張文亮，饒雪梅，羅蘭芳

(海南省農(nóng)墾那大醫(yī)院兒科，海南儋州 571700)

·經(jīng)驗交流·

匹多莫德對小兒支原體肺炎Foxp3的影響及臨床治療作用研究

張文亮，饒雪梅，羅蘭芳

(海南省農(nóng)墾那大醫(yī)院兒科，海南儋州 571700)

目的 觀察匹多莫德對肺炎支原體肺炎(MPP)患兒Foxp3基因表達的影響，并探討其相關(guān)的臨床意義。方法收集該院兒科2012年11月至2013年12月治療的MPP患兒78例為研究對象，分為常規(guī)治療組(對照組)和匹多莫德治療組(觀察組)，每組39例，另取該院體檢的健康兒童40例作為健康對照組。Foxp3基因表達使用熒光定量PCR檢測，調(diào)節(jié)性 T 細胞(Treg)使用流式細胞儀檢測。結(jié)果治療前觀察組和對照組Foxp3基因表達和Treg細胞比例差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但均顯著低于健康對照組(P<0.01)。治療后觀察組和對照組Foxp3基因表達和Treg細胞比例均出現(xiàn)顯著升高(P<0.05)，但治療后觀察組升高的幅度顯著高于對照組(P<0.05)。對照組的住院時間、抗菌藥物使用時間、6個月內(nèi)病情反復(fù)次數(shù)分別為(7.74±2.14 )d、(7.74±2.14 )d和(2.04±0.76)次，顯著高于觀察組的(4.32±1.58)d、(4.46±1.62 )d和(0.82±0.24)次(P<0.05)。觀察組和對照組的臨床治療有效率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論匹多莫德可以顯著升高Foxp3表達并提高Treg細胞比例，糾正患兒的免疫平衡紊亂，有助于MPP患兒的恢復(fù)并減少其復(fù)發(fā)，臨床使用安全。

肺炎支原體肺炎；Foxp3基因；調(diào)節(jié)性 T 細胞；匹多莫德

肺炎支原體(MP)是秋冬季常見的一種兒童下呼吸道感染病原體[1]，其引起的肺炎支原體肺炎(MPP)占兒童呼吸道感染性疾病的20%～30%[2]。MP感染不僅損害呼吸道，還可以引發(fā)肺外并發(fā)癥且并發(fā)多臟器功能損害，如肝臟、腎臟、心臟等重要臟器損害，因此積極有效的治療MPP始終是醫(yī)務(wù)工作者研究的熱點[3]。免疫功能紊亂在MPP病變中的作用正受到學(xué)者們的關(guān)注，以此為靶點的治療也逐漸在臨床上開展，并取得了一定的療效[4]。匹多莫德(pidotimod)是一種人工合成的免疫刺激劑[5]，本研究觀察了匹多莫德對MPP患兒Foxp3基因表達的影響，并探討了其相關(guān)的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集本科2012年11月至2013年12月治療的MPP患兒78例，其中男38例，女40例，MPP診斷參照胡亞美等[6]主編的《諸福棠實用兒科學(xué)》(第7版)。排除標準：心、肝、腎等臟器嚴重病變，并發(fā)其他急、慢性感染性疾病，曾使用激素或者其他免疫調(diào)節(jié)劑者。78例MPP患兒分為常規(guī)治療組(對照組)和匹多莫德治療組(觀察組)，每組39例。對照組男19例，女20例，年齡3～9歲，平均(5.4±2.5)歲；觀察組男19例，女20例，年齡3～8歲，平均(5.2±2.1)歲，兩組患者在性別、年齡等臨床資料方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。另取本院體檢中心的健康兒童40例作為健康對照組，其中男20例，女20例，年齡4～10歲，平均(5.8±2.7)歲。健康對照組(n=40)和MPP患兒組(n=78)在性別、年齡臨床資料方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 對照組給予退熱、止咳、化痰等常規(guī)治療。靜脈滴注阿奇霉素(利君制藥股份公司，國藥準字H20000377)，10 mg·kg-1·d-1，5 d為1療程。治療1～3個療程。觀察組在對照組基礎(chǔ)上加用匹多莫德(浙江仙琚制藥股份有限公司，國藥準字第H20030325)，前2周，400 mg/次，每日2次;后6周，400 mg/次，每日1次，共8周。比較兩組的住院時間、抗菌藥物使用時間和臨床療效，所有患兒隨訪6個月，記錄病變反復(fù)次數(shù)。

1.2.2 療效評價 參照馬紅秋等[5]的方法，痊愈：臨床癥狀完全消失；顯效：臨床癥狀明顯緩解；無效：臨床癥狀無明顯改善甚至惡化。有效率(%)=(痊愈+顯效)/總例數(shù)×100%。

1.2.3 Foxp3基因表達的熒光定量PCR檢測 取健康對照、MPP患兒治療前和治療后靜脈血1 mL，使用RNA提取和反轉(zhuǎn)錄試劑盒(美國基因公司產(chǎn)品)，反轉(zhuǎn)錄出cDNA第一鏈。熒光定量檢測試劑盒(大連寶生物公司產(chǎn)品)檢測Foxp3基因的表達。Foxp3基因：上游引物5′-CGG TTA AGT ACT GTG GAA TTG-3′，下游引物5′-CCT TAA GTA CCA TGG TTG TGC-3′；反應(yīng)條件為94 ℃ 60 s；94 ℃ 30 s，61 ℃ 30 s，72 ℃ 60 s，30個循環(huán)?！鰿t值=目的基因Ct值-內(nèi)參基因Ct值，F(xiàn)oxp3基因的表達量采用2-△Ct評估。

1.2.4 調(diào)節(jié)性 T 細胞(Treg)的流式細胞儀檢測 取健康對照、MPP患兒治療前和治療后靜脈血5 mL，裂解紅細胞，PBS緩沖液洗滌2次，最后0.4 mL PBS緩沖液懸浮細胞，加入FITC-CD4和APC-CD25(購自美國Millipore公司)抗體各10 μL，避光染色30 min，美國B-D 公司FACS Calibur流式細胞儀檢測FITC-CD4和APC-CD25雙陽性的Treg細胞。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS12.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 匹多莫德對MPP患兒Foxp3和Treg細胞的影響 治療前觀察組和對照組Foxp3基因表達和Treg細胞比例差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但均顯著低于健康對照組(P<0.01)。治療后兩組Foxp3基因表達和Treg細胞比例均出現(xiàn)顯著升高(P<0.05)，但治療后觀察組升高的幅度顯著高于對照組(P<0.05)。見圖1、表1。

圖1 Treg細胞的流式細胞儀檢測

2.2 匹多莫德對MPP患兒臨床指標的影響 對照組的住院時間、抗菌藥物使用時間、6個月內(nèi)病情反復(fù)次數(shù)分別為(7.74±2.14)d、(7.74±2.14)d和(2.04±0.76)次，顯著高于觀察組的(4.32±1.58)d、(4.46±1.62)d和(0.82±0.24)次(P<0.05)。

2.3 觀察組和治療組臨床療效和不良反應(yīng)的分析 兩組患兒經(jīng)積極治療后均獲得痊愈，臨床治療有效率為100%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。用藥期間觀察組未觀察到匹多莫德相關(guān)的不良反應(yīng)發(fā)生。

表1 3組Foxp3表達和Treg細胞比例的比較

3 討 論

MP感染而引起的MPP好發(fā)于兒童，該病原菌致病機制復(fù)雜[6-7]，除了病原菌毒素的直接侵害外，還與免疫功能紊亂有關(guān)，特別是 T 細胞亞群功能紊亂[8]。Treg是新發(fā)現(xiàn)的一種CD4+T 細胞亞群成員，對于機體免疫平衡的維持發(fā)揮重要的作用，如其主要效應(yīng)因子IL-10可以抑制致炎因子IL-6、TNF-α等的釋放[9]，F(xiàn)oxp3是調(diào)控CD4+T細胞向 Treg細胞分化的調(diào)控蛋白，是Treg 細胞發(fā)育的一個重要開關(guān)蛋白[10]，本研究的檢測顯示MPP患兒中Foxp3表達和Treg比例均顯著低于健康對照兒童，說明MPP患兒處于一種Treg 細胞分化抑制狀態(tài)，失去了對一些治病炎癥介質(zhì)的抑制作用。袁浩等[11]的研究也獲得了相似的結(jié)果。

MPP發(fā)病機制與免疫功能有關(guān)已得到廣泛認同，目前臨床上對MPP的治療傾向于除了抗支原體治療外，還應(yīng)積極促進患兒免疫功能及免疫平衡的恢復(fù)[12]。匹多莫德化學(xué)結(jié)構(gòu)為3-L-焦谷氨酸四氫噻唑啉羧酸，作為機體免疫增強劑，其可以調(diào)節(jié)CD4/CD8細胞的比例失調(diào)，改善機體的免疫狀態(tài)。本研究顯示使用匹多莫德后MPP患兒Foxp3表達和Treg比例可以得到顯著升高，觀察組對Foxp3表達和Treg比例的改善作用顯著優(yōu)于對照組。說明加用匹多莫德對MPP患兒T 細胞亞群功能紊亂的糾正起到了積極的作用。臨床療效分析顯示兩組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但觀察組的住院時間、抗菌藥物使用時間、病情反復(fù)次數(shù)均顯著短于對照組，說明使用匹多莫德后有利于MPP患兒的恢復(fù)并且可以有效阻止病情的反復(fù)發(fā)作。動物實驗和臨床研究都已經(jīng)證實匹多莫德的急性及慢性毒性作用都非常低[4]，本研究也沒有觀察到匹多莫德相關(guān)的不良反應(yīng)，說明匹多莫德是一種安全的治療方法。

綜上所述，本研究顯示MPP患兒中Foxp3表達和Treg細胞比例均顯著低于健康兒童，匹多莫德可以顯著升高Foxp3表達并提高Treg細胞比例，糾正患兒的免疫平衡紊亂，有助于MPP患兒的恢復(fù)并減少其復(fù)發(fā)，臨床使用安全，為MPP 提供了一種新的治療思路。

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10.3969/j.issn.1671-8348.2015.25.040

張文亮(1978-)，本科，主治醫(yī)師，主要從事小兒肺炎呼吸系統(tǒng)疾病研究。

R725.6

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1671-8348(2015)25-3572-03

2015-03-08

2015-05-28)