s，μm）

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3 討論

隨著社會(huì)日益城鎮(zhèn)化及飲食結(jié)構(gòu)的改變，溺水、異物吸入、手術(shù)麻醉意外、人口老齡化所致短暫全腦缺血、心臟驟停、等多種因素引起短暫缺血，使供應(yīng)眼部血管（眼動(dòng)脈、睫狀動(dòng)脈與視網(wǎng)膜中央動(dòng)脈）的血流減少甚至中斷，導(dǎo)致視功能損害的事件不斷發(fā)生，所以有必要早期、有效、積極的干預(yù)治療以避免視功能受損。

OCT作為一種非接觸性、非侵入性、高分辨率的成像手段，可以產(chǎn)生高精度的視網(wǎng)膜斷面圖像〔6〕，已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于眼底疾病的定位和定性等方面，尤其是對(duì)視網(wǎng)膜疾病的診治起著十分重要的作用。鼠眼短暫缺血以及干預(yù)治療后使用OCT進(jìn)行視網(wǎng)膜檢查有很高的敏感性和特異性，可獲得類似于活體組織病理學(xué)觀察的結(jié)果。因此本研究采用大鼠模擬短暫缺血后所致眼部視網(wǎng)膜改變模型，進(jìn)行OCT檢查以觀察銀杏葉提取物的療效，為相應(yīng)臨床研究提供診療依據(jù)。

我國(guó)擁有銀杏葉資源占世界90%，作為銀杏研究最早、首先將其作為藥物的國(guó)家，其提取物亦是近年來(lái)成為研究的熱點(diǎn)才備受世人關(guān)注。在歐美國(guó)家已采用銀杏葉提取物治療心腦血管和老年癡呆疾病取得良好療效〔7〕，銀杏葉提取物是從植物銀杏葉中提取精制而成的，銀杏葉性味甘苦澀平，有益心斂肺，化濕止瀉作用。據(jù)現(xiàn)代藥理研究，銀杏葉對(duì)人體和動(dòng)物體的作用較為廣泛，已有的資料表明其主要藥理作用有兩大類：銀杏黃酮和內(nèi)酯成分，前者發(fā)揮抗氧化，后者起擴(kuò)張血管的作用〔8，9〕，國(guó)外有學(xué)者 用放射性同位素標(biāo)記后，給動(dòng)物口服銀杏葉，在視網(wǎng)膜上顯示藥物有足夠的濃度及其代謝產(chǎn)物〔10〕，再次說(shuō)明銀杏葉能通過(guò)血眼屏障到達(dá)視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞。

從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看：夾閉大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈10分鐘造成的短暫缺血時(shí)間已經(jīng)超過(guò)了細(xì)胞耐受極值，此時(shí)肉眼可見(jiàn)球結(jié)膜蒼白，檢眼鏡顯示視網(wǎng)膜缺血。采用OCT檢測(cè)短暫缺血組與正常組的鼠眼視網(wǎng)膜厚度，兩者均值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；短暫缺血組不僅視網(wǎng)膜厚度增加，而且神經(jīng)上皮層的反射性亦增強(qiáng)；這就表明建立的短暫缺血后視網(wǎng)膜改變模型已成功。同樣地OCT檢測(cè)鼠眼視網(wǎng)膜厚度：兩者均值比較，銀杏葉提取物治療組與短暫缺血組；銀杏葉提取物治療組與生理鹽水對(duì)照組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；銀杏葉提取物治療組療效明顯優(yōu)于生理鹽水對(duì)照組。在神經(jīng)上皮層反射性方面，視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)或細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變可引起其光學(xué)特性的改變，引起反射性增強(qiáng)的原因包括視網(wǎng)膜動(dòng)脈阻塞、炎癥滲出至各層視網(wǎng)膜、硬性滲出、出血、新生血管膜、視網(wǎng)膜色素沉著以及前膜形成等；反射性減弱可以由視網(wǎng)膜水腫引起。本研究中銀杏葉提取物治療組神經(jīng)上皮層反射性均比短暫缺血時(shí)的鼠眼有所減低；而上述類似改變?cè)谏睇}水對(duì)照組則不明顯，表明銀杏葉提取物治療組療效優(yōu)于對(duì)照組。我們推測(cè)銀杏葉提取物在臨床劑量下，調(diào)節(jié)血管活性，改善微循環(huán)等作用，有利于疏通小血管內(nèi)的血液瘀滯，有可能減低鼠眼短暫缺血后視網(wǎng)膜病變，從而保護(hù)和恢復(fù)缺血后視功能，避免不可逆的的視功能損害。

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