文│王姣姣 赫彩霞 高文惠（河北科技大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院）

我國(guó)是一個(gè)飼料生產(chǎn)消耗大國(guó)，然而在飼料的生產(chǎn)、加工、運(yùn)輸及貯存過程中，飼料霉變的現(xiàn)象屢見不鮮，霉菌毒素對(duì)飼料不同程度的污染，造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，已成為飼料業(yè)和畜牧業(yè)生產(chǎn)中不可忽視的問題。隨著飼料工業(yè)的快速發(fā)展，飼料防霉劑的應(yīng)用日益廣泛，對(duì)飼料行業(yè)的貢獻(xiàn)越來越大，品種也日益增多，因此對(duì)飼料防霉劑防霉效果的檢驗(yàn)成為關(guān)鍵。

飼料防霉劑防霉效果的檢測(cè)方法有杯碟法、最低抑菌濃度（MIC）法、飼料強(qiáng)化防霉（破壞性試驗(yàn)）、飼料常規(guī)試驗(yàn)、二氧化碳稀釋法、溫度測(cè)定法、平皿記數(shù)法等。本試驗(yàn)將某公司生產(chǎn)的防霉劑添加到飼料中使用，通過破壞性實(shí)驗(yàn)法和平皿計(jì)數(shù)法研究其對(duì)飼料的防霉效果。

一、材料與方法

培養(yǎng)基。硝酸鈉2克、磷酸二氫鉀1克、硫酸鎂0.5克、氯化鉀0.5克、硫酸亞鐵0.01克、氯化鈉60克、蔗糖30克、瓊脂20克、蒸餾水1000毫升。上述試劑中瓊脂為生化試劑，其余為分析純?cè)噭?/p>

（1）破壞性試驗(yàn)。提高飼料含水量為12%、14%、16%，并將恒溫培養(yǎng)箱中的濕度調(diào)節(jié)為85%，溫度28℃的條件下儲(chǔ)存飼料。

（2）平皿計(jì)數(shù)法。將加入不同比例（0、0.3‰、0.5‰、0.7‰）防霉劑的飼料在一定條件下儲(chǔ)存，每隔7天進(jìn)行取樣，用稀釋液稀釋、振蕩后將上層液吸取1毫升，與培養(yǎng)基混勻，培養(yǎng)后進(jìn)行計(jì)數(shù)。

（3）試驗(yàn)分組與編號(hào)。在飼料中添加不同量的防霉劑，同時(shí)按照試驗(yàn)要求調(diào)節(jié)飼料中的水分含量，并對(duì)樣品進(jìn)行編號(hào)，具體方案見表1。

表1 樣品編號(hào)

二、操作步驟

1.培養(yǎng)基與稀釋液的配制。用蒸餾水加溫溶解培養(yǎng)基成分，分裝后121℃高壓滅菌30分鐘。必要時(shí)，可酌量增加瓊脂。稱取分析純氯化鈉8.5克，用蒸餾水溶解，定容1000毫升，制成稀釋液。按需要量分裝在試管和三角瓶中，121℃高壓滅菌30分鐘。其他玻璃器具和槍頭在同樣條件下滅菌備用。

2.感官檢測(cè)。觀察飼料的色澤，聞飼料的香氣，并挑起少量飼料觀察形態(tài)。

3.取樣檢測(cè)。

（1）將飼料編號(hào)后在實(shí)驗(yàn)條件下儲(chǔ)存，每隔7天進(jìn)行取樣。以無菌操作稱取有霉菌的飼料25克，放入含有225毫升滅菌生理鹽水的250毫升三角瓶中，振蕩30分鐘，即為1∶10稀釋液。

（2）用移液槍取上述稀釋液1毫升，注入盛有9毫升稀釋液的試管中，充分振蕩，使霉菌孢子分散開，完成100倍稀釋。用相同的方法完成1000倍稀釋。

（3）將以上稀釋液用移液槍各取1毫升注入平皿中，倒入適量45℃以下的培養(yǎng)基，充分混勻，待其凝固后，倒置放入恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，3天后開始觀察，培養(yǎng)觀察一周。

4.水分含量的測(cè)定。稱取2.000克的飼料放入稱量瓶，在103±2℃的干燥箱中烘干3小時(shí)，取出在干燥器中冷卻至室溫后稱量，再放入干燥箱中干燥30分鐘，取出后冷卻稱量，兩次稱量值相差小于0.002克視為恒重，計(jì)算水分含量。

5.數(shù)據(jù)分析和顯著性檢驗(yàn)。記錄實(shí)驗(yàn)過程中的數(shù)據(jù)，用OriginPro8軟件根據(jù)數(shù)據(jù)作圖，觀察儲(chǔ)存期內(nèi)霉菌數(shù)的變化以及飼料水分含量的變化趨勢(shì)和規(guī)律。將實(shí)驗(yàn)結(jié)果用SPSS Statistics軟件進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。

三、結(jié)果與分析

1.感官檢驗(yàn)。記錄感官檢驗(yàn)的結(jié)果如下。

（1）儲(chǔ)存7天后取出，1～12號(hào)樣品在色澤、氣味和組織方面無明顯變化。

（2）儲(chǔ)存14天后取出，1～2號(hào)及4～12號(hào)樣品色澤變淺，氣味減弱，組織方面無明顯變化，3號(hào)樣品色澤明顯變暗，少量結(jié)塊。

（3）儲(chǔ)存21天后，1～2號(hào)少量結(jié)塊，3號(hào)長(zhǎng)出肉眼可見的少量霉菌，6～7號(hào)、9號(hào)以及12號(hào)微量結(jié)塊。其他樣品組織方面無明顯變化，色澤變暗，氣味減弱，無異味。

（4）儲(chǔ)存28天后，1～2號(hào)、5～6號(hào)結(jié)塊，3、6、9、12號(hào)大量結(jié)塊且3號(hào)長(zhǎng)出大量霉菌，4號(hào)、7號(hào)、8號(hào)、10號(hào)無明顯變化。

（5）儲(chǔ)存35天后，1～9號(hào)變質(zhì)且3號(hào)、6號(hào)長(zhǎng)出大量霉菌，11-12號(hào)結(jié)塊。10號(hào)輕微結(jié)塊。

表2 各組樣品平均霉菌數(shù)

由以上結(jié)果可知，在高溫高濕的儲(chǔ)存環(huán)境中，飼料的色澤首先會(huì)發(fā)生變化，其次氣味減弱，隨著時(shí)間的推移會(huì)少量結(jié)塊，此時(shí)，飼料已經(jīng)變質(zhì)，商品及食用價(jià)值消失。繼續(xù)儲(chǔ)存，飼料表面會(huì)長(zhǎng)出肉眼可見的霉菌，發(fā)生腐敗。

2.霉菌檢測(cè)數(shù)。儲(chǔ)存之前用平皿計(jì)數(shù)法測(cè)量飼料原樣品的霉菌數(shù)，之后每隔7天測(cè)量一次，隨著天數(shù)的增加，飼料中霉菌數(shù)逐漸增加。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果可作圖，對(duì)水分含量相同，防霉劑添加量不同，以及防霉劑添加量相同，水分含量不同的飼料進(jìn)行直觀的比較可以看出，加入防霉劑0～7天之間，霉菌數(shù)有所下降。由此可見，此種防霉劑具有一定的殺菌作用；3號(hào)和6號(hào)樣品在14到21天中霉菌數(shù)增長(zhǎng)速度加快，其他樣品在21到35天時(shí)霉菌數(shù)增長(zhǎng)速度也明顯加快，因此，在儲(chǔ)存期的后期，防霉劑的防霉作用不明顯；3號(hào)和6號(hào)樣品水分含量相同，防霉劑添加量不同，但最終霉菌數(shù)相似，因此，當(dāng)飼料的水分含量在16%時(shí)，防霉劑作用不明顯，此時(shí)應(yīng)提高防霉劑的添加量，以達(dá)到防霉效果。

◎圖1 飼料儲(chǔ)存試驗(yàn)霉菌檢測(cè)數(shù)

3.水分含量。試驗(yàn)中測(cè)量霉菌數(shù)的同時(shí)，對(duì)飼料的水分含量也進(jìn)行了測(cè)量，并記錄結(jié)果。根據(jù)水分含量的測(cè)定結(jié)果可以作圖對(duì)不同的樣品作出直觀的分析。由圖2可知，飼料儲(chǔ)存過程中，水分含量一般先上升再下降然后第二次上升。綜合感官檢驗(yàn)結(jié)果，在水分含量第二次上升時(shí)一般會(huì)飼料發(fā)生霉變；加入防霉劑的飼料水分含量下降較慢，可見，此種防霉劑具有一定的保水作用。

◎圖2 飼料儲(chǔ)存過程中水分含量的變化

4.防霉效果差異顯著性檢驗(yàn)。根據(jù)試驗(yàn)過程中記錄的數(shù)據(jù)，計(jì)算出未添加飼料防霉劑但水分含量不同的各組樣品在儲(chǔ)存期內(nèi)的平均霉菌數(shù)，見表2，以此作為差異顯著性檢驗(yàn)中與其水分含量相同，但添加了不同量防霉劑樣品的檢驗(yàn)值。

將上表中的平均霉菌數(shù)作為與之相對(duì)應(yīng)的樣品T檢驗(yàn)的檢驗(yàn)值，得出各樣品之間差異顯著性結(jié)果，見表3。

從上表可以看出，在和1號(hào)樣品比較的過程中，只有10號(hào)樣品得出的sig值小于0.05，具有顯著性差異；在和2號(hào)樣品的比較過程中，5號(hào)、8號(hào)、11號(hào)樣品的sig值均小于0.05，具有顯著性差異；在和3號(hào)樣品比較的過程中，只有12號(hào)樣品的sig值小于0.05，具有顯著性差異。由此可知，在飼料水分含量為12%和16%時(shí)，防霉劑的少量添加所起到的防霉作用不明顯，只有在加大添加量時(shí)才會(huì)有顯著地防霉作用；在飼料水分含量為14%時(shí)，即使少量添加防霉劑，防霉效果依然明顯。因此，飼料本身的水分含量對(duì)防霉劑的防霉效果有影響。

四、討論與結(jié)論

1.試驗(yàn)方法的選擇。破壞性試驗(yàn)旨在提高飼料水分含量，惡化環(huán)境（高溫、高濕）從而促使飼料盡快發(fā)霉。平皿記數(shù)法根據(jù)霉菌生理特性和防霉劑防霉機(jī)理，選擇適宜霉菌生長(zhǎng)而不適宜細(xì)菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，采用平皿記數(shù)法，在一定菌液中加入一定量的防霉劑，培養(yǎng)后測(cè)定霉菌菌落總數(shù)、菌落總數(shù)越少，表明其防霉抑菌效果越佳。

本試驗(yàn)綜合以上兩種試驗(yàn)方法，將培養(yǎng)箱的溫度調(diào)為霉菌的最適生長(zhǎng)溫度，即25～28℃，將濕度調(diào)為85%，在盡量縮短試驗(yàn)時(shí)間的基礎(chǔ)上保證了試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

2.結(jié)論。飼料本身的水分含量對(duì)防霉劑的防霉效果有一定的影響，當(dāng)水分含量較高時(shí)，防霉劑的防霉效果不明顯。試驗(yàn)結(jié)果表明，此種防霉劑具有一定的殺菌作用，同時(shí)具有一定的保水作用。綜合感官檢驗(yàn)結(jié)果，在水分含量第二次上升時(shí)飼料發(fā)生霉變，根據(jù)這個(gè)規(guī)律可以通過測(cè)量飼料的水分含量來預(yù)測(cè)飼料發(fā)霉變質(zhì)的時(shí)間和階段。

表3 差異顯著性檢驗(yàn)