趙亞娟 孫孟甜 楊振麗
【摘要】 目的 研究丙肝抗體IgG(HCVAb-IgG)陽(yáng)性者其丙肝病毒核酸(HCV-RNA)載量的陽(yáng)性率, 并探討其與HCV-IgG的S/CO值之間的關(guān)系。方法 HCVAb-IgG采用ELISA法, HCV-RNA采用熒光定量PCR法。結(jié)果 統(tǒng)計(jì)248例HCVAb-IgG陽(yáng)性者, HCV-RNA陽(yáng)性150例, 陽(yáng)性率60.5%;同時(shí)統(tǒng)計(jì)HCVAb-IgG 的S/CO值, 觀察其與HCV-RNA結(jié)果的相關(guān)性。結(jié)論 HCV-RNA陽(yáng)性率與HCVAb-IgG的S/CO值一致, 但HCV-RNA含量與HCVAb-IgG S/CO值無(wú)顯著相關(guān)性(P>0.05), 不能以S/CO值衡量HCV-RNA結(jié)果。
【關(guān)鍵詞】 丙型肝炎病毒;丙型肝炎病毒抗體;丙型肝炎病毒核酸載量
丙型肝炎病毒(HCV)是急慢性丙型肝炎及非甲非乙型肝炎的主要病原體, 其極易引起該病慢性化, 少數(shù)患者易發(fā)展為肝硬化及肝癌[1], 因此早期診斷和發(fā)現(xiàn)感染者很重要。目前丙型肝炎病毒抗體(HCVAb-IgG)及丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA)載量是診斷丙型肝炎的主要病原學(xué)指標(biāo), HCVAb-IgG間接反映HCV的感染和既往感染, HCV-RNA反映了患者血清中是否存在病毒血癥[2]。臨床上習(xí)慣檢測(cè)HCVAb-IgG作為有無(wú)HCV感染的初篩, 陽(yáng)性者再進(jìn)一步檢測(cè)病毒載量的多少以決定是否需抗病毒治療。在此作者回顧了2年來(lái)HCVAb-IgG陽(yáng)性者所測(cè)HCV-RNA的陽(yáng)性率及與HCVAb-IgG的S/CO值的關(guān)系, 總結(jié)報(bào)告如下。
1 資料與方法
1. 1 一般資料 選取248例2012年1月~2013年12月本院的所有PCR法HCV-RNA檢測(cè)數(shù)據(jù)和同期ELISA測(cè)HCVAb-IgG的數(shù)據(jù)做統(tǒng)計(jì)分析。其中男172例, 女76例。年齡2個(gè)月~84歲。
1. 2 試劑與方法
1. 2. 1 HCVAb-IgG檢測(cè) 使用北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司提供的試劑盒檢測(cè), 用酶標(biāo)儀雙波長(zhǎng)測(cè)定各孔OD值, 測(cè)得的結(jié)果OD值>4定為陽(yáng)性。
1. 2. 2 HCV-RNA檢測(cè) 采用上??迫A生物藥業(yè)股份有限公司提供的試劑盒及質(zhì)控品, 核酸提取及反應(yīng)體系的配制嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作。結(jié)果判斷:測(cè)定結(jié)果<103 IU/ml報(bào)告低于檢測(cè)下限;103~107 IU/ml 的樣本按照測(cè)定結(jié)果直接報(bào)告。
1. 3 儀器 艾德康全自動(dòng)酶免一體機(jī), Roche LightCycler 1.5擴(kuò)增儀。
1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, 采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
2. 1 不同HCVAb-IgG的 S/CO值與HCV-RNA陽(yáng)性率對(duì)應(yīng)關(guān)系見表1。248例HCVAb-IgG陽(yáng)性樣本中, HCV-RNA陽(yáng)性150例, 陽(yáng)性率占60.5%。這與文獻(xiàn)報(bào)道的60%~70%相一致[3]。隨著HCVAb-IgG S/CO的增大, HCV-RNA陽(yáng)性率有增高的趨勢(shì), 但不是如某些報(bào)道統(tǒng)計(jì)的在高S/CO值陽(yáng)性率可達(dá)到100%[4], 在高S/CO值, 仍有約32%的樣本HCV-RNA結(jié)果為陰性。在RNA陰性組也有不少高于陽(yáng)性組的S/CO值。
2. 2 不同HCVAb-IgG的 S/CO值與HCV-RNA載量比較, 見表2。在低HCVAb-IgG S/CO段仍有高的HCV-RNA載量值, 在高S/CO段也有低的載量值, 即HCV-RNA載量不隨著HCVAb-IgG的S/CO值的增大而一定增高。故不能以S/CO值衡量HCV-RNA結(jié)果的高低。這與陳作芬等[5]報(bào)道的HCV-RNA含量與HCVAb的S/CO值無(wú)顯著相關(guān)性一致。
3 討論
丙型肝炎是HCV經(jīng)血液傳播的一種病毒感染性疾病。HCV感染的病原學(xué)檢測(cè)是診斷和治療決策的唯一依據(jù)。ELISA法檢測(cè)HCVAb是目前我國(guó)判斷丙肝的常規(guī)方法, 是HCV感染初篩的首選指標(biāo), 但HCVAb陽(yáng)性只說(shuō)明患者可能曾經(jīng)感染過(guò)HCV, 不能區(qū)別現(xiàn)癥感染或既往感染, 又因HCVAb產(chǎn)生后可長(zhǎng)期存在, 對(duì)診斷和治療的評(píng)價(jià)意義不大。HCV-RNA的檢測(cè)是HCV存在的最直接、最敏感和最特異的指標(biāo), 可提示HCV是否存在及是否在體內(nèi)復(fù)制。在初篩HCVAb-IgG陽(yáng)性后再檢測(cè)HCV-RNA更合理。實(shí)際工作中二者檢測(cè)不一致的原因既有檢驗(yàn)方法的局限性, 也有疾病及不同個(gè)體的差異, 具體分述如下。
3. 1 影響HCVAb-IgG檢測(cè)的因素
3. 1. 1 HCVAb-IgG檢測(cè)采用ELISA法, 該法影響因素較多, 如血清中的纖維蛋白原、加樣時(shí)間的長(zhǎng)短、溫育時(shí)間、洗板的過(guò)程, 都是造成假陽(yáng)性的原因。
3. 1. 2 HCVAb-IgG檢測(cè)的是IgG抗體, 自身免疫性疾病等患者標(biāo)本含有某些干擾因素(類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異性免疫球蛋白、交叉反應(yīng)物質(zhì)等)時(shí)會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。
3. 2 與PCR檢測(cè)相關(guān)的因素
3. 2. 1 HCVAb陽(yáng)性提示機(jī)體可能有HCV感染史, 但當(dāng)機(jī)體病毒被清除, 病情處于恢復(fù)期, HCV-RNA可能為陰性, 而抗體卻會(huì)持續(xù)存在較長(zhǎng)時(shí)間。
3. 2. 2 HCVAb-IgG是檢測(cè)患者血清中針對(duì)HCV基因組編碼抗原某區(qū)域而產(chǎn)生的抗體, 而PCR是檢測(cè)患者血清中的HCV。第三代ELISA試劑能檢測(cè)出針對(duì)不同區(qū)域抗原產(chǎn)生的多種抗體, 而PCR法所用引物固定, HCV有顯著的異原性和多變性, 并非同一引物適用于所有HCV毒株, 故當(dāng)病毒基因變異時(shí)本法檢測(cè)不出變異的RNA。
3. 2. 3 患者曾使用干擾素抗病毒治療, 干擾和抑制了HCV-RNA的復(fù)制, 受染肝細(xì)胞釋放到外周血循環(huán)中的病毒載量減少, 而抗病毒治療不影響HCVAb的存在。對(duì)照了數(shù)例干擾素治療前后的HCV-RNA結(jié)果與HCVAb的S/CO值, 發(fā)現(xiàn)多數(shù)抗病毒治療后病毒載量降低但S/CO值變化不大。提示HCVAb-IgG的S/CO值無(wú)法對(duì)HCV的感染及治療情況進(jìn)行動(dòng)態(tài)檢測(cè)。
3. 2. 4 HCV在血液中復(fù)制的階段性。雖然肝內(nèi)HCV持續(xù)存在, 但病毒血癥可能出現(xiàn)波動(dòng)。即血清HCV-RNA呈波浪狀起伏, 當(dāng)HCV-RNA達(dá)波谷時(shí), 檢測(cè)結(jié)果即為陰性。
3. 2. 5 PCR靈敏度雖然很高, 但有一定的檢測(cè)線性范圍。當(dāng)病毒載量<103時(shí), 因低于其閾值檢測(cè)不到, 故當(dāng)部分患者血清中HCV量極少時(shí), 雖處于復(fù)制期, 低于檢測(cè)閾值也會(huì)顯示陰性結(jié)果。
綜上所述, ELISA法檢測(cè)HCVAb-IgG在初步的丙肝診斷中因操作簡(jiǎn)單成本低, 作為初篩的意義大, 其地位不可取代。熒光定量PCR能夠查明抗體陽(yáng)性者體內(nèi)的HCV復(fù)制水平, 以便確定是否需要進(jìn)行抗病毒治療, 或預(yù)測(cè)及評(píng)價(jià)抗病毒治療的效果, 兩種檢測(cè)的聯(lián)合在臨床上具有重要的使用價(jià)值及臨床意義, 是完善診斷、評(píng)價(jià)療效比較有益的方式。
參考文獻(xiàn)
[1] 黃秀瓊, 吳英.110例丙肝患者HCV-RNA載量及抗-HCV與肝功能指標(biāo)的相關(guān)性研究.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2012, 33(15): 1809-1810.
[2] 王茉莉, 姜濤, 潘煜, 等. HCV感染患者436例丙型肝炎病毒載量與抗-HCV及ALT異常的關(guān)系.中國(guó)老年學(xué)雜志, 2011, 31(5):770-772.
[3] 孫軍紅, 張永樂(lè), 王巧燕, 等.抗-HCV抗體檢測(cè)與熒光定量RT-PCR檢測(cè)在丙型肝炎診斷中的比較.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2009, 19(7):1562.
[4] 羅娜.抗-HCV(OD/CO)值與HCV-RNA陽(yáng)性率及載量深析.國(guó)際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報(bào), 2012, 18(1):82-84.
[5] 陳作芬, 曹永平.丙肝患者治療前后HCV-RNA與抗-HCV及丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶水平的分析.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床, 2010, 7(12): 1175-1177.
[收稿日期:2014-08-29]endprint
【摘要】 目的 研究丙肝抗體IgG(HCVAb-IgG)陽(yáng)性者其丙肝病毒核酸(HCV-RNA)載量的陽(yáng)性率, 并探討其與HCV-IgG的S/CO值之間的關(guān)系。方法 HCVAb-IgG采用ELISA法, HCV-RNA采用熒光定量PCR法。結(jié)果 統(tǒng)計(jì)248例HCVAb-IgG陽(yáng)性者, HCV-RNA陽(yáng)性150例, 陽(yáng)性率60.5%;同時(shí)統(tǒng)計(jì)HCVAb-IgG 的S/CO值, 觀察其與HCV-RNA結(jié)果的相關(guān)性。結(jié)論 HCV-RNA陽(yáng)性率與HCVAb-IgG的S/CO值一致, 但HCV-RNA含量與HCVAb-IgG S/CO值無(wú)顯著相關(guān)性(P>0.05), 不能以S/CO值衡量HCV-RNA結(jié)果。
【關(guān)鍵詞】 丙型肝炎病毒;丙型肝炎病毒抗體;丙型肝炎病毒核酸載量
丙型肝炎病毒(HCV)是急慢性丙型肝炎及非甲非乙型肝炎的主要病原體, 其極易引起該病慢性化, 少數(shù)患者易發(fā)展為肝硬化及肝癌[1], 因此早期診斷和發(fā)現(xiàn)感染者很重要。目前丙型肝炎病毒抗體(HCVAb-IgG)及丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA)載量是診斷丙型肝炎的主要病原學(xué)指標(biāo), HCVAb-IgG間接反映HCV的感染和既往感染, HCV-RNA反映了患者血清中是否存在病毒血癥[2]。臨床上習(xí)慣檢測(cè)HCVAb-IgG作為有無(wú)HCV感染的初篩, 陽(yáng)性者再進(jìn)一步檢測(cè)病毒載量的多少以決定是否需抗病毒治療。在此作者回顧了2年來(lái)HCVAb-IgG陽(yáng)性者所測(cè)HCV-RNA的陽(yáng)性率及與HCVAb-IgG的S/CO值的關(guān)系, 總結(jié)報(bào)告如下。
1 資料與方法
1. 1 一般資料 選取248例2012年1月~2013年12月本院的所有PCR法HCV-RNA檢測(cè)數(shù)據(jù)和同期ELISA測(cè)HCVAb-IgG的數(shù)據(jù)做統(tǒng)計(jì)分析。其中男172例, 女76例。年齡2個(gè)月~84歲。
1. 2 試劑與方法
1. 2. 1 HCVAb-IgG檢測(cè) 使用北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司提供的試劑盒檢測(cè), 用酶標(biāo)儀雙波長(zhǎng)測(cè)定各孔OD值, 測(cè)得的結(jié)果OD值>4定為陽(yáng)性。
1. 2. 2 HCV-RNA檢測(cè) 采用上海科華生物藥業(yè)股份有限公司提供的試劑盒及質(zhì)控品, 核酸提取及反應(yīng)體系的配制嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作。結(jié)果判斷:測(cè)定結(jié)果<103 IU/ml報(bào)告低于檢測(cè)下限;103~107 IU/ml 的樣本按照測(cè)定結(jié)果直接報(bào)告。
1. 3 儀器 艾德康全自動(dòng)酶免一體機(jī), Roche LightCycler 1.5擴(kuò)增儀。
1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, 采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
2. 1 不同HCVAb-IgG的 S/CO值與HCV-RNA陽(yáng)性率對(duì)應(yīng)關(guān)系見表1。248例HCVAb-IgG陽(yáng)性樣本中, HCV-RNA陽(yáng)性150例, 陽(yáng)性率占60.5%。這與文獻(xiàn)報(bào)道的60%~70%相一致[3]。隨著HCVAb-IgG S/CO的增大, HCV-RNA陽(yáng)性率有增高的趨勢(shì), 但不是如某些報(bào)道統(tǒng)計(jì)的在高S/CO值陽(yáng)性率可達(dá)到100%[4], 在高S/CO值, 仍有約32%的樣本HCV-RNA結(jié)果為陰性。在RNA陰性組也有不少高于陽(yáng)性組的S/CO值。
2. 2 不同HCVAb-IgG的 S/CO值與HCV-RNA載量比較, 見表2。在低HCVAb-IgG S/CO段仍有高的HCV-RNA載量值, 在高S/CO段也有低的載量值, 即HCV-RNA載量不隨著HCVAb-IgG的S/CO值的增大而一定增高。故不能以S/CO值衡量HCV-RNA結(jié)果的高低。這與陳作芬等[5]報(bào)道的HCV-RNA含量與HCVAb的S/CO值無(wú)顯著相關(guān)性一致。
3 討論
丙型肝炎是HCV經(jīng)血液傳播的一種病毒感染性疾病。HCV感染的病原學(xué)檢測(cè)是診斷和治療決策的唯一依據(jù)。ELISA法檢測(cè)HCVAb是目前我國(guó)判斷丙肝的常規(guī)方法, 是HCV感染初篩的首選指標(biāo), 但HCVAb陽(yáng)性只說(shuō)明患者可能曾經(jīng)感染過(guò)HCV, 不能區(qū)別現(xiàn)癥感染或既往感染, 又因HCVAb產(chǎn)生后可長(zhǎng)期存在, 對(duì)診斷和治療的評(píng)價(jià)意義不大。HCV-RNA的檢測(cè)是HCV存在的最直接、最敏感和最特異的指標(biāo), 可提示HCV是否存在及是否在體內(nèi)復(fù)制。在初篩HCVAb-IgG陽(yáng)性后再檢測(cè)HCV-RNA更合理。實(shí)際工作中二者檢測(cè)不一致的原因既有檢驗(yàn)方法的局限性, 也有疾病及不同個(gè)體的差異, 具體分述如下。
3. 1 影響HCVAb-IgG檢測(cè)的因素
3. 1. 1 HCVAb-IgG檢測(cè)采用ELISA法, 該法影響因素較多, 如血清中的纖維蛋白原、加樣時(shí)間的長(zhǎng)短、溫育時(shí)間、洗板的過(guò)程, 都是造成假陽(yáng)性的原因。
3. 1. 2 HCVAb-IgG檢測(cè)的是IgG抗體, 自身免疫性疾病等患者標(biāo)本含有某些干擾因素(類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異性免疫球蛋白、交叉反應(yīng)物質(zhì)等)時(shí)會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。
3. 2 與PCR檢測(cè)相關(guān)的因素
3. 2. 1 HCVAb陽(yáng)性提示機(jī)體可能有HCV感染史, 但當(dāng)機(jī)體病毒被清除, 病情處于恢復(fù)期, HCV-RNA可能為陰性, 而抗體卻會(huì)持續(xù)存在較長(zhǎng)時(shí)間。
3. 2. 2 HCVAb-IgG是檢測(cè)患者血清中針對(duì)HCV基因組編碼抗原某區(qū)域而產(chǎn)生的抗體, 而PCR是檢測(cè)患者血清中的HCV。第三代ELISA試劑能檢測(cè)出針對(duì)不同區(qū)域抗原產(chǎn)生的多種抗體, 而PCR法所用引物固定, HCV有顯著的異原性和多變性, 并非同一引物適用于所有HCV毒株, 故當(dāng)病毒基因變異時(shí)本法檢測(cè)不出變異的RNA。
3. 2. 3 患者曾使用干擾素抗病毒治療, 干擾和抑制了HCV-RNA的復(fù)制, 受染肝細(xì)胞釋放到外周血循環(huán)中的病毒載量減少, 而抗病毒治療不影響HCVAb的存在。對(duì)照了數(shù)例干擾素治療前后的HCV-RNA結(jié)果與HCVAb的S/CO值, 發(fā)現(xiàn)多數(shù)抗病毒治療后病毒載量降低但S/CO值變化不大。提示HCVAb-IgG的S/CO值無(wú)法對(duì)HCV的感染及治療情況進(jìn)行動(dòng)態(tài)檢測(cè)。
3. 2. 4 HCV在血液中復(fù)制的階段性。雖然肝內(nèi)HCV持續(xù)存在, 但病毒血癥可能出現(xiàn)波動(dòng)。即血清HCV-RNA呈波浪狀起伏, 當(dāng)HCV-RNA達(dá)波谷時(shí), 檢測(cè)結(jié)果即為陰性。
3. 2. 5 PCR靈敏度雖然很高, 但有一定的檢測(cè)線性范圍。當(dāng)病毒載量<103時(shí), 因低于其閾值檢測(cè)不到, 故當(dāng)部分患者血清中HCV量極少時(shí), 雖處于復(fù)制期, 低于檢測(cè)閾值也會(huì)顯示陰性結(jié)果。
綜上所述, ELISA法檢測(cè)HCVAb-IgG在初步的丙肝診斷中因操作簡(jiǎn)單成本低, 作為初篩的意義大, 其地位不可取代。熒光定量PCR能夠查明抗體陽(yáng)性者體內(nèi)的HCV復(fù)制水平, 以便確定是否需要進(jìn)行抗病毒治療, 或預(yù)測(cè)及評(píng)價(jià)抗病毒治療的效果, 兩種檢測(cè)的聯(lián)合在臨床上具有重要的使用價(jià)值及臨床意義, 是完善診斷、評(píng)價(jià)療效比較有益的方式。
參考文獻(xiàn)
[1] 黃秀瓊, 吳英.110例丙肝患者HCV-RNA載量及抗-HCV與肝功能指標(biāo)的相關(guān)性研究.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2012, 33(15): 1809-1810.
[2] 王茉莉, 姜濤, 潘煜, 等. HCV感染患者436例丙型肝炎病毒載量與抗-HCV及ALT異常的關(guān)系.中國(guó)老年學(xué)雜志, 2011, 31(5):770-772.
[3] 孫軍紅, 張永樂(lè), 王巧燕, 等.抗-HCV抗體檢測(cè)與熒光定量RT-PCR檢測(cè)在丙型肝炎診斷中的比較.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2009, 19(7):1562.
[4] 羅娜.抗-HCV(OD/CO)值與HCV-RNA陽(yáng)性率及載量深析.國(guó)際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報(bào), 2012, 18(1):82-84.
[5] 陳作芬, 曹永平.丙肝患者治療前后HCV-RNA與抗-HCV及丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶水平的分析.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床, 2010, 7(12): 1175-1177.
[收稿日期:2014-08-29]endprint
【摘要】 目的 研究丙肝抗體IgG(HCVAb-IgG)陽(yáng)性者其丙肝病毒核酸(HCV-RNA)載量的陽(yáng)性率, 并探討其與HCV-IgG的S/CO值之間的關(guān)系。方法 HCVAb-IgG采用ELISA法, HCV-RNA采用熒光定量PCR法。結(jié)果 統(tǒng)計(jì)248例HCVAb-IgG陽(yáng)性者, HCV-RNA陽(yáng)性150例, 陽(yáng)性率60.5%;同時(shí)統(tǒng)計(jì)HCVAb-IgG 的S/CO值, 觀察其與HCV-RNA結(jié)果的相關(guān)性。結(jié)論 HCV-RNA陽(yáng)性率與HCVAb-IgG的S/CO值一致, 但HCV-RNA含量與HCVAb-IgG S/CO值無(wú)顯著相關(guān)性(P>0.05), 不能以S/CO值衡量HCV-RNA結(jié)果。
【關(guān)鍵詞】 丙型肝炎病毒;丙型肝炎病毒抗體;丙型肝炎病毒核酸載量
丙型肝炎病毒(HCV)是急慢性丙型肝炎及非甲非乙型肝炎的主要病原體, 其極易引起該病慢性化, 少數(shù)患者易發(fā)展為肝硬化及肝癌[1], 因此早期診斷和發(fā)現(xiàn)感染者很重要。目前丙型肝炎病毒抗體(HCVAb-IgG)及丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA)載量是診斷丙型肝炎的主要病原學(xué)指標(biāo), HCVAb-IgG間接反映HCV的感染和既往感染, HCV-RNA反映了患者血清中是否存在病毒血癥[2]。臨床上習(xí)慣檢測(cè)HCVAb-IgG作為有無(wú)HCV感染的初篩, 陽(yáng)性者再進(jìn)一步檢測(cè)病毒載量的多少以決定是否需抗病毒治療。在此作者回顧了2年來(lái)HCVAb-IgG陽(yáng)性者所測(cè)HCV-RNA的陽(yáng)性率及與HCVAb-IgG的S/CO值的關(guān)系, 總結(jié)報(bào)告如下。
1 資料與方法
1. 1 一般資料 選取248例2012年1月~2013年12月本院的所有PCR法HCV-RNA檢測(cè)數(shù)據(jù)和同期ELISA測(cè)HCVAb-IgG的數(shù)據(jù)做統(tǒng)計(jì)分析。其中男172例, 女76例。年齡2個(gè)月~84歲。
1. 2 試劑與方法
1. 2. 1 HCVAb-IgG檢測(cè) 使用北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司提供的試劑盒檢測(cè), 用酶標(biāo)儀雙波長(zhǎng)測(cè)定各孔OD值, 測(cè)得的結(jié)果OD值>4定為陽(yáng)性。
1. 2. 2 HCV-RNA檢測(cè) 采用上海科華生物藥業(yè)股份有限公司提供的試劑盒及質(zhì)控品, 核酸提取及反應(yīng)體系的配制嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作。結(jié)果判斷:測(cè)定結(jié)果<103 IU/ml報(bào)告低于檢測(cè)下限;103~107 IU/ml 的樣本按照測(cè)定結(jié)果直接報(bào)告。
1. 3 儀器 艾德康全自動(dòng)酶免一體機(jī), Roche LightCycler 1.5擴(kuò)增儀。
1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, 采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
2. 1 不同HCVAb-IgG的 S/CO值與HCV-RNA陽(yáng)性率對(duì)應(yīng)關(guān)系見表1。248例HCVAb-IgG陽(yáng)性樣本中, HCV-RNA陽(yáng)性150例, 陽(yáng)性率占60.5%。這與文獻(xiàn)報(bào)道的60%~70%相一致[3]。隨著HCVAb-IgG S/CO的增大, HCV-RNA陽(yáng)性率有增高的趨勢(shì), 但不是如某些報(bào)道統(tǒng)計(jì)的在高S/CO值陽(yáng)性率可達(dá)到100%[4], 在高S/CO值, 仍有約32%的樣本HCV-RNA結(jié)果為陰性。在RNA陰性組也有不少高于陽(yáng)性組的S/CO值。
2. 2 不同HCVAb-IgG的 S/CO值與HCV-RNA載量比較, 見表2。在低HCVAb-IgG S/CO段仍有高的HCV-RNA載量值, 在高S/CO段也有低的載量值, 即HCV-RNA載量不隨著HCVAb-IgG的S/CO值的增大而一定增高。故不能以S/CO值衡量HCV-RNA結(jié)果的高低。這與陳作芬等[5]報(bào)道的HCV-RNA含量與HCVAb的S/CO值無(wú)顯著相關(guān)性一致。
3 討論
丙型肝炎是HCV經(jīng)血液傳播的一種病毒感染性疾病。HCV感染的病原學(xué)檢測(cè)是診斷和治療決策的唯一依據(jù)。ELISA法檢測(cè)HCVAb是目前我國(guó)判斷丙肝的常規(guī)方法, 是HCV感染初篩的首選指標(biāo), 但HCVAb陽(yáng)性只說(shuō)明患者可能曾經(jīng)感染過(guò)HCV, 不能區(qū)別現(xiàn)癥感染或既往感染, 又因HCVAb產(chǎn)生后可長(zhǎng)期存在, 對(duì)診斷和治療的評(píng)價(jià)意義不大。HCV-RNA的檢測(cè)是HCV存在的最直接、最敏感和最特異的指標(biāo), 可提示HCV是否存在及是否在體內(nèi)復(fù)制。在初篩HCVAb-IgG陽(yáng)性后再檢測(cè)HCV-RNA更合理。實(shí)際工作中二者檢測(cè)不一致的原因既有檢驗(yàn)方法的局限性, 也有疾病及不同個(gè)體的差異, 具體分述如下。
3. 1 影響HCVAb-IgG檢測(cè)的因素
3. 1. 1 HCVAb-IgG檢測(cè)采用ELISA法, 該法影響因素較多, 如血清中的纖維蛋白原、加樣時(shí)間的長(zhǎng)短、溫育時(shí)間、洗板的過(guò)程, 都是造成假陽(yáng)性的原因。
3. 1. 2 HCVAb-IgG檢測(cè)的是IgG抗體, 自身免疫性疾病等患者標(biāo)本含有某些干擾因素(類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異性免疫球蛋白、交叉反應(yīng)物質(zhì)等)時(shí)會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。
3. 2 與PCR檢測(cè)相關(guān)的因素
3. 2. 1 HCVAb陽(yáng)性提示機(jī)體可能有HCV感染史, 但當(dāng)機(jī)體病毒被清除, 病情處于恢復(fù)期, HCV-RNA可能為陰性, 而抗體卻會(huì)持續(xù)存在較長(zhǎng)時(shí)間。
3. 2. 2 HCVAb-IgG是檢測(cè)患者血清中針對(duì)HCV基因組編碼抗原某區(qū)域而產(chǎn)生的抗體, 而PCR是檢測(cè)患者血清中的HCV。第三代ELISA試劑能檢測(cè)出針對(duì)不同區(qū)域抗原產(chǎn)生的多種抗體, 而PCR法所用引物固定, HCV有顯著的異原性和多變性, 并非同一引物適用于所有HCV毒株, 故當(dāng)病毒基因變異時(shí)本法檢測(cè)不出變異的RNA。
3. 2. 3 患者曾使用干擾素抗病毒治療, 干擾和抑制了HCV-RNA的復(fù)制, 受染肝細(xì)胞釋放到外周血循環(huán)中的病毒載量減少, 而抗病毒治療不影響HCVAb的存在。對(duì)照了數(shù)例干擾素治療前后的HCV-RNA結(jié)果與HCVAb的S/CO值, 發(fā)現(xiàn)多數(shù)抗病毒治療后病毒載量降低但S/CO值變化不大。提示HCVAb-IgG的S/CO值無(wú)法對(duì)HCV的感染及治療情況進(jìn)行動(dòng)態(tài)檢測(cè)。
3. 2. 4 HCV在血液中復(fù)制的階段性。雖然肝內(nèi)HCV持續(xù)存在, 但病毒血癥可能出現(xiàn)波動(dòng)。即血清HCV-RNA呈波浪狀起伏, 當(dāng)HCV-RNA達(dá)波谷時(shí), 檢測(cè)結(jié)果即為陰性。
3. 2. 5 PCR靈敏度雖然很高, 但有一定的檢測(cè)線性范圍。當(dāng)病毒載量<103時(shí), 因低于其閾值檢測(cè)不到, 故當(dāng)部分患者血清中HCV量極少時(shí), 雖處于復(fù)制期, 低于檢測(cè)閾值也會(huì)顯示陰性結(jié)果。
綜上所述, ELISA法檢測(cè)HCVAb-IgG在初步的丙肝診斷中因操作簡(jiǎn)單成本低, 作為初篩的意義大, 其地位不可取代。熒光定量PCR能夠查明抗體陽(yáng)性者體內(nèi)的HCV復(fù)制水平, 以便確定是否需要進(jìn)行抗病毒治療, 或預(yù)測(cè)及評(píng)價(jià)抗病毒治療的效果, 兩種檢測(cè)的聯(lián)合在臨床上具有重要的使用價(jià)值及臨床意義, 是完善診斷、評(píng)價(jià)療效比較有益的方式。
參考文獻(xiàn)
[1] 黃秀瓊, 吳英.110例丙肝患者HCV-RNA載量及抗-HCV與肝功能指標(biāo)的相關(guān)性研究.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2012, 33(15): 1809-1810.
[2] 王茉莉, 姜濤, 潘煜, 等. HCV感染患者436例丙型肝炎病毒載量與抗-HCV及ALT異常的關(guān)系.中國(guó)老年學(xué)雜志, 2011, 31(5):770-772.
[3] 孫軍紅, 張永樂(lè), 王巧燕, 等.抗-HCV抗體檢測(cè)與熒光定量RT-PCR檢測(cè)在丙型肝炎診斷中的比較.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2009, 19(7):1562.
[4] 羅娜.抗-HCV(OD/CO)值與HCV-RNA陽(yáng)性率及載量深析.國(guó)際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報(bào), 2012, 18(1):82-84.
[5] 陳作芬, 曹永平.丙肝患者治療前后HCV-RNA與抗-HCV及丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶水平的分析.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床, 2010, 7(12): 1175-1177.
[收稿日期:2014-08-29]endprint