李平生

(1.武漢大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，湖北 武漢 430071;2.湖北科技學(xué)院附屬第二醫(yī)院)

紫杉醇(paclitaxel，TAX)是從紅豆杉的樹(shù)皮中提取的一種天然植物產(chǎn)品，已經(jīng)證明對(duì)腫瘤具有顯著的活性，廣泛應(yīng)用于卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、食道癌、肺癌、多發(fā)性骨髓瘤的治療［1，2］。然而，紫杉醇水溶性差，也有一定的副作用，主要體現(xiàn)在骨髓抑制、外周感覺(jué)神經(jīng)病變和過(guò)敏反應(yīng);另外一個(gè)問(wèn)題就是藥物的耐藥性。這些問(wèn)題可以通過(guò)制劑技術(shù)來(lái)解決。新的戰(zhàn)略包括制備水溶性前藥、納米載體脂質(zhì)體、高分子膠束等［3］。

納米制劑的粒徑1～1000nm，由于粒徑小，可以實(shí)現(xiàn)被動(dòng)靶向，減小藥物對(duì)正常組織的毒副作用，而載體的比表面積大，可以提高難容藥物的溶解性，提高藥物的生物利用度。正常組織的血管壁內(nèi)皮間隙致密，結(jié)構(gòu)完整，大分子及藥物載體很難通過(guò)，而腫瘤組織中血管豐富，內(nèi)皮間隙為380～780 nm，結(jié)果完整性差，淋巴回流缺失，因此一定粒徑的納米制劑可以通過(guò)血管壁，進(jìn)入腫瘤組織，滯留腫瘤組織，局部組織藥物濃度增加，而達(dá)到殺死腫瘤細(xì)胞的作用［4］。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器 H-7000FA 透射電子顯微鏡(日本日立HITACHI 公司)，85-2 恒溫磁力攪拌器(上海司樂(lè)儀器有限公司)，Zetasizer Nano ZS90 激光粒度儀(英國(guó)Malvern 公司)，S-250D 超聲破碎儀(上海生析超聲儀器有限公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料 聚乳酸(分子量1 萬(wàn)，濟(jì)南岱罡生物科有限公司)，紫杉醇(≥99%，南京標(biāo)科生物科技公司)，聚乙烯醇(PVA-217)(日本Kuraray 公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 TAX 納米粒的制備 采用超聲乳化法制備紫杉醇納米粒:取0.5%(m/v)濃度的PVA 溶液10ml，用做水相;另取TAX 0.0056g，聚乳酸0.1g 溶于2ml 的二氯甲烷溶液中，混合均勻后在攪拌的條件下加入到水相中，然后在100 W 超聲強(qiáng)度下超聲乳化1min，乳液在常溫條件下攪拌過(guò)夜至有機(jī)溶劑揮發(fā)干凈，10000 rpm 離心10min，然后重新分散于分散介質(zhì)中保存。

1.3.2 納米粒粒徑大小測(cè)定 將納米粒溶液用超純水稀釋到一定濃度后，取1ml 至樣品池，激光粒度儀設(shè)置散射角為90°，常溫平衡2min 后測(cè)定納米粒的水合粒徑。

1.3.3 納米粒的形態(tài)觀察 將納米粒溶液用超純水稀釋到一定濃度后，滴加到銅網(wǎng)上，自然干燥后用1%(w/v)磷鎢酸溶液染色20s，放置過(guò)夜后透射電鏡下觀察納米粒的形態(tài)。

1.3.4 納米粒的載藥量及包封率的測(cè)定 色譜條件:ODS C18 為固定相;流動(dòng)相:甲醇-乙腈-水(30∶40∶30);流速:1ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng):227nm;進(jìn)樣量:20μl。紫杉醇納米粒溶液3 批，分別取1ml至容量瓶中，加丙酮乙醇的混合溶劑溶解定容，取適量過(guò)濾，取濾液20μl 進(jìn)樣。

2 結(jié)果

2.1 紫杉醇納米粒溶液的外觀 制備的紫杉醇納米粒溶液是均一穩(wěn)定，且略帶淺藍(lán)色乳光的膠體分散體系。

2.2 紫杉醇聚乳酸納米粒的粒徑測(cè)量 紫杉醇聚乳酸納米粒粒徑為(230 ±1.08)nm，其多分散性系數(shù)(PDI)0.124 ±0.011，表明納米粒粒徑較均勻。

2.3 紫杉醇納米粒的形態(tài)學(xué)觀察 對(duì)紫杉醇聚乳酸納米粒透射電鏡觀察，制備的納米粒外觀圓整，粒徑均勻。

2.4 紫杉醇納米粒的載藥量和包封率測(cè)量 紫杉醇標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為A=0.3467C +0.5105(r=0.9997)，在1～50μg/mL 范圍內(nèi)紫杉醇峰面積與其濃度呈良好的相關(guān)性。按照包封率=包封的藥物/總投藥量，載藥量=包封的藥物/總重量計(jì)算納米粒的包封率為(93.57 ±0.50)%，載藥量為(3.01 ±0.03)μg/mg，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 紫杉醇聚乳酸納米粒的包封率和載藥量

3 討論

納米粒的制備方法包括機(jī)械粉碎法、物理化學(xué)法、化學(xué)合成法等，其中物理化學(xué)法包括乳化溶劑蒸發(fā)法、溶劑擴(kuò)散法、液中干燥法、凝聚法等。超聲乳化法是指用超聲波的強(qiáng)機(jī)械剪切力作用下，將有機(jī)相和水相混合成均勻的分散體系，由于超聲波的強(qiáng)度大，可以將其粒徑控制在納米級(jí)范圍內(nèi)。

納米粒由于粒徑較小，比表面積大，可以實(shí)現(xiàn)藥物的被動(dòng)靶向及提高藥物的生物利用度。納米粒主要分布于肝、脾、肺，少量進(jìn)入骨髓，通過(guò)EPR效應(yīng)，納米粒將通過(guò)腫瘤血管，進(jìn)入腫瘤組織中，所以納米粒是最有應(yīng)用前景的抗癌藥物載體之一。

［1］李媛，李振宇.天然抗癌藥物-紫杉醇［J］.中山大學(xué)研究生學(xué)刊，2006，27(4):58

［2］魏昌華，姚春芳.新型抗癌藥-紫杉醇［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，1996，31(5):259

［3］陳孟夏，梁杰，李珊珊，等.紫杉醇新劑型的研究進(jìn)展［J］.安徽醫(yī)藥，2014，18(4):602