李 燕 蔣守群 陳 偉
(廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動物科學(xué)研究所,畜禽育種國家重點實驗室,農(nóng)業(yè)部華南動物營養(yǎng)與飼料重點實驗室,廣東省動物育種與營養(yǎng)公共實驗室,廣東省畜禽育種與營養(yǎng)研究重點實驗室,廣州 510640)
雌馬酚(equol,Eq)最早是1932年 Martian在懷孕的馬(equine)尿液中分離得來,它屬于有雌激素作用的二元酚(diphenol),因此 Eq被命名equol。隨后發(fā)現(xiàn)牛、雞、猴、黑猩猩、犬、大鼠、小鼠、豬和人的尿液或血漿中也有Eq。Eq是大豆異黃酮在腸道微生物菌群作用下的代謝產(chǎn)物,生物活性廣泛,具有激素樣作用、抗氧化作用、免疫調(diào)控功能和保健功能。研究發(fā)現(xiàn)Eq的生物活性比大豆異黃酮更高[1-2],大豆異黃酮的生物學(xué)作用可能歸因于Eq。近年來Eq在動物體內(nèi)的產(chǎn)生和代謝及生物學(xué)功能已經(jīng)成為研究熱點。
Eq分子式為 C15H14O3,相對分子質(zhì)量為242.27,化學(xué)名稱為 7-羥基-3-(4-羥苯基)-苯并二氫吡喃,屬于非甾體類雌激素。Eq無極性,難溶于水,在酸中不穩(wěn)定易被破壞。由于C-3具有手性,Eq有2種對映體,即 R 型-Eq[R-(+)-equol]和S型-Eq[S-(-)-equol],其中機體內(nèi)大豆黃素(daidzein,Dai)代謝產(chǎn)生的Eq為S型-Eq,而人工合成的Eq則是R型-Eq和S型-Eq的混合物即外消旋Eq[(±)-Eq]。S型-Eq和 R型-Eq性質(zhì)有所差別,對雌激素受體(ER)-α、ER-β親和性不一樣。S型-Eq與ER-β親和力較強,R型-Eq與ER-α親和力較弱,與ER-β的親和力更弱,2種異構(gòu)體與ER的親和力均高于其前體物Dai[1]。
Eq的生成途徑見圖1。Eq來自于大豆異黃酮的代謝,大豆異黃酮在大豆中主要以非活性的大豆苷形式存在,約占97%~98%,被動物攝入后在空腸中β-葡萄糖苷酶作用下,生成有活性游離型的Dai,也稱大豆苷元。少量Dai被腸上皮細胞直接吸收,大量的Dai通過腸肝循環(huán)到達結(jié)腸被微生物菌群代謝。在結(jié)腸,Dai可在細菌酶的作用下代謝,參與的主要細菌有芽孢菌屬、梭菌屬、乳酸桿菌屬等[3],具體過程為:Dai先加氫形成二氫大豆苷元,也稱雙氫大豆素(dihydrodaidzein,DHD),DHD既可通過C-環(huán)開環(huán)形成O-脫甲基安哥拉紫檀素(O-desmethylangolensin,O-DMA),也可去酮形成 Eq[4]。Shimada 等[5]研究發(fā)現(xiàn)乳酸球菌 20-92可通過大豆苷元還原酶(daidzein reductase)催化Dai還原為DHD,通過二氫大豆苷元-Eq還原酶催化DHD還原為Eq。大豆苷元還原酶和二氫大豆苷元-Eq還原酶都屬于還原型輔酶Ⅱ[NADP(H)]依賴性酶[6]。韓偉[7]從健康成人腸道中獲得的產(chǎn)Eq腸道菌Slackia屬菌株HY-2,發(fā)現(xiàn)該菌株也可產(chǎn)生大豆苷元還原酶和二氫大豆苷元-Eq還原酶,而且都需要Dai的誘導(dǎo)。
目前關(guān)于Eq代謝的研究很少。最早人們以為Eq性質(zhì)比較穩(wěn)定,沒有進一步的生物轉(zhuǎn)化。Rüfer等[8]研究多氯聯(lián)苯處理的雄性 Wister大鼠肝臟微粒體代謝Eq時,發(fā)現(xiàn)Eq可被轉(zhuǎn)化為6種代謝產(chǎn)物,主要是3-羥基-Eq(3-OH-Eq)和6-羥基-Eq(6-OH-Eq),其次是8-羥基-Eq(8-OH-Eq)和非對映異構(gòu)體4-羥基-Eq(4-OH-Eq),而且Eq是通過大豆異黃酮羥化或者P450酶催化羥化。Setchell等[9]研究報道,成年人一次性口服25 mg Eq后,在4~6 h時血漿Eq濃度最高,半衰期是8.8 h,藥代動力學(xué)和其他大豆異黃酮類似,但是Eq的血漿清除速率比大豆異黃酮慢很多。Walsh等[10]用人結(jié)腸癌(Caco-2)細胞模擬腸道細胞試驗時,結(jié)果發(fā)現(xiàn)只有游離Eq才能進入Caco-2細胞,而且這些游離Eq大部分可被轉(zhuǎn)化成葡萄糖苷配基和硫酸配基形式,然后溢出細胞發(fā)揮生物活性。
圖1 推測的Dai轉(zhuǎn)化為Eq的代謝途徑Fig.1 Proposed metabolic pathway from Dai to Eq[11]
除了馬、人尿液以外,在綿羊血漿、大鼠、小鼠、猴等動物尿液中也發(fā)現(xiàn)含有Eq,但并不是所有的動物都能利用Dai代謝生成Eq。通過攝入大豆蛋白,Eq未能在漢普夏-杜洛克雜交豬血清和婦女血漿中檢測出,鼠和猴血清中Eq占大豆異黃酮總量的71%~90%[12],這可能與動物腸道內(nèi)富含生成Eq細菌有關(guān)。而人群中能夠代謝Dai為Eq的比率是35%,黃種人比率高于白種人和黑種人,這可能與機體的生理功能、遺傳背景和膳食結(jié)構(gòu)有關(guān)系[13-14]。Védrine 等[15]研究發(fā)現(xiàn),人連續(xù) 1個月食用富含大豆異黃酮食物后,Eq生成者血漿中Eq濃度顯著高于第1天,但是非Eq生成者體內(nèi)依然不能生成Eq。
Eq的生成必須有腸道內(nèi)微生物菌群的參與,無菌動物不能產(chǎn)生Eq。人腸道菌群的數(shù)量級是1014,由于分離細菌的條件不一致,分離腸道產(chǎn)Eq菌比較復(fù)雜,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)分離的產(chǎn)Eq菌有乳酸球菌、乳酸桿菌、梭菌、真桿菌等。簡而言之,有些菌可分階段(大豆苷→Dai→DHD→Eq)將Dai最終分解為Eq,也有菌可直接將Dai分解為Eq[16]。研究發(fā)現(xiàn)人糞便中梭狀芽孢桿菌HGH6、黏液真桿菌Julong 732、乳酸桿菌 sp.Niu-O16等可將 Dai或DHD代謝產(chǎn)生Eq[17]。產(chǎn) Eq菌可以是單獨1種細菌還可以是多種細菌共同作用,而且有些細菌可抑制Eq生成[3]。人體中S型-Eq可能是多種細菌產(chǎn)生的,Decroos等[18]研究發(fā)現(xiàn)在人糞便中共同產(chǎn)Eq菌有腸球菌EPI1、乳酸菌EPI2、大芬戈爾德菌EPI3、韋永氏球菌。Tamura等[19]給成年小鼠飼喂大豆異黃酮飼糧4周后,體外培養(yǎng)糞便微生物,結(jié)果表明,與飼喂酪蛋白-異黃酮飼糧組小鼠相比,大豆異黃酮組小鼠糞便中梭型菌數(shù)顯著降低,乳酸菌數(shù)顯著升高。Yu等[20]分離鑒定了豬糞中產(chǎn)Eq菌,鑒定出1種真細菌。豬體內(nèi)生成Eq的能力和人類類似,于卓騰等[21]通過體外培養(yǎng)二花臉豬的糞樣微生物,結(jié)果發(fā)現(xiàn)部分二花臉豬糞樣菌群具有降解大豆異黃酮產(chǎn)生Eq的能力。在此基礎(chǔ)上,鄭衛(wèi)江等[22]又檢測了梅山豬和大白母豬的尿液和糞便,發(fā)現(xiàn)長期飼喂玉米-豆粕飼糧均可產(chǎn)生Eq,但是Dai代謝為Eq的能力在豬品種間存在差異。腸道中的乳糖酶活性也可影響Eq的生成,當機體的乳糖酶活性較低時,可分解少量的大豆異黃酮,大量的大豆異黃酮進入到結(jié)腸代謝為Eq,同時,低乳糖酶活性會影響其他營養(yǎng)物質(zhì)到達結(jié)腸的時間,進一步影響腸道微生物菌群[23]。
研究發(fā)現(xiàn),Eq的產(chǎn)量與機體攝入的飼糧組成也有一定關(guān)系[24],如脂肪、碳水化合物、纖維素、果糖、維生素。飼糧中必須含有大豆異黃酮底物大豆(或母綿羊攝入含芒柄花黃素的紅三葉草)[25],動物血漿或尿液中才可能檢測到Eq。氫氣可作為轉(zhuǎn)化過程的電子供體促進Eq的生成。Rowland等[26]研究發(fā)現(xiàn)攝入脂肪量與尿液中Eq的量呈顯著負相關(guān)關(guān)系,推測可能是脂肪的攝入降低了腸道微生物合成Eq的能力。Miyanaga等[27]研究發(fā)現(xiàn)產(chǎn)Eq者(血清中Eq濃度≥0.5 ng/mL)攝入的大豆和綠茶要顯著多于非產(chǎn)Eq者,而且產(chǎn)Eq者消耗的硒和粗纖維更低。Hedlund等[28]研究表明,白種人產(chǎn)Eq能力受長期攝入的大量大豆及肉食影響。Lampe等[29]也發(fā)現(xiàn),婦女產(chǎn)Eq者攝入碳水化合物占總能量比例要顯著高于非產(chǎn)Eq者,而且消耗更多植物蛋白質(zhì)和食物纖維。Zheng等[30]研究發(fā)現(xiàn)體外培養(yǎng)大白妊娠母豬糞便微生物,在200 mmol/L大豆苷元中添加10 g/L乳果糖可顯著提高Eq的生成量。
攝入抗生素會改變Eq的產(chǎn)量,抗生素能破壞腸道微生物菌群平衡,從而影響大豆異黃酮腸道微生物正常生長與轉(zhuǎn)化。Blair等[31]研究發(fā)現(xiàn)在獼猴體內(nèi),卡那霉素、脫氧土霉素、萬古霉素、甲硝噠唑可顯著降低血漿中Eq濃度,其中卡那霉素在降低血漿Eq濃度同時顯著提高血漿中Dai、DHD和黃豆黃素濃度;而多西環(huán)素對血漿Eq濃度無影響,但可顯著提高血漿中 Dai、染料木黃酮(genistein,Gen)、二氫染料木素和黃豆黃素濃度,可能是因為有些抗生素對腸道微生物代謝大豆異黃酮有直接作用,另外一些抗生素則改變腸壁吸收狀況。Atkinson等[32]也發(fā)現(xiàn)一些抗生素可改變Eq產(chǎn)量,但是對DHD產(chǎn)量及Dai轉(zhuǎn)為DHD的轉(zhuǎn)化率無影響,也說明腸道細菌的復(fù)雜性。倪鑫等[33]把ICR小鼠糞樣加入大豆苷元和抗生素進行培養(yǎng),結(jié)果發(fā)現(xiàn)使用正常成人劑量抗生素(阿莫西林、氧氟沙星、諾氟沙星、多西環(huán)素、利君沙、頭孢拉定、阿奇霉素、吉他霉素、土霉素、利福平、甲硝唑),均能完全抑制ICR小鼠腸道微生物菌群體外轉(zhuǎn)化大豆苷元為Eq能力;當加入成人劑量1/32時,阿莫西林、氧氟沙星、諾氟沙星、多西環(huán)素、利君沙、頭孢拉定可顯著降低培養(yǎng)基中Eq濃度,其他5種抗生素則完全抑制大豆苷元向Eq的轉(zhuǎn)化。
Eq作為大豆異黃酮的代謝產(chǎn)物,最早被人們關(guān)注的是其雌激素樣作用。當體內(nèi)雌激素缺乏時,其可成為雌激素促效劑;而當體內(nèi)雌激素過多時,與ER競爭性結(jié)合,減少雌激素與ER結(jié)合的機會,從而減輕雌激素的促細胞增殖作用,降低與雌激素有關(guān)的疾病危險。王建等[34]研究表明在體外培養(yǎng)的大鼠成骨細胞中添加Eq,可促進成骨細胞增殖及前成骨細胞向成骨細胞的轉(zhuǎn)化,Eq的促進作用可能是通過ER所介導(dǎo)。Legette等[35]也發(fā)現(xiàn)在去卵巢大鼠飼糧中添加200 mg/kg外消旋Eq可促進其骨骼發(fā)育,顯著增加子宮上皮細胞的增殖指數(shù)。據(jù)Shutt等[36]報道Eq對小鼠子宮增重的效果相當于Gen。Nishide等[37]研究發(fā)現(xiàn)S型-Eq可通過與ER結(jié)合,減少炎癥細胞因子,降低去卵巢小鼠的骨骼損失。女性雌激素失衡可導(dǎo)致很多疾病,如乳腺癌、動脈粥樣硬化、骨質(zhì)疏松,而Eq可與ER受體結(jié)合,發(fā)揮雌激素功效,從而抑制雌激素失衡導(dǎo)致的相關(guān)疾病。Ishiwata等[38]研究表明,服用S型-Eq可顯著改善日本非產(chǎn)Eq婦女在圍絕經(jīng)期或絕經(jīng)后期的情緒癥狀。
Eq在雄性動物體內(nèi)表現(xiàn)為抗雄激素作用。Eq與 5α-二氫睪酮(5α-dihydrotestosterone,5α-DHT)有高親和力,可與其結(jié)合使其隔離,不能與5α-DHT受體結(jié)合[39]。雄激素可促進前列腺癌細胞的生長,Lund等[39]研究發(fā)現(xiàn),用人前列腺癌(LNCap)細胞做體外試驗時,5α-DHT可顯著增加LNCap細胞的雄激素刺激生物標記物即前列腺特異性抗原(prostate specific antigen,PSA)水平,而5α-DHT+Eq有抑制PSA水平增加的趨勢;同時在動物試驗中,Eq處理顯著降低了大鼠的前列腺重和血漿 5α-DHT 水平。Loutchanwoot等[40]研究也發(fā)現(xiàn),高劑量Eq(250 mg/kg BW)可顯著降低大鼠精囊的絕對重量和相對重量。
Eq屬于多酚類物質(zhì),可作為氫/電子受體,清除自由基。Rimbach等[41]研究發(fā)現(xiàn)Eq在清除巨噬細胞產(chǎn)生的一氧化氮(NO)能力上和Dai類似,僅次于 Gen,Rüfer等[8]也有類似結(jié)果。Choi等[42]比較了大豆異黃酮代謝產(chǎn)物對人HepG2細胞抗氧化活性的影響,結(jié)果表明O-DMA、Eq、Dai和大豆苷元都可顯著提高過氧化氫酶(CAT)和總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性,其中O-DMA和Eq抗氧化能力高于 Dai。Hwang等[43]報道,Eq處理細胞可抑制可J774細胞產(chǎn)生的超氧根離子(O2-·),是通過失活還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶復(fù)合物,同時降低細胞產(chǎn)生的O2-·,導(dǎo)致NO水平提高。Jackman等[44]發(fā)現(xiàn),Eq在高血壓小鼠動脈中具有弱的抗氧化性。Sierens等[45]發(fā)現(xiàn)Eq可以保護因氧化應(yīng)激造成的DNA損傷。Cheng等[46]報道,Eq通過降低內(nèi)皮一氧化氮合酶(NOS)表達,顯著抑制由利托那韋誘導(dǎo)的豬肺動脈和人肺動脈上皮細胞氧化損傷。Rowlands等[47]發(fā)現(xiàn),Eq通過調(diào)節(jié)線粒體活性氧產(chǎn)生激活內(nèi)皮細胞NOS活性和氧化還原通路。Choi等[48]發(fā)現(xiàn),短期攝入Eq能顯著提高CAT和超氧化物歧化酶(SOD)活性,抵抗小鼠氧化應(yīng)激。
Gen和Dai對機體有免疫調(diào)控功能[49-50]。研究發(fā)現(xiàn),Gen可抑制體內(nèi)抗原特異性免疫反應(yīng)和體外淋巴細胞分化,可促進自然殺傷細胞和細胞毒素T細胞的細胞毒性反應(yīng)和細胞因子數(shù)量[51]。Dai可顯著降低由脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的樹突狀細胞的細胞表面標記物分化抗原簇(CD)40、CD80的含量,顯著降低促炎癥因子如白細胞介素(IL)-6和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的含量[52]。但是Eq作為大豆異黃酮的代謝產(chǎn)物,研究較少。Eq的免疫保護作用可能是有其抗氧化作用所介導(dǎo)的,Widyarini等[53]研究小鼠皮膚受到長波紫外線(320~400 nm)損傷時,涂抹Eq對皮膚有免疫保護作用,不僅在于可激活皮膚的雌激素受體信號通路,還可誘導(dǎo)內(nèi)源皮膚抗氧化酶-血紅素加氧酶(hemeoxygenase,HO)起保護作用。Selvaraj等[54]研究發(fā)現(xiàn),通過飼糧或皮下注射Eq對30日齡去卵巢小鼠陰道上皮厚度有劑量增加效應(yīng),而對胸腺或脂肪組織均無影響。Kang等[55]研究發(fā)現(xiàn)LPS處理小鼠時,注射Eq可通過下調(diào)巨噬細胞的蛋白激酶B(Akt)激活來抑制NO產(chǎn)量和可誘導(dǎo)NOS基因表達。Sakai等[56]研究免疫卵清蛋白的BALB/c小鼠體內(nèi),Eq可促進特定抗體 IgE的產(chǎn)生。
大量人醫(yī)方面的研究表明,Eq對腫瘤、心血管疾病的防治有一定作用。Magee等[57]研究發(fā)現(xiàn),R型-Eq和S型-Eq可通過下調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)的表達來抑制人乳腺癌MDA-MB-231細胞的增殖。Eq對紫外線或者7,12-二甲苯蒽(DMBA)誘發(fā)的皮膚癌有抑制作用,Widyarini等[58]研究發(fā)現(xiàn),皮膚涂抹Eq對患皮膚癌的無毛小鼠有保護作用,短期研究表明Eq可通過抑制腫瘤引發(fā)的生物標志物鳥氨酸脫羧酶的誘導(dǎo)來發(fā)揮作用,而且有劑量依賴性。Eq對牛的主動脈內(nèi)皮細胞有保護作用,Eq可抑制過氧化氫(H2O2)引起的牛主動脈內(nèi)皮細胞死亡,顯著增加其磷酸化p38絲裂原激活的蛋白激酶(p38-MAPK)和B細胞淋巴瘤2(Bcl-2)的表達量[59]。
目前,大豆異黃酮在豬、雞、鴨上有一定應(yīng)用。Eq作為大豆異黃酮代謝產(chǎn)物,在畜禽上的研究及應(yīng)用非常有限。對雞而言,研究集中于早期蛋內(nèi)注射Eq影響肉雞性腺發(fā)育與肉質(zhì)性狀,但是具體機理尚待研究。如吳晶等[60]報道,雞蛋胚早期發(fā)育過程中注射20μg Eq可顯著提高49日齡雌性雞的卵巢重。Wei等[61]報道,給7日齡雞蛋胚分別注射低劑量(10μg)和高劑量(100μg)Eq,49日齡屠宰肉雞,結(jié)果表明:Eq對肉雞生長性能無顯著影響;雌性雞肉質(zhì)受Eq影響更大,低劑量和高劑量組的肉色紅度(a*值)與對照組相比,分別降低了24.10%和21.50%,2組蒸煮損失分別降低了12.11%和16.82%,高劑量組24和 48 h滴水損失分別降低了60.27%和45.72%,而雄性肉雞僅高劑量組顯著降低蒸煮損失;同時,Eq可改善肉雞抗氧化性能,低劑量組可顯著提高肉雞血漿谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性,低劑量組和高劑量組都可提高胸肌中T-SOD活性。對于豬而言,主要是南京農(nóng)業(yè)大學(xué)朱偉云課題組自2008年開始研究不同品種豬產(chǎn)Eq規(guī)律,而且已經(jīng)鑒定出部分細菌[20-22],并對腸道微生物進行營養(yǎng)調(diào)控,如添加乳果糖增強其產(chǎn)Eq的能力[30]。
本實驗室開展了Eq對氧化處理雞體外培養(yǎng)細胞的影響研究,結(jié)果表明添加20μmol Eq顯著降低了LPS刺激巨噬細胞中丙二醛(MDA)的含量,隨著Eq的水平提高,細胞中谷胱甘肽(GSH)含量呈上升趨勢。添加40、160μmol的Eq可調(diào)控Toll樣受體4(TLR4)、核轉(zhuǎn)錄因子NF-E2相關(guān)因子 2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)、IL-1β、TNF-α、IL-2和 IL-6 基因的表達,結(jié)果提示 Eq能增強細胞對病原分子的應(yīng)答反應(yīng),有利于細胞免疫功能、抗氧化功能的發(fā)揮[62]。另外,本實驗室也研究了Eq對雞小腸上皮細胞(intestinal epithelial cell,IEC)氧化應(yīng)激的影響發(fā)現(xiàn),Eq可以抑制H2O2引起的細胞MDA含量升高,并能夠顯著提高細胞SOD的活性;添加100 nmol Eq顯著提高了Nrf2、腸黏膜緊密連接蛋白(claudin)和SOD-1基因的表達量,綜上推測Eq有緩解雞IEC氧化應(yīng)激的作用[63]。
自然狀態(tài)下不是所有動物腸道都可代謝產(chǎn)生Eq,即使是同一品種不同個體之間Eq的產(chǎn)生也可能存在差別。腸道產(chǎn)Eq菌比較復(fù)雜,目前尚未研究清楚,食用大豆異黃酮能使產(chǎn)Eq者血漿中Eq濃度顯著提高,非產(chǎn)Eq者依然不能產(chǎn)生Eq[15],說明腸道產(chǎn)Eq菌對Eq的生成起著關(guān)鍵作用。目前已有研究利用化學(xué)方法來合成Eq,Muthyala等[1]研究提出以Dai或芒柄花黃素為底物,甲酸銨作為供氫體,20%氫氧化鈀炭[Pd(OH)2/C]作為催化劑,醋酸作反應(yīng)溶劑,反應(yīng)產(chǎn)物為外消旋Eq,但其步驟繁瑣、成本高。Heemstra等[64]以 2-溴-4甲氧基苯甲醇、溴化鈉為原料,經(jīng)過多步化學(xué)反應(yīng),氫化鋁鋰(LiAlH4)作為手性助劑,得到S型-Eq,反應(yīng)中使用了昂貴試劑及催化劑。史成陽[65]通過以間苯二酚和對羥基苯乙酸為原料,經(jīng)過傅克?;?、環(huán)合、羥基保護、催化加氫、脫水和手性催化還原,對反應(yīng)條件進行優(yōu)化,得到S型-Eq、R型-Eq和消旋體Eq,這種方法使用原料廉價,而且避免了高污染高危險性試劑,但仍需中試放大及工業(yè)化放大進行驗證。目前看來,通過合成得到的Eq大多產(chǎn)量低而且價格昂貴,應(yīng)用于科學(xué)研究,作為商品生產(chǎn)的條件還不成熟。因此亟待加強對腸道產(chǎn)Eq菌的分離鑒定、Eq產(chǎn)量的調(diào)控技術(shù)和化學(xué)合成技術(shù)及其抗氧化功能和免疫功能的機理進行深入研究。
Eq具有激素樣、抗氧化、免疫調(diào)控及保健等生物學(xué)作用,畜禽最常見的飼糧類型就是玉米-豆粕型,如果能提高畜禽腸道大豆異黃酮代謝為Eq的產(chǎn)量,不僅對畜禽本身有益,還可降低成本。在此過程中,腸道微生物菌群發(fā)揮了很重要的作用,那么為了提高其代謝效率,鑒定、分離并應(yīng)用于非產(chǎn)Eq者體內(nèi)就顯得尤為重要。焦磷酸測序技術(shù)能夠幫助發(fā)現(xiàn)腸道內(nèi)不能被培養(yǎng)的產(chǎn)Eq菌。利用微生物學(xué)法和化學(xué)合成法,借鑒目前在人醫(yī)上新的技術(shù)和思路,將有助于Eq在畜禽上的安全高效應(yīng)用。
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