汪天杰，劉永松，韋 兵

（1. 廣州出入境檢驗(yàn)檢疫局，廣東廣州 510623；2. 天河出入境檢驗(yàn)檢疫局，廣東廣州 510623）

澳大利亞進(jìn)境種羊副結(jié)核感染情況調(diào)查

汪天杰1，劉永松1，韋 兵2

（1. 廣州出入境檢驗(yàn)檢疫局，廣東廣州 510623；2. 天河出入境檢驗(yàn)檢疫局，廣東廣州 510623）

[目的]為摸清澳大利亞進(jìn)境種羊副結(jié)核病的感染情況。[方法] 采用皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)（TST）和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）對(duì)6810頭種羊進(jìn)行調(diào)查。[結(jié)果] 104頭羊副結(jié)核病檢測呈陽性，陽性率為1.53%。[結(jié)論] 澳大利亞進(jìn)境種羊副結(jié)核病的感染率雖然不高，但此病嚴(yán)重威脅著羊業(yè)的發(fā)展，應(yīng)該高度重視該病的防控。

澳大利亞；進(jìn)境種羊；副結(jié)核??；調(diào)查

羊副結(jié)核病是由副結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium avium subsp Paratuberculosis，MAP）引起的慢性消化道疾病，以頑固性腹瀉、漸進(jìn)性消瘦、腸黏膜增厚并形成皺襞為特征。我國農(nóng)業(yè)部將其劃為二類動(dòng)物疫病。該病在全世界分布廣泛，且發(fā)病率呈上升趨勢，對(duì)養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[1]。對(duì)于副結(jié)核病，目前尚無有效的治療方法，檢出、監(jiān)測、隔離、淘汰感染動(dòng)物和建立純凈的種群是唯一辦法。今后，隨著我國動(dòng)物進(jìn)出口貿(mào)易的增加，攜帶動(dòng)物疫病的風(fēng)險(xiǎn)勢必會(huì)上升，因此加強(qiáng)相關(guān)疫病的監(jiān)測和調(diào)查，具有非常重要的意義[2]。

近年來，我國每年從國外進(jìn)口大量的種羊，澳大利亞是主要的出口國。為了解從澳大利亞進(jìn)境種羊感染副結(jié)核病的情況，使用皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)對(duì)2004-2014年間進(jìn)境的6810頭種羊進(jìn)行了副結(jié)核病的調(diào)查研究[3]。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象及樣品

2004—2014年，從廣州口岸入境的15批共計(jì)6810頭種羊。用一次性無菌注射器（20 mL）頸部采血8-10mL，然后將血液轉(zhuǎn)移到真空采血管中，實(shí)驗(yàn)室分離血清，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 主要試劑

禽型結(jié)核菌素（Avian），由新西蘭AgriQulity公司生產(chǎn)，每毫升含25000IU禽型結(jié)核菌素；副結(jié)核病ELISA診斷試劑盒，由美國IDEXX公司生產(chǎn)。

1.3 方法與結(jié)果判定

1.3.1 皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)（TST）。在羊的頸側(cè)中部上三分之一處剪毛后接種，用卡尺測量術(shù)部中央皮皺厚度，做好記錄。按照常規(guī)方法，用注射器吸取0.1mL禽型結(jié)核菌素在頸部皮內(nèi)注射。注射后48h、72h，分別觀察局部有無熱痛、腫脹等炎性反應(yīng)，并以卡尺測量術(shù)部皮皺厚度。

將接種后72h的皮厚度減去接種前的皮厚度，如果皮厚增加2mm以上時(shí)，可判定遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)陽性，皮厚腫脹差不超過2mm為陰性。

1.3.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測方法。具體操作過程及結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。對(duì)檢出的可疑樣品進(jìn)行復(fù)檢，結(jié)果仍為可疑時(shí)，則判為陽性。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測結(jié)果

根據(jù)我國與澳大利亞雙邊議定書的要求，皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的任一結(jié)果呈陽性反應(yīng)，即可判定該動(dòng)物為陽性。經(jīng)對(duì)進(jìn)境的15批6810頭種羊進(jìn)行皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)和血清樣本檢測，結(jié)果共有104頭陽性，總陽性率為1.53%。（詳見表1）。

表1澳大利亞進(jìn)境種羊副結(jié)核檢測結(jié)果

2.2 結(jié)果分析

檢測結(jié)果顯示，澳大利亞進(jìn)境種羊中存在副結(jié)核病，各批次羊副結(jié)核病的陽性率在0～2.92%之間。其中，ELISA試驗(yàn)檢出的陽性數(shù)量較多；有兩批羊同時(shí)存在TST試驗(yàn)和ELISA試驗(yàn)檢測結(jié)果陽性。

3 討論

3.1 我國應(yīng)重視進(jìn)境羊的副結(jié)核病檢疫

副結(jié)核病是一種慢性進(jìn)行性傳染病，是羊的三大疫病之一，嚴(yán)重威脅養(yǎng)羊業(yè)的發(fā)展。因此，副結(jié)核病是我國進(jìn)境種羊檢疫工作中的必檢項(xiàng)目，被寫入我國與貿(mào)易國的雙邊條款中。

我國實(shí)施國外預(yù)檢制度，只有經(jīng)檢疫合格的種羊方允許出口到中國，但調(diào)查結(jié)果顯示，從澳大利亞進(jìn)境的多批種羊中均檢出該病，雖然陽性率不高，但應(yīng)引起重視。國家應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)入境動(dòng)物檢疫，嚴(yán)格遵照雙邊協(xié)議開展檢測，有效的預(yù)防和控制羊副結(jié)核病的傳入，保障國內(nèi)畜牧業(yè)的發(fā)展和人類身體健康。

3.2 聯(lián)合使用皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)和ELISA方法，可有效提高羊副結(jié)核病的檢出

動(dòng)物機(jī)體首先產(chǎn)生細(xì)胞免疫應(yīng)答，然后才產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答。何昭陽等[4]曾報(bào)道對(duì)感染副結(jié)核菌的病牛，同時(shí)進(jìn)行皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)和ELISA檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)陽性出現(xiàn)比 ELISA 陽性早數(shù)月。遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)是由免疫細(xì)胞參與的反應(yīng)，被病原致敏后T細(xì)胞再次接觸到該抗原時(shí)會(huì)引發(fā)變態(tài)反應(yīng)，適用于感染初期檢測[5]。ELISA試驗(yàn)檢測血清抗體，需要機(jī)體達(dá)到一定的抗體水平，此時(shí)機(jī)體已進(jìn)入體液免疫反應(yīng)時(shí)期。因此，采用皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)和ELISA方法的聯(lián)合使用可有效提高羊副結(jié)核病的檢出，符合當(dāng)前進(jìn)境動(dòng)物的檢疫要求。

3.3 ELISA試驗(yàn)陽性率較高的原因可能是羊處于體液免疫應(yīng)答階段

在15批種羊的檢測過程中，僅有2批次同時(shí)出現(xiàn)TST和ELISA結(jié)果陽性，且陽性結(jié)果重合的數(shù)量較少（3頭），可能與感染動(dòng)物所處的免疫階段有關(guān)。當(dāng)動(dòng)物處于感染初期時(shí)，機(jī)體以細(xì)胞免疫應(yīng)答為主，此時(shí)可能TST試驗(yàn)陽性而ELISA 試驗(yàn)陰性；當(dāng)機(jī)體細(xì)胞免疫應(yīng)答和體液免疫應(yīng)答同時(shí)存在時(shí)，則可能TST和ELISA試驗(yàn)結(jié)果皆為陽性；當(dāng)TST試驗(yàn)陰性而ELISA試驗(yàn)陽性時(shí)，可能體液免疫突出，而機(jī)體細(xì)胞免疫應(yīng)答較弱[6]。

[1] de Lisle G W，Yates G F，Montgomery R H. The emergence of Mycobacterium paratuberculosis in farmed deer in New Zealand-a review of 619 cases [J]. J NZ Vet，2003，51：58-62.

[2] 曹志玲.副結(jié)核病隨進(jìn)境動(dòng)物引入的風(fēng)險(xiǎn)分析[J]. 檢驗(yàn)檢疫學(xué)刊，2009，19 （2）：66.

[3] 李朝君，陳京彩，宋英俊，等.進(jìn)口奶牛副結(jié)核病感染情況的調(diào)查及分析[J].中國動(dòng)物檢疫，2012，29（4）：74-75.

[4] 何昭陽，顧萬鈞，陳獎(jiǎng)勵(lì)，等. 牛副結(jié)核抗體的檢測以及各種檢測方法的關(guān)系[J]. 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1991，13（3）：50- 52.

[5] 顏思通，林志雄，朱道中，等.微量補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)檢測牛、羊副結(jié)核病的研究[J].中國動(dòng)物檢疫，2004，21（11）：23-26.

[6] 徐賢坤，黃小武，藍(lán)紀(jì)，等.兩種奶牛結(jié)核病檢測方法的比較[J].畜牧與獸醫(yī)，2010，42（2）：29-33.

Survey and Analysis on Paratuberculosis Prevalence in the Imported Breeding Sheep Herd from Australia

Wang Tianjie1，Liu Yongsong1，Wei Bing2
（1. Guangzhou Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Guangzhou，Guangdong 510623；2. Tianhe Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Guangzhou，Guangdong 510623）

In order to understand the paratuberculosis infection status in the imported sheep herd from Australia ，6810 sheep were detected by means of TST and ELISA. Result showed that 104 sheep were positive with a positive rate of 1.53%. The positive rate was considered as low，however，strict prevention and control measures should be taken due to its serious thread to sheep industry..

Australia；imported sheep；paratuberculosis；survey

S858.26

：B

：1005-944X（2015）02-0032-03