譚 海，段曉冬，張海明，鐘錦輝，沈 丹，王 令，魏文康，何日文，鐘卓玲，楊穗娟，楊秋菲，林 鴻，鄭麗蘭，張 幀，楊建宇，朱建翠

（1. 廣州市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，廣東廣州 510440；

2. 廣東省農業(yè)科學院動物衛(wèi)生研究所，廣東廣州 510640）

2014年廣州市區(qū)犬狂犬病橫斷面調查

譚 海1，段曉冬1，張海明1，鐘錦輝1，沈 丹1，王 令1，魏文康2，何日文1，鐘卓玲1，楊穗娟1，楊秋菲1，林 鴻1，鄭麗蘭1，張 幀1，楊建宇1，朱建翠1

（1. 廣州市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，廣東廣州510440；

2. 廣東省農業(yè)科學院動物衛(wèi)生研究所，廣東廣州510640）

[目的] 為了解廣州市區(qū)犬狂犬病流行情況和免疫狀況。[方法]對廣州市越秀、天河和荔灣3個區(qū)的部分寵物犬以及白云區(qū)和番禺區(qū)的部分農村犬進行隨機采樣和問卷調查，對血清樣品和唾液樣品分別進行抗體ELISA和熒光RT-PCR檢測，并與免疫合格率相關的因素進行統(tǒng)計學分析。[結果] 在調查的757只犬唾液棉拭子樣品中未發(fā)現(xiàn)狂犬病病毒；調查的犬免疫率和免疫合格率分別為94.19%（95%CI：92.28%～95.75%）和59.05%（95%CI：55.45%～62.58%）；統(tǒng)計學分析發(fā)現(xiàn)，犬的數(shù)量、類別和性別三個因素與狂犬病抗體合格率之間不存在差異，疫苗類型（進口或國產疫苗）、生產廠家以及最后一次免疫時間3個因素與狂犬病抗體合格率之間存在差異。[結論] 本次調查未發(fā)現(xiàn)狂犬病病毒，犬的免疫率和免疫合格率均較高，近幾年廣州市僅出現(xiàn)零星幾例人狂犬病病例，因此總體認為廣州市的狂犬病防控工作成效較為明顯，但在部分區(qū)犬狂犬病抗體合格率較低，仍有一定的狂犬病發(fā)生風險，需采取針對性措施。

犬；狂犬??；橫斷面調查；風險因素

狂犬?。≧abies）又稱恐水癥，是由狂犬病病毒（Rabies Virus，RABV）引起的一種人獸共患的接觸性傳染病[1]，病死率高達100%[2]。我國是狂犬病疫情較嚴重國家的之一，人間病例數(shù)量一直位于各類傳染病報告死亡數(shù)的前三位[3]，近10年來因狂犬病死亡患者累計超過20 000人，主要集中在廣西、廣東等南方各省[4]。廣州市自有疫情資料記錄以來幾乎每年都有人狂犬病病例的報道[5]。

研究表明，我國95%以上的人狂犬病病例由犬咬傷引起，犬在我國狂犬病流行中起著主要作用[6]。近年來，隨著人們生活水平的提高，廣州市家養(yǎng)犬特別是寵物犬的飼養(yǎng)量逐漸增多，犬咬人事件隨之上升。特別是2000年以來，犬傷人次數(shù)劇增，由2000年的21706次增加到2008年的79245次[5、7]。2012年，僅越秀區(qū)，犬傷人接診數(shù)量就達2萬多例[8]。

由于我國狂犬病主要流行于農村，占總病例數(shù)的50%～70%[9]，因此為了解廣州市農村犬和城市犬的狂犬病病毒感染情況和狂犬病疫苗免疫效果，分析廣州市犬和人發(fā)生狂犬病的風險，本研究選擇越秀、天河、荔灣、白云和番禺5個區(qū)開展本次狂犬病流行病學調查，以期為廣州市、廣東省乃至全國有效地防控狂犬病和降低人狂犬病發(fā)生風險提供技術支持。

1 材料和方法

1.1 調查時間和對象

2014年7—8月，對廣州市越秀區(qū)、荔灣區(qū)和天河區(qū)的寵物犬以及白云區(qū)、番禺區(qū)的農村犬進行調查。

1.2 調查方法

采用抽樣檢測和問卷調查相結合的方法。

1.2.1 抽樣方法[10]。對寵物犬采取基于寵物醫(yī)院的二階段隨機抽樣方式進行：第一階段為寵物醫(yī)院，通過簡單隨機抽樣的方式，從越秀、荔灣和天河區(qū)各隨機選取3個寵物醫(yī)院；第二階段為個體層面，采用系統(tǒng)隨機抽樣方法，對來寵物醫(yī)院進行免疫、美容等項目的寵物犬，每隔3條犬采樣1次。

對農村犬采取三階段隨機抽樣方式進行：首先從白云區(qū)和番禺區(qū)各隨機挑選4個鎮(zhèn)，然后在每個選中的鎮(zhèn)中隨機抽取4個村，最后對村內農戶所養(yǎng)的農村犬進行簡單隨機抽樣。

1.2.2 樣本量計算。用winepi在線軟件（http：// www.winepi.net/uk/index.htm），按照1%的流行病率、95%置信區(qū)間和90%敏感性進行計算，以發(fā)現(xiàn)疫病方式分別對農村犬和城市犬所需的樣本量進行計算，再根據每個區(qū)的犬只存欄量進行分配。每個選中的寵物醫(yī)院采集30～50只寵物犬，每個選中的村采集不少于10只的農村犬。

1.2.3 問卷調查。研究設計結構性調查問卷，內容包括犬只性別、品種、最近一次狂犬病免疫時間、免疫的狂犬病疫苗類型及廠家、是否出現(xiàn)狂犬病典型癥狀等。被調查的犬主人每人填寫一份調查登記表，由專門的流行病學調查人員到寵物醫(yī)院和養(yǎng)犬的農戶家進行現(xiàn)場調查。

1.3 樣品的保存

按常規(guī)方法，采集犬血液并進行血清分離，然后置于-20℃保存待用，使用前血清經56℃熱滅活30min。采集后的犬唾液棉拭子于-70℃保存待用。

1.4 檢測試劑

法國辛白克斯狂犬病抗體ELISA試劑盒，購自上海必優(yōu)生物科技有限公司（批號：13SRAB320）；狂犬病病毒熒光RT-PCR檢測試劑盒，購自上海之江生物科技股份有限公司（批號20131102）；世界衛(wèi)生組織（WHO）狂犬病標準血清，購自狂犬病WHO參考實驗室。

按照世界動物衛(wèi)生組織（OIE）《陸生動物診斷試驗和疫苗手冊》[11]和抗體檢測試劑盒的說明，經免疫狂犬病疫苗的犬，檢測其抗體滴度≧0.6EU/ mL，則被認為免疫抗體合格，即該動物能抵抗野毒的侵襲；抗體滴度小于 0.6EU/mL，則認為免疫抗體不合格，即該動物容易受到野毒的感染。

1.5 數(shù)據分析與統(tǒng)計

所有數(shù)據用Microsoft Excel、SPSS 20進行分析和統(tǒng)計。

2 結果

本次調查對廣州市越秀、荔灣、天河3個城區(qū)的城市犬以及白云、番禺2個郊區(qū)的農村犬進行了唾液棉拭子和血清樣品的采集，并對犬主人進行問卷調查，共發(fā)放調查問卷757份，收回有效問卷695份，有效率達到91.81%。所調查的犬大部分進行了狂犬病疫苗的免疫，且均為單聯(lián)滅活苗，免疫覆蓋率達到了94.19%（713/757）；共采集犬唾液棉拭子和犬血清各757份，具體檢測結果如下所示。

2.1 不同區(qū)的犬狂犬病抗體檢測情況

對所有757份犬血清樣品進行狂犬病抗體的檢測，結果有447份血清的抗體水平合格，總合格率為59.05%。不同區(qū)的犬血清抗體合格率差異較大，最高的達到75.00%，最低的僅為36.82%。對不同區(qū)域犬的狂犬病抗體合格率分別進行卡方檢驗，發(fā)現(xiàn)不同區(qū)的犬抗體合格率存在差異，其中白云區(qū)與其它4個區(qū)的合格率差異極其顯著（p＜0.01）。具體如表1所示。

表1 不同區(qū)的犬血清狂犬病抗體合格率比較

2.2 養(yǎng)犬數(shù)量情況及其與犬抗體合格率的相關性分析

在問卷調查中，共有424人填寫了養(yǎng)犬數(shù)量，其中279人飼養(yǎng)1只犬，69人養(yǎng)2只犬，76人養(yǎng)3只及以上犬。其中在市區(qū)居民中，絕大部分人飼養(yǎng)1只犬，少數(shù)人飼養(yǎng)2只及以上的犬。經統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)，不同養(yǎng)犬數(shù)量與犬的狂犬病抗體合格率之間無統(tǒng)計學相關性（見表2）。

2.3 犬的類別分布及其與抗體合格率的相關性分析

調查結果顯示，越秀、荔灣和天河區(qū)到寵物醫(yī)院就診的犬大多為寵物犬，品種較為多樣，而白云區(qū)和番禺區(qū)的農村犬均為土狗。本研究共對免疫了狂犬病疫苗的396只土狗和257只寵物犬進行了調查和檢測，經過卡方檢驗發(fā)現(xiàn)，土狗與寵物犬的狂犬病抗體合格率沒有統(tǒng)計學差異（χ2=0.92，p=0.34），如表2所示。

2.4 犬的性別分布及其與抗體合格率的相關性分析

對填寫了性別的犬進行卡方檢驗發(fā)現(xiàn)，不同性別的犬狂犬病合格率無統(tǒng)計學差異（χ2=2.12，p=0.15），具體信息見表2。

2.5 狂犬病疫苗使用情況及其與抗體合格率的相關性分析

調查顯示，本次調查的犬的狂犬病疫苗免疫程序均為1次/年，免疫保護期均在1年以上。共有505只犬使用了進口狂犬病疫苗，其中274只犬使用了進口疫苗A，198只犬使用了進口疫苗B，使用進口疫苗C和進口疫苗D的分別只有1只犬，剩余31只未說明疫苗廠家；共有182只犬使用了國產疫苗，其中180只犬使用了國產疫苗A，剩余2只未說明疫苗廠家。使用進口疫苗和國產疫苗的犬狂犬病抗體合格率分別為50.29%和74.73%。經過卡方檢驗分析發(fā)現(xiàn)，使用進口疫苗和國產疫苗的犬狂犬病抗體合格率存在統(tǒng)計學差異（χ2=32.53，p＜0.01）；進口疫苗A、進口疫苗B和國產疫苗A所產生的抗體合格率之間存在統(tǒng)計學差異（χ2=43.33，p＜0.01），具體見表2。由于大部分國產疫苗的最后一次免疫時間為2014年，而進口疫苗最后一次免疫時間分別為2013年和2014年，為排除最后一次免疫時間對疫苗種類的干擾，對最后一次免疫時間為2014年的進口疫苗和國產疫苗的抗體合格率進行統(tǒng)計學分析，結果差異極顯著（p＜0.01）。

2.6 最近一次狂犬病疫苗免疫時間及其與抗體合格率的相關性分析

將最后一次免疫時間為2013年1月—2014年8月的663只犬進行分層并經統(tǒng)計學分析發(fā)現(xiàn)，最近一次狂犬病疫苗免疫時間與抗體合格率之間存在相關性，且差異顯著（見表2）。

2.7 多因素logistic回歸分析

以犬血清的狂犬病抗體是否有保護力為因變量，對所有單因素分析有意義的變量為自變量進行多因素logistic回歸分析，結果發(fā)現(xiàn)疫苗類型（進口或國產疫苗）和疫苗廠家這2個因素與狂犬病抗體合格率存在相關性，且具有統(tǒng)計學意義，具體如表3所示。格率僅為36.82%，但該區(qū)養(yǎng)犬數(shù)量和人口均較多，所養(yǎng)農村犬大多不進行拴養(yǎng)，犬之間以及犬與人的接觸機會較多，較易發(fā)生犬間的狂犬病傳播和犬咬人事件。統(tǒng)計數(shù)據也發(fā)現(xiàn)[5]，廣州市1997—2010年的狂犬病疫情均發(fā)生在郊區(qū)和郊縣，因此白云區(qū)存在較大的犬狂犬病和人狂犬病發(fā)生風險。在番禺區(qū)，犬的抗體合格率則最高，可能與其免疫的疫苗存在一定的相關性。

表2 犬狂犬病抗體合格率相關風險因素分析

表3 狂犬病抗體合格率影響因素的多因素logistic回歸分析

通過問卷調查結合采樣檢測并經統(tǒng)計學分析發(fā)現(xiàn)，不同性別的犬和不同類別的犬狂犬病抗體合格率之間沒有差異，而使用不同類型疫苗的犬、使用不同廠家疫苗的犬以及最后一次免疫時間不同的犬之間的狂犬病抗體合格率存在差異。通過進一步的多因素logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，免疫國產疫苗A的犬的狂犬病抗體合格率要高于免疫進口疫苗的犬，與以往的研究結果[14、15]不一致，可能與國產疫苗的種類、質量等不同有關。另外，雖然多因素回歸分析結果顯示狂犬病疫苗最后一次免疫時間與抗體合格率沒有相關性，但在調查中發(fā)現(xiàn)國產苗的最后一次免疫時間均在2014年，而進口苗的最后一次免疫時間分布在2013年和2014年，因此疫苗種類可能會對多因素分析產生影響；結合免疫學常識以及單因素風險分析顯示最后一次免疫時間與合格率存在相關性的情況，認為最后一次狂犬病疫苗的免疫時間與狂犬病疫苗合格率存在相關性。

本次研究未從犬唾液樣品中檢測到狂犬病病毒，可能與所采樣的犬大部分進行了狂犬病疫苗免疫有一定的關系，但也不排除以下幾個原因：其一，調查的犬均為外表健康犬，其帶毒率本身就非常低；其二，由于存在間歇性排毒的情況，用唾液進行狂犬病病毒檢測可能導致假陰性結果的出現(xiàn)[16]；其三，檢測方法的敏感性可能偏低。

綜上所述，本研究對廣州市5個區(qū)的農村犬和

2.8 病原學檢測結果

對所有757份犬唾液棉拭子進行狂犬病病毒熒光RT-PCR的檢測，結果均為陰性。

3 討論

我國每年接種人用狂犬病疫苗和抗血清的總費用超過100億元[12]。然而世界衛(wèi)生組織（WHO）認為，預防人類狂犬病最具成本效益的戰(zhàn)略是為犬類接種疫苗并消除犬類狂犬病。目前國際上公認的是，犬的有效免疫率達到70%以上可有效控制狂犬病的傳播[13]，因此，要控制狂犬病在人間的傳播，對本地區(qū)的犬類進行狂犬病疫苗的免疫及免疫效果評價以及狂犬病病原監(jiān)測極為重要。

本研究顯示，調查的大部分犬進行了狂犬病疫苗的免疫，但不同區(qū)之間犬的狂犬病抗體合格率存在較大的差異，而且僅有番禺和越秀2個區(qū)的犬的狂犬病抗體合格率達到了70%的標準。值得注意的是，作為郊區(qū)的白云區(qū)，該區(qū)犬的狂犬病抗體合城市犬進行了狂犬病病原和抗體的監(jiān)測與調查，發(fā)現(xiàn)不同區(qū)之間狂犬病抗體合格率存在較大的差異，使用不同類型疫苗、使用不同廠家疫苗以及不同免疫時間等3個因素與犬的狂犬病抗體合格率存在統(tǒng)計學相關性。本次調查未發(fā)現(xiàn)狂犬病病毒，而且大部分區(qū)的犬免疫合格率達到或接近世界衛(wèi)生組織（WHO）推薦的70%的有效免疫保護率的標準[13]，結合近幾年廣州市僅出現(xiàn)零星幾例狂犬病人間病例的情況[5]，總體認為廣州市對狂犬病的防控效果較好，但也存在個別區(qū)的免疫合格率較低的情況，說明部分區(qū)仍存在犬和人發(fā)生狂犬病的風險。應針對不同區(qū)的實際情況采取基于風險的監(jiān)測和控制，比如對于抗體合格率最低的白云區(qū)，要進一步查找原因，重點進行監(jiān)測和防控。另外，本次調查還發(fā)現(xiàn)使用國產疫苗A的狂犬病疫苗的犬免疫合格率要高于使用其他疫苗的犬，值得進一步采用實驗流行病學研究進行分析和確實。

由于本次調查為橫斷面研究，無法了解最后一次狂犬病疫苗免疫時犬的狂犬病抗體水平。另外，本研究對寵物犬的選擇是基于寵物醫(yī)院，主要原因是無法獲得寵物犬的抽樣框以及方便采樣。為降低犬只其它疾病對犬狂犬病抗體的影響，在采樣時盡量選擇來醫(yī)院進行美容、免疫、寄養(yǎng)的犬，因此可能存在一定的選擇性偏倚。

致謝：感謝所有參與本次調查的人員，包括廣州市動物衛(wèi)生監(jiān)督所的其他參與本次調查工作的人員及上述5個區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督部門的調查人員、相關寵物醫(yī)院的工作人員及犬主。感謝哈爾濱獸醫(yī)研究所的王靖飛博士、河南省人民醫(yī)院的李鵬及貴州省黔南州農村工作局的姜琴在數(shù)據錄入、分析及文章寫作方面的幫助和指導。

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The Cross-sectional Study of Rabies in Several Districts of Guangzhou in 2014

Tan Hai1，Duan Xiaodong1，Zhang Haiming1，Zhong Jinhui1，Shen Dan1，Wang Ling1，Wei Wenkang2，He Riwen1，Zhong Zhuoling1，Yang Suijuan1，Yang Qiufei1，Lin Hong1，Zhen Lilan1，Zhang Zhen1，Yang Jianyu1，Zhu Jiancui1
（Guangzhou Animal Health Inspection Institute，Guangdong，Guangzhou 510440；
2. Institute of Animal Health，Guangdong Academy of Agricultural Science，Guangdong，Guangzhou 510640）

[Objective] The aim of the study was to understand the epidemic and immune status of rabies in dogs in Guangzhou. [Method] A cross-sectional study was conducted during July to August in 2014 in fi ve districts of Guangzhou. The serum and saliva samples were collected from dogs in clinics and villages and tested with ELISA and realtime RT-PCR respectively. [Result] The results showed that none of 757 serum and saliva samples tested were positive to rabies virus. The investigation revealed that the immunization rate and qualifi cation rate were 94.19%（95%CI：92.28%～95.75%）and 59.05%（95%CI：55.45%～62.58%）respectively. The 3 animal factors including amount，type and gender of dogs were not found to be associated with rabies antibody qualifi cation rate；the 3 vaccine factors including type of vaccine，brand of vaccine and time of the last vaccination were found to be associated with rabies antibody qualifi cation rate. [Conclusion] The study showed that rabies control in Guangzhou was relatively good. However，the rabies infection risk still existed as the qualifi cation rates were relatively low in some districts of Guangzhou and relevant measures should be taken.

dog；rabies；cross-sectional study；risk analysis

S851.313

：B

：1005-944X（2015）02-0014-05

段曉冬