蔡文偉付靜邱寶珊

芪菊袋泡茶治療鼻咽炎的藥效學(xué)研究*

蔡文偉1付靜2邱寶珊1

目的通過藥效學(xué)實驗對芪菊袋泡茶的抗過敏、祛痰及對免疫功能的作用進行研究。探討芪菊袋泡茶治療鼻咽炎的可能機理。方法通過觀察芪菊袋泡茶對小鼠呼吸道酚紅排泌、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)、被動皮膚過敏實驗的影響，觀察其祛痰、抗過敏作用及對免疫系統(tǒng)的影響。結(jié)果芪菊袋泡茶增加小鼠呼吸道酚紅排泌量，提高環(huán)磷酰胺造成的免疫力低下小鼠的特異性免疫力，抑制小鼠被動皮膚過敏。結(jié)論芪菊袋泡茶具有祛痰、增強特異性免疫功能、抗過敏的作用。實驗結(jié)果為芪菊袋泡茶主治氣虛熱毒蘊結(jié)型鼻咽炎提供了藥理學(xué)依據(jù)。

袋泡茶；鼻咽炎；抗過敏；藥效學(xué)

鼻咽炎為鼻咽部的非特異性炎癥，是耳鼻咽喉科常見病，嶺南溫?zé)釟夂?，鼻咽炎發(fā)病率高，患者多屬氣虛熱毒蘊結(jié)。目前多數(shù)學(xué)者認為,其病因與細菌、病毒感染及鼻咽局部免疫力下降有關(guān)。目前治療鼻咽炎方法及劑型不多，且療效不太理想，癥狀遷延反復(fù)。邱寶珊教授臨床上運用黃芪、野菊花、馬勃、薄荷、千層紙、甘草六味中藥組成的方劑囑患者泡水代茶飲以治療慢性鼻咽炎，取得良好療效[1]，擬制成袋泡茶劑，方便患者使用。本文通過進一步藥效學(xué)實驗對芪菊袋泡茶在祛痰、調(diào)節(jié)免疫功能及抗過敏方面的作用進行研究，為其治療慢性鼻咽炎提供藥理學(xué)依據(jù)，報道如下。

資料與方法

1 實驗材料

1.1 實驗動物

SPF級昆明種小鼠（合格證號：0110351）購自廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心，合格證號：0110351。

1.2 藥物及試劑

芪菊袋泡茶粗粉，按黃芪∶野菊花∶薄荷∶千層紙∶馬勃∶甘草為10∶10∶3∶5∶5∶6的比例打成粗粉，以沸水浸泡10分鐘，合并擠壓，反復(fù)2次，合并藥液后再加熱擠壓，保證充分浸出（廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院）。鼻咽清毒顆粒（廣州奇星藥業(yè)有限公司，批號：12019）。絞股藍總甙片（廣州白云山和記黃埔中藥有限公司，批號：KOD001）。鹽酸氨溴索片[山德士（中國）制藥有限公司，批號：FU002]。撲爾敏片（廣州康和藥業(yè)有限公司，批號：11201）。伊文思藍（國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號：WC20080125）。酚紅（廣州瑞舒生物科技有限公司，批號：20120721）。注射用環(huán)磷酰胺(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批號：11101821)。二硝基氯苯（廣州齊云生物科技有限公司，批號：0168B383）。弗氏完全佐劑（北京鼎國生物技術(shù)有限責(zé)任公司，批號：742001200）。硫化鈉（Aladdin Chemistry，批號：416911)。

1.3 實驗儀器

JA1203N型分析天平：上海精密儀器有限公司產(chǎn)品；722可見分光光度計：上海菁華科技儀器有限公司；電子天平：常熟市雙杰測試儀器廠，T1000；Thermo全波長酶標(biāo)儀：賽默飛世爾科技中國，1510.。

2 方法[2]

2.1 芪菊袋泡茶對小鼠呼吸道酚紅排泌量的影響

取SPF級昆明種小鼠72只，雌雄各半，隨機分成空白對照組（給予等體積蒸餾水），氨溴索組（300mg·kg-1），鼻咽清毒顆粒組（575mg·kg-1，采用臨床用量的10倍），芪菊袋泡茶低、中、高劑量組（0.5、1.0、2.0g·kg-1，分別為臨床推薦劑量的5倍、10倍、20倍）。每日灌胃給藥1次，0.2ml/kg，連續(xù)給藥5天。末次給藥30min后每只小鼠腹腔注射5%酚紅生理鹽水0.1ml/10g體重，30min后脫頸處死，剖開胸腔，分離氣管，剪下自甲狀軟骨至下端分叉處的一段氣管，放入盛有4ml生理鹽水的試管中，充分震蕩后離心，取上清液3.5ml加1mol/L NaOH溶液0.1ml，顯色后于波長546nm處測OD值，并統(tǒng)計組間差異。

2.2 芪菊袋泡茶對免疫功能作用的影響（小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)DTH）

取SPF級昆明種小鼠60只，雌雄各半，隨機分成空白對照組（給予等體積蒸餾水），環(huán)磷酰胺模型組（給予等體積蒸餾水），絞股藍組（200mg·kg-1），芪菊袋泡茶粗粉浸出液低、中、高劑量組（0.5、1.0、2.0 g·kg-1，分別為臨床推薦劑量的5倍、10倍、20倍）。每日灌胃給藥一次，0.2ml/kg,連續(xù)給藥5天。給藥前2d每只小鼠腹部去毛，范圍約3cm×3cm，并將含1%二硝基氯苯（DNCB）的丙酮麻油溶液（V∶V=1∶1，即配即用）50L均勻涂抹致敏，次日強化1次；除空白組對照組外小鼠致敏后立即皮下注射環(huán)磷酰胺125mg/kg誘導(dǎo)小鼠降低DTH模型。致敏5d后，用1%DNCB丙酮麻油溶液10ml均勻涂抹于各組小鼠右耳兩面，左耳涂抹等量丙酮麻油溶液。共計24h，頸椎脫臼處死小鼠，剪下左右耳殼，用打孔器取下直徑8mm的耳片，置電子天平稱重，以左右耳片重量之差作為小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的強度。

2.3 芪菊袋泡茶的抗過敏作用（小鼠被動皮膚過敏，PCA）

取SPF級昆明種小鼠20只，雌雄各半，體重18～20g，將2%抗原卵清蛋白與弗氏佐劑等比乳化，每只小鼠兩后腳掌各注射上述混懸液0.05ml。12天后，動物眼眶采血，分離血清，-20℃冰箱保存?zhèn)溆?。另取SPF級昆明種小鼠72只，雌雄各半，隨機分成模型組，撲爾敏組 (4mg·kg-1),鼻咽清毒顆粒組（575mg·kg-1，采用臨床用量的10倍），芪菊袋泡茶低、中、高劑量組（0.5、1.0、2.0g·kg-1，分別為臨床推薦劑量的5倍、10倍、20倍）。每日灌胃給藥一次，0.2ml/kg,連續(xù)給藥5天。末次給藥1d后用上述致敏小鼠的混合血清加生理鹽水1∶10稀釋，每只動物腹壁皮內(nèi)注射兩個點，每點0.05ml，繼續(xù)給藥48h后進行抗原攻擊，從動物尾靜脈注射1%抗原卵清蛋白0.1ml(用1%伊文思藍-生理鹽水0.2mL配制)。20min后斷頭處死動物，翻轉(zhuǎn)腹部皮膚，將藍色斑皮取下，剪碎，加入丙酮-生理鹽水(7∶3)混合浴液5 ml，浸泡，次日離心3000rpm10min，于波長610nm處測OD值，計算出抑制百分率。

抑制百分率(%)=100-（用藥組平均OD值/對照組平均OD值）×100%

結(jié)果

1 芪菊袋泡茶對小鼠呼吸道酚紅排泌量的影響

該實驗數(shù)據(jù)表明芪菊袋泡茶中劑量組、氨溴索組與對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；鼻咽清毒顆粒組與對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），小鼠呼吸道酚紅排泌量均增加，見表1。

表1 各組小鼠呼吸道酚紅排泌情況（）

表1 各組小鼠呼吸道酚紅排泌情況（）

注：**表示給藥組與空白對照組比較P＜0.01，*表示給藥組與空白對照組比較P＜0.05。

組別 n OD對照組氨溴索片組鼻咽清毒顆粒組低劑量組中劑量組高劑量組12 12 12 12 12 12 0.118±0.030 0.143±0.027*0.169±0.043**0.140±0.029 0.144±0.029*0.126±0.026

2芪菊袋泡茶對免疫功能作用的影響（小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)DTH）實驗

實驗數(shù)據(jù)表明，與對照組相比，環(huán)磷酰胺模型組小鼠DTH耳腫脹度顯著降低（P＜0.05），提示免疫功能低下模型建立成功；與環(huán)磷酰胺模型組相比，芪菊袋泡茶中、高劑量組小鼠DTH耳腫脹度顯著增加（P＜0.05），見表2。

表2 各組小鼠DTH耳腫脹度情況

3 芪菊袋泡茶的抗過敏作用（小鼠被動皮膚過敏，PCA）

實驗數(shù)據(jù)顯示與模型組相比，芪菊袋泡茶低、中劑量組小鼠伊文思藍滲出量均顯著降低（P＜0.01），見表3

表3 各組對小鼠被動皮膚過敏（PCA）情況

討論

鼻咽部屬上呼吸道，免疫力下降情況下，正常菌群失調(diào)，鼻咽部的正常生理環(huán)境遭到破壞，鼻咽部遭到致病菌、病毒感染，黏膜對損傷因子的防御反應(yīng)則表現(xiàn)為鼻咽炎，反復(fù)發(fā)作或遷延日久而發(fā)展為慢性鼻咽炎。中醫(yī)則認為慢性鼻咽炎多由粉塵、濁氣的刺激，或煙酒過度，偏嗜辛辣以致臟腑功能失調(diào)，肺胃痰熱內(nèi)蘊，復(fù)感外邪；或外感后余熱未清，傷及陰液，病久，肺腎陰虛，痰淤阻滯；脾胃虛弱，脾胃失運，水谷不化精氣，不得上輸于肺，而下流成為濕濁，濕濁阻滯，脾胃不能運化水谷精微，濡養(yǎng)清竅；肝郁氣滯，痰瘀阻絡(luò)[3]。既往鼻咽炎的分型治療多沿用慢性鼻炎、慢性咽炎而辨證加減治療，李洵等[4]通過300例慢性鼻咽炎患者按照中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn)進行證候分型，觀察各型患者主要癥狀分布及局部黏膜表現(xiàn)，分為肝經(jīng)郁熱、肺胃蘊熱、濕熱蘊脾、肺腎陰虛、脾氣虛弱、痰凝血瘀6個證型，其中以脾氣虛弱最為多見。針對嶺南溫?zé)釟夂颍员茄恃装l(fā)病率高，大多數(shù)慢性鼻咽炎患者多屬氣虛，熱毒蘊結(jié)鼻咽所致。

芪菊袋泡茶為邱寶珊教授等結(jié)合多年臨床經(jīng)驗，針對嶺南溫?zé)釟夂?，鼻咽炎及鼻咽癌發(fā)病率高，患者多屬氣虛熱毒蘊結(jié)所擬，由黃芪、野菊花、薄荷及甘草等六味藥物組成，主要功效為益氣清熱，解毒利咽。其中黃芪對免疫系統(tǒng)包括非特異性免疫功能、體液免疫、細胞免疫、對自然殺傷(NK)細胞及誘生干擾素都有重要的影響[5]。野菊花提取物具有顯著的抗炎、免疫抑制作用[6]。薄荷成份中的薄荷醇能促進分泌，使黏液稀釋而表現(xiàn)祛痰作用[7]。甘草具有抗炎及免疫抑制作用[8]。陳少敏等[9]通過芪菊袋泡茶對小鼠及雞胚的體內(nèi)外實驗，已證明芪菊袋泡茶組方具有抗菌、抗病毒作用。

祛痰實驗利用酚紅能部分從氣管排泌的特點，在祛痰藥物的影響下，隨著氣管分泌量的增加，由呼吸道黏膜排出的酚紅也增多，用分光光度計測出酚紅的排泌量，從而得知藥物祛痰作用的強弱。由實驗結(jié)果可知，芪菊袋泡茶能顯著增加小鼠氣管酚紅排泌量，有祛痰作用。本研究用免疫抑制劑環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)DTH降低小鼠模型來研究芪菊袋泡茶對小鼠特異性免疫功能的影響，實驗結(jié)果證實，芪菊袋泡茶可顯著增加模型小鼠耳腫脹度，能顯著提高環(huán)磷酰胺造成的免疫力低下小鼠的特異性免疫力。被動皮膚過敏實驗（PCA）結(jié)果提示芪菊袋泡茶可顯著抑制小鼠被動皮膚過敏，能抑制由IgE介導(dǎo)的過敏反應(yīng)。

綜上所述，芪菊袋泡茶在藥效學(xué)實驗中具有抗菌抗病毒、祛痰、增強特異性免疫功能、抗過敏的作用，為芪菊袋泡茶益氣清熱、解毒利咽，主治氣虛熱毒蘊結(jié)型鼻咽炎提供了藥效學(xué)依據(jù)，同時為芪菊袋泡茶應(yīng)用于鼻咽炎預(yù)防提供藥效學(xué)依據(jù)。

1 邱寶珊，陳少敏，李潔璇，等.芪菊泡茶治療氣虛熱毒蘊結(jié)型鼻咽炎的臨床研究[J].新中醫(yī),2014,46(1):109-111.

2 徐叔云,卞如濂.藥理實驗方法學(xué)[M].第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2002:1001-1059.

3 王世貞.中醫(yī)耳鼻咽喉科學(xué)[M].第2版.北京：中國中醫(yī)藥出版社,2007:151-156.

4 李洵,張亞力,劉建華,等.慢性鼻咽炎中醫(yī)證候分型的臨床研究[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報（中醫(yī)臨床版）2011，18（3）:8-9.

5 陳國輝,黃文鳳.黃芪的化學(xué)成分及藥理作用研究進[J].中國新藥雜志,2008,17（17）：1482-1485

6 陳傳千,沈艷平,屈躍丹,等.野菊花提取物藥理作用的研究進展[J].吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報,2010,6(31):175-178.

7 房海靈,李維林,任冰如,等.薄荷屬植物的化學(xué)成分及藥理學(xué)研究進展[J].中國藥業(yè),2010,19(10):13-17.

8 于輝,李春香,宮凌濤,等.甘草的藥理作用概述.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展[J],2006,6(4):77-79.

9 陳少敏,黃可兒，劉春松，等.芪菊袋泡茶抗菌及抗病毒的藥效學(xué)研究[J].中藥新藥與臨床藥理,2013,24(6): 573-577.

（收稿:2014-09-10 修回：2014-10-17）

Pharmacological Study on the Effect of the Stilbene Chrysanthemum Tea Bag in Treating nasopharyngitis

CAI Wenwei,FU Jing,QIU Baoshan
The First Affiliated Hospital of Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou,510405,Guangdong,China

ObjectiveResearch the anti allergic,anti-asthmatic effects and immunologic function of the Qiju teabag by pharmacodynamic experiment and explore the mechanism for the treatment of nasopharyngitis.MethodObserving the influence of Qiju teabag on phenolsulfonphthalein excretion of respiratory tract,the delayed hypersensitivity and the passive cutaneous anaphylaxis of mice,and to explore the influence on the anti-asthmatic,antiallergic effect and the immunologic function.ResultsThe Qiju teabag can increase the phenolsulfonphthalein excretion of respiratory tract,improve the specificity immunity of the mice with suppressed immunity caused by cyclophosphamide and inhibit the passive cutaneous anaphylaxis of the mice.ConclusionQiju teabag performs well in anti allergic,anti-asthmatic effects and immunologic function.The experimental results show that the Qiju teabag refreshes the breath,clears the heats,detoxify and is good for the pharynx.The experiment provides the pharmacodynamic evidence for nasopharyngitis caused by the knotting of toxic heat in the body.

teabag；nasopharyngitis；anti allergic；pharmacodynamics

10.16542/j.cnki.issn.1007-4856.2015.04.002

廣東省科技廳科研項目（2008B080703044）

1 廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院耳鼻咽喉科（510406）

2 南方醫(yī)科大學(xué)附屬珠江醫(yī)院體檢保健科

邱寶珊，教授，主任醫(yī)師.Email：baoshanqiu@126.com.