丁立平， 蔡春平， 林永輝， 吳文凡， 方 祥

（1.福清出入境檢驗(yàn)檢疫局技術(shù)中心，福建 福清350300；2.福建出入境檢驗(yàn)檢疫局技術(shù)中心，福建 福州350001）

硝基麝香是人類最早合成的人工麝香，由于其具有良好的提香、定香能力并且價(jià)格廉價(jià)，因而作為香精香料被廣泛地應(yīng)用于個(gè)人護(hù)理品中。該類物質(zhì)常見的有20多種，但目前仍在使用的只有二甲苯麝香和酮麝香兩種。二甲苯麝香和酮麝香作為個(gè)人日用品中的典型合成硝基麝香類有機(jī)物，具有極性較小、親脂憎水性較強(qiáng)、在環(huán)境中不易降解的特點(diǎn)。由于人們持續(xù)不斷地使用使得該物質(zhì)不斷地通過水、大氣、土壤等運(yùn)轉(zhuǎn)途徑輸入環(huán)境［1］，而溶解于水中的人工合成麝香可以被藻類和魚類吸收，并通過食物鏈的傳遞蓄積到人體組織內(nèi)［2，3］。研究表明，人工合成麝香容易造成環(huán)境污染并能夠誘導(dǎo)、增強(qiáng)其他毒性物質(zhì)的毒性，最終給人們的身體健康帶來隱患［4］。日本、德國、荷蘭等國家對(duì)個(gè)人護(hù)理品中合成麝香類污染物質(zhì)的理化性質(zhì)、去除機(jī)制、分析檢測(cè)以及生態(tài)毒性等方面進(jìn)行了研究［4-6］。2008 年生效的 挪 威PoHS（Prohibition on Certain Hazardous Substances in Consumer Products）法規(guī)規(guī)定了消費(fèi)品中二甲苯麝香和酮麝香的最大限量（MRL）均為0.05 mg／kg［7］，但當(dāng)前國內(nèi)外尚沒有對(duì)食品中二甲苯麝香和酮麝香設(shè)定最大限量。水產(chǎn)品攝入是人們通過食品攝入富集人工合成麝香的重要途徑［4］，因此研究水產(chǎn)品中痕量人工合成麝香的檢測(cè)技術(shù)具有顯著的現(xiàn)實(shí)意義。

人工合成的麝香類物質(zhì)極性小，沸點(diǎn)相對(duì)較低。當(dāng)前對(duì)該類物質(zhì)的檢測(cè)方法多為氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法［8-10］和氣相色譜法［11］，研究對(duì)象主要為化妝品［12］、少量環(huán)境中捕獲的水生生物樣品［13］和環(huán)境樣品［8，14-16］等。文獻(xiàn)中關(guān)于樣品前處理多是采用索氏提取、加速溶劑提取等提取方式，過程繁瑣費(fèi)時(shí)，需要使用較大量的有機(jī)溶劑，對(duì)實(shí)驗(yàn)設(shè)備的要求較高，不利于樣品中該類物質(zhì)的快速檢測(cè)。丁立平等［17］采用多重吸附同步凈化（multiple adsorption synchronous purification，MASP）前處理方法結(jié)合氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定了干性樣品中的丁烯氟蟲腈殘留量，所開發(fā)的方法簡(jiǎn)便、快捷、準(zhǔn)確且符合方法學(xué)考察要求。為了克服已有報(bào)道中前處理方法的不足，本文將MASP前處理方法應(yīng)用到含水量較大的水產(chǎn)品基質(zhì)中二甲苯麝香和酮麝香的檢測(cè)中，達(dá)到了集提取、鹽析、凈化同步完成并取得較好凈化效果的前處理目的。同時(shí)使用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法對(duì)水產(chǎn)品中二甲苯麝香和酮麝香進(jìn)行定量和定性分析，實(shí)現(xiàn)了快速、便宜、簡(jiǎn)單、有效、可靠的分析目標(biāo)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 6890N-5975B 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，美國Agilent公司；IKA T-25高速分散器、RV10旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，德國IKA 公司；ZM200 超離心研磨儀，德國Retsch 公司；3K-15 冷凍離心機(jī)，德國Sigma公司。所有接觸到樣品的試驗(yàn)器皿均需要使用堿性高錳酸鉀溶液（其中NaOH 的含量為10%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)），KMnO4的含量為4%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)））浸泡。

丙酮（色譜純），德國Merck公司；乙腈、甲醇、二氯甲烷、氯化鈉、活性炭（carbon）、聚酰胺粉（polyamide）、無水硫酸鈉（分析純），國藥集團(tuán)；中性氧化鋁（alumina，48～75μm）、硅膠（silica gel，75～150 μm）、弗 羅 里 硅 土（Florisil）、石 墨 化 炭 黑（GCB），天津Agela Technologies公司。凈化劑組成：m（中性氧化鋁）∶m（無水硫酸鈉）∶m（氯化鈉）∶m（GCB）＝20∶10∶5∶1。

二甲苯麝香（純度99.0%，溶于環(huán)己烷配成100 mg／L）和酮麝香標(biāo)準(zhǔn)品（純度99.0%，溶于環(huán)己烷配成10 mg／L），德國Dr.Ehrenstorfer公司。

1.2 供試樣品

明蝦、花蛤、鰻魚均購自當(dāng)?shù)厥袌?chǎng)，取可食部分制成糜樣，冷凍保存在-18 ℃冰箱中備用。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

選擇空白基質(zhì)樣品，使用乙腈進(jìn)行提取得到空白基質(zhì)提取液。將二甲苯麝香和酮麝香標(biāo)準(zhǔn)溶液分別用丙酮配制成1.00 mg／L標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于-18℃冰箱中保存?zhèn)溆?，使用前根?jù)檢測(cè)要求使用空白基質(zhì)提取液稀釋成相應(yīng)濃度的工作溶液。

1.3.2 樣品的提取和凈化

稱取解凍樣品5.00 g于50 mL具塞離心管中，加入5.0 g凈化劑、20.0 mL 乙腈，以10 000 r／min高速勻漿1 min；在另一個(gè)50 mL 離心管中加入20.0 mL乙腈用于清洗高速分散器刀頭，并將其合并到前一離心管中，于4 500 r／min 轉(zhuǎn)速下離心5 min；將上清液全部?jī)A倒入100 mL 雞心瓶中，并于40 ℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干；加入2.00 mL 乙腈溶解定容，定容液經(jīng)0.22μm 濾膜過濾，待分析。

1.3.3 氣相色譜-質(zhì)譜條件

氣相色譜：色譜柱為DB-5 MS毛細(xì)管（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；載 氣 為 高 純 氦 氣（純 度99.999%）；恒流模式，柱流速為1.1 mL／min；進(jìn)樣量為1.00μL，不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣口溫度為280 ℃；柱溫升溫程序：初始溫度70 ℃，保持4 min；以15℃／min升至240℃，保持1 min；以30℃／min升至300 ℃，保持4 min以去除色譜柱中殘留的雜質(zhì)。

質(zhì)譜：電子轟擊離子源（EI源），電子轟擊能量為70 eV，離子源溫度為230 ℃；單四極桿溫度為150 ℃；傳輸線溫度為280 ℃；全掃描（SCAN）模式，掃描范圍為m／z 50～450；溶劑延遲14 min；選擇離子監(jiān)測(cè)（SIM）模式，二甲苯麝香定量離子為m／z 282，定性離子為m／z 297、265，駐留時(shí)間為100 ms；酮麝香定量離子為m／z 279，定性離子為m／z 294、191，駐留時(shí)間為100 ms。

1.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

采用外標(biāo)法定量。將二甲苯麝香和酮麝香標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用空白基質(zhì)提取液稀釋成1、2、10、50、100 μg／kg的系列標(biāo)準(zhǔn)使用溶液。按照1.3.3中條件進(jìn)行分析，以標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積為縱坐標(biāo)（Y）、含量為橫坐標(biāo)（X，μg／kg）繪制校正曲線。

1.3.5 添加回收試驗(yàn)

參照文獻(xiàn)［18］的要求進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)。本研究按照1.3.2節(jié)稱取空白樣品并加入適量稀釋的二甲苯麝香和酮麝香標(biāo)準(zhǔn)溶液，混勻后靜置老化30 min制得加標(biāo)樣品，并按照1.3.2節(jié)和1.3.3節(jié)方法進(jìn)行前處理和測(cè)定。對(duì)制得的1.0、2.0、10.0 μg／kg的3個(gè)添加水平的加標(biāo)樣品進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)水平重復(fù)測(cè)定6次，計(jì)算回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

1.3.6 前處理?xiàng)l件的優(yōu)化

選擇明蝦為樣品基質(zhì)，在10μg／kg添加水平下，借鑒文獻(xiàn)［19］設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)方案L9（34），考察吸附劑、除色素試劑和提取溶劑等對(duì)添加回收率、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差、去除色素效果和目標(biāo)峰等的影響。即（1）3 種吸附劑：中性氧化鋁、硅膠和弗羅里硅土；（2）3 種去除色素試劑：活性炭、石墨化炭黑和聚酰胺粉；（3）3種提取溶劑：甲 醇［8，13］、乙 腈［20］和 二 氯 甲 烷［21，22］。根 據(jù) 正 交 試 驗(yàn) 方 案 得到9種組合條件（見表1）。其中吸附劑、無水硫酸鈉、氯化鈉以及除色素試劑組成的凈化劑配比均按照1.1 節(jié)中的質(zhì)量比混合配制，并且凈化劑、提取溶劑的用量、加標(biāo)樣品的前處理方法與1.3.2節(jié)中相同。

1.3.7 基質(zhì)效應(yīng)考察試驗(yàn)

配制質(zhì)量濃度為10μg／L的二甲苯麝香和酮麝香的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液和同樣質(zhì)量濃度的溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別按照1.3.3節(jié)中條件進(jìn)行測(cè)定，依照公式η＝Ai基質(zhì)標(biāo)樣／Ai溶劑標(biāo)樣計(jì)算基質(zhì)效應(yīng)［23］，考察η 與1的關(guān)系，判定基質(zhì)效應(yīng)。其中Ai為目標(biāo)分析物的峰面積，溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液用乙腈配制。

1.3.8 實(shí)際樣品測(cè)定

隨機(jī)在市場(chǎng)上購買8份養(yǎng)殖水產(chǎn)品和海捕水產(chǎn)品樣品，分別是鰻魚、冷凍帶頭蝦、冷凍馬鮫魚、凍鯊魚、冰鮮金線魚、冰鮮黃花魚、冰鮮海鱺魚和冷凍蝦仁，按1.3.2節(jié)和1.3.3 節(jié)條件進(jìn)行前處理和測(cè)定。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品前處理方法的優(yōu)化

二甲苯麝香和酮麝香均具有親脂憎水性，不易溶于水，易溶于苯甲酸芐酯和芐醇等中弱極性的物質(zhì)，常用的萃取溶劑為正己烷／丙酮（1∶1，v／v）、正己 烷／二氯甲烷（3∶1，v／v）等［21，22］。此外，研究報(bào)道表明甲醇溶液也可較好地提取這兩個(gè)物質(zhì)［8，13］，這表明極性較大的溶劑亦可用作微量二甲苯麝香和酮麝香的提取劑。水產(chǎn)品樣品中含有脂肪和蛋白質(zhì)較多，因此本文在已有研究［17］的基礎(chǔ)上，結(jié)合乙腈可以沉淀蛋白質(zhì)和減少脂肪類物質(zhì)共提取的特點(diǎn)，在試驗(yàn)中選擇了與甲醇極性相當(dāng)?shù)囊译孀鳛樘崛∪軇疾炱淝疤幚硇Ч?。此外，樣品中的色素進(jìn)入到毛細(xì)管柱中會(huì)較為嚴(yán)重地污染色譜柱，致使目標(biāo)物的信號(hào)減小并增加色譜峰的拖尾現(xiàn)象，降低柱效，影響色譜柱的使用壽命，為此，試驗(yàn)中就常用的去除色素的3種吸附材料進(jìn)行了考察。

前處理方法優(yōu)化試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在1.3.6 節(jié)中的9種前處理組合條件下，二甲苯麝香和酮麝香的色譜峰均未受到雜質(zhì)峰的嚴(yán)重干擾。正交試驗(yàn)所得的添加回收率和RSD 結(jié)果見表1。從表1中可見，在中性氧化鋁＋石墨化炭黑＋乙腈（alumina＋GCB＋acetonitrile）前處理組合條件下的回收率和RSD 結(jié)果優(yōu)于其他組合條件，表明采用乙腈可以較好地提取目標(biāo)化合物。此外，水產(chǎn)品樣品中含有的脂肪類物質(zhì)會(huì)影響親脂性的二甲苯麝香和酮麝香的凈化回收率。表1試驗(yàn)結(jié)果表明，相比于硅膠和弗羅里硅土，去脂效果更好的氧化鋁具有更好的回收率和穩(wěn)定性。對(duì)比1.3.2節(jié)中定容液的色素去除效果，發(fā)現(xiàn)石墨化炭黑去除色素的效果更佳。故最終確定組合條件alumina＋GCB＋acetonitrile用于樣品的前處理。

表1 正交試驗(yàn)條件下二甲苯麝香和酮麝香的添加回收率（n＝3）Table 1 Recoveries of musk xylene and musk ketone under orthogonal experiment conditions（n＝3）

圖1 顯示了在優(yōu)化的前處理?xiàng)l件（alumina＋GCB＋acetonitrile）下3種水產(chǎn)品基質(zhì)的凈化效果。從圖1中可見目標(biāo)化合物不受干擾峰影響，表明優(yōu)化的前處理?xiàng)l件有較好的凈化效果。

圖1 明蝦、花蛤和鰻魚的凈化效果Fig.1 Clean-up effect for prawn，astarte and eel samples

2.2 線性范圍、檢出限和定量限

外標(biāo)法定量結(jié)果表明：二甲苯麝香和酮麝香在1～100μg／kg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，其中二甲苯 麝 香 的 回 歸 方 程 為Y ＝1 270 X ＋569，r2＝0.999 9；酮麝香的回歸方程為Y＝1 380 X ＋70.8，r2＝0.999 9。以標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行樣品加標(biāo)的方式測(cè)得方法的檢出限（S／N ＝3）為0.30μg／kg，定量限（S／N＝10）為1.0μg／kg。

2.3 添加回收試驗(yàn)

表2 結(jié)果顯示，在1、2 和10μg／kg添加水平下，二甲苯麝香和酮麝香的加標(biāo)回收率為79%～104%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.6%～13.3%。結(jié)果符合殘留物分析的要求［18］。

表2 空白樣品中二甲苯麝香和酮麝香的加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n＝6）Table 2 Recoveries and RSDs of musk xylene and musk ketone spiked in a blank sample（n＝6）

2.4 基質(zhì)效應(yīng)分析

基質(zhì)效應(yīng)考察試驗(yàn)結(jié)果表明，3種水產(chǎn)品基質(zhì)的η在1.02～1.06之間，數(shù)值接近1，表明基質(zhì)效應(yīng)不明顯，說明以上基質(zhì)經(jīng)過本方法凈化后對(duì)質(zhì)譜檢測(cè)不產(chǎn)生顯著影響。

2.5 實(shí)際樣品的檢測(cè)

實(shí)際樣品檢測(cè)結(jié)果表明，二甲苯麝香均有檢出，含量范圍為0.45～5.34μg／kg。酮麝香在鰻魚、冷凍帶頭蝦、冷凍馬鮫魚、凍鯊魚4種魚類樣品中有檢出，含量范圍為0.51～1.32μg／kg；其余樣品中未檢出。但檢出的二甲苯麝香和酮麝香的含量均遠(yuǎn)低于挪威PoHS法規(guī)中規(guī)定的限量值［7］。

3 結(jié)論

本文應(yīng)用乙腈高速勻漿提取，以中性氧化鋁、無水硫酸鈉、氯化鈉和石墨化炭混合物為凈化劑，GCMS檢測(cè)，外標(biāo)法定量，建立了水產(chǎn)品中痕量二甲苯麝香和酮麝香的同時(shí)分析方法，方法方便、快捷、可靠，適用于水產(chǎn)品中二甲苯麝香和酮麝香的快速檢測(cè)。

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