梁 可 馬 進(jìn) 曲 怡 鄭冰元 喬 鐵

1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)方劑學(xué)科，遼寧沈陽110847；2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，遼寧沈陽110034

黃芪皂苷對(duì)小鼠化療貧血模型白介素-2、白介素-4和白介素-6的影響

梁 可1馬 進(jìn)2曲 怡1鄭冰元1喬 鐵1

1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)方劑學(xué)科，遼寧沈陽110847；2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，遼寧沈陽110034

目的考察黃芪皂苷對(duì)化療貧血模型小鼠血清中白介素-2（IL-2）、白介素-4（IL-4）和白介素-6（IL-6）的影響。方法選取6～7周齡昆明種小鼠64只，隨機(jī)分為空白組、模型組、陽性對(duì)照組和給藥組，每組16只，雌雄各半。采用環(huán)磷酰胺建立化療貧血模型，空白組正常飼養(yǎng)，不予特殊處理。模型組、陽性對(duì)照組和給藥組分別于1、3、5 d按0.2 g/kg體重劑量腹腔注射環(huán)磷酰胺。于造模第7天灌胃給藥，空白組、模型組均按10mL/kg體重胃飼蒸餾水；陽性對(duì)照組按5mL/kg體重胃飼黃芪精混懸液；給藥組按10 mL/kg體重胃飼黃芪皂苷溶液，灌胃治療14 d后，摘眼球取血。利用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA）測(cè)定血清中IL-2、IL-4和IL-6的含量。結(jié)果與空白組IL-2［（911.5±157.6）ng/L］、IL-4［（711.4±119.8）ng/L］、IL-6［（193.3±71.0）ng/L］含量比較，模型組IL-2［（245.0±104.3）ng/L］、IL-4［（124.3±54.9）ng/L］含量明顯下降，IL-6［（1245.7±254.5）ng/L］含量顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，給藥組IL-2［（640.8±192.8）ng/L］、IL-4［（574.0±112.4）ng/L］含量明顯升高，IL-6［（521.5±203.8）ng/L］含量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論黃芪皂苷能提高化療貧血模型小鼠血清中IL-2、IL-4的含量，降低IL-6的含量。IL-2、IL-4、IL-6與環(huán)磷酰胺引起的免疫失調(diào)和造血功能抑制有關(guān)；黃芪皂苷能夠改善環(huán)磷酰胺所致的小鼠免疫力低下和骨髓抑制情況。

黃芪皂苷；化療貧血；白介素-2；白介素-4；白介素-6

黃芪為豆科植物蒙古黃芪Astragalusmembranaceus（Fisch.）Bge.var.mongholicus（Bge.）Hsiao或膜莢黃芪Astragalusmembranaceus（Fisch.）Bge.的干燥根，具有補(bǔ)氣升陽、固表止汗、利水消腫、生津養(yǎng)血之功效，能增強(qiáng)人體免疫系統(tǒng)功能，改善機(jī)體骨髓造血功能［1］。黃芪中皂苷類、黃酮類、多糖類為黃芪主要活性成分，而對(duì)其改善免疫和骨髓抑制作用，研究多集中于黃芪多糖，對(duì)黃芪皂苷的報(bào)道較少［2-3］。本實(shí)驗(yàn)主要通過建立小鼠化療貧血模型，考察黃芪皂苷對(duì)小鼠血清細(xì)胞因子白介素-2（IL-2）、白介素-4（IL-4）、白介素-6（IL-6）的影響，從而對(duì)黃芪皂苷調(diào)節(jié)免疫功能、改善造血功能進(jìn)行初步研究，為臨床應(yīng)用中藥減輕化療藥毒副作用提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)昆明種小鼠64只，6～7周齡，雌雄各半，平均體重（20±2）g，購(gòu)于遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.2 藥物

黃芪皂苷（成都曼斯特生物科技有限公司，Astragaloside UV≥98%，批號(hào)：MUST-13100901），環(huán)磷酰胺注射液（山西德普藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：04130904），黃芪精（揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào)：13121322）。

1.3 主要儀器與試劑

IL-2、IL-4、IL-6酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）檢測(cè)試劑盒購(gòu)于聯(lián)科生物技術(shù)有限公司。Multiskan FC型酶標(biāo)儀（Thermo Fisher公司），微量冷凍離心機(jī)（Thermo Fisher公司）。

1.4 方法

將64只昆明種小鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、陽性對(duì)照組和給藥組，每組16只，雌雄各半。空白組：正常飼養(yǎng)，不予特殊處理。模型組、陽性對(duì)照組和給藥組分別于1、3、5 d按0.2 g/kg體重劑量腹腔注射環(huán)磷酰胺。于造模第7天灌胃給藥，空白組、模型組均按10mL/kg體重胃飼蒸餾水；陽性對(duì)照組按5mL/kg體重胃飼黃芪精混懸液；給藥組按10 mL/kg體重胃飼黃芪皂苷溶液，連續(xù)灌胃14 d。于末次給藥后24 h，摘眼球取血，檢測(cè)相應(yīng)指標(biāo)。

1.5 檢測(cè)指標(biāo)

采用ELISA法檢測(cè)小鼠血清中IL-2、IL-4、IL-6含量。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用方差齊性檢驗(yàn)，方差分析采用One-Way ANOVA分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 黃芪皂苷對(duì)化療性貧血模型小鼠血清中IL-2、IL-4含量的影響

與空白組比較，其余各組IL-2、IL-4含量明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，給藥組和陽性對(duì)照組IL-2、IL-4含量均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與陽性對(duì)照組比較，給藥組IL-2、IL-4含量明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示黃芪皂苷在提高IL-2、IL-4含量作用方面優(yōu)于黃芪精。見表1。

表1 黃芪皂苷對(duì)化療性貧血模型小鼠血清中白介素-2、白介素-4含量的影響（ng/L，±s）

表1 黃芪皂苷對(duì)化療性貧血模型小鼠血清中白介素-2、白介素-4含量的影響（ng/L，±s）

注：與空白組比較，*P＜0.05；與模型組比較，▲P＜0.05；與陽性對(duì)照組比較，△P＜0.05

?

2.2 黃芪皂苷對(duì)化療性貧血模型小鼠血清中IL-6含量的影響

與空白組比較，其余各組IL-6含量均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，給藥組和陽性對(duì)照組IL-6含量均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與陽性對(duì)照組比較，給藥組IL-6含量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示黃芪皂苷在降低IL-6含量作用方面優(yōu)于黃芪精。見表2。

表2 黃芪皂苷對(duì)化療性貧血模型小鼠血清中白介素-6含量的影響（ng/L，±s）

表2 黃芪皂苷對(duì)化療性貧血模型小鼠血清中白介素-6含量的影響（ng/L，±s）

注：與空白組比較，*P＜0.05；與模型組比較，▲P＜0.05；與陽性對(duì)照組比較，△P＜0.05

?

3 討論

環(huán)磷酰胺為臨床常用的廣譜抗腫瘤藥物，但在殺傷和抑制腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，對(duì)骨髓造血細(xì)胞產(chǎn)生強(qiáng)烈的抑制作用，同時(shí)還會(huì)導(dǎo)致免疫力下降等問題，不利于機(jī)體的繼續(xù)治療與術(shù)后的恢復(fù)［4］。黃芪中皂苷類成分主要有黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ、黃芪皂苷Ⅲ和黃芪皂苷Ⅳ等，具有改善機(jī)體免疫、增強(qiáng)造血功能、抗腫瘤等藥理作用，還能減輕化療藥物引起的不良反應(yīng)。研究表明，黃芪皂苷能提高機(jī)體的特異及非特異性免疫功能，促進(jìn)免疫細(xì)胞因子的產(chǎn)生，并且能顯著抑制腫瘤生長(zhǎng)，是一種免疫調(diào)節(jié)劑［5］。黃芪皂苷對(duì)小鼠T、B淋巴細(xì)胞增殖與產(chǎn)生IL-2均有明顯的促進(jìn)作用，顯示出較強(qiáng)的細(xì)胞免疫和體液免疫調(diào)節(jié)作用［6-9］。白介素（interleukin，IL）是在白細(xì)胞或免疫細(xì)胞間相互作用的淋巴因子，屬于免疫調(diào)節(jié)因子，主要由激活淋巴細(xì)胞分泌，作為免疫系統(tǒng)的細(xì)胞因子信使發(fā)揮作用。同時(shí)，IL還和血細(xì)胞生長(zhǎng)因子相互協(xié)調(diào)，相互作用，共同完成造血功能。IL-2、IL-4、IL-6在調(diào)節(jié)機(jī)體免疫，刺激骨髓細(xì)胞增殖和分化等方面發(fā)揮不同作用。

IL-2是細(xì)胞免疫應(yīng)答所必需的細(xì)胞因子，參與調(diào)節(jié)機(jī)體抗腫瘤效應(yīng)和移植排斥反應(yīng)。IL-2能刺激活化T細(xì)胞和B細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化，刺激NK細(xì)胞產(chǎn)生和分泌大量、多樣的細(xì)胞因子，這些細(xì)胞在機(jī)體的免疫監(jiān)視方面至關(guān)重要，所以，IL-2是保障機(jī)體正常免疫調(diào)節(jié)功能的關(guān)鍵物質(zhì)［10-11］。IL-4能刺激胸腺細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞增殖，可促進(jìn)B細(xì)胞增殖、成熟及分化產(chǎn)生IgE，從而促進(jìn)體液免疫應(yīng)答，被認(rèn)為是介導(dǎo)體液免疫應(yīng)答的主要因子之一。IL-4還能刺激肥大細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和巨核細(xì)胞等造血細(xì)胞的生長(zhǎng)，并能協(xié)同紅細(xì)胞生成素（EPO）支持紅系祖細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育［12］。本實(shí)驗(yàn)中模型組小鼠血清中IL-2、IL-4濃度顯著下降，與文獻(xiàn)報(bào)道一致［13-14］，表明IL-2、IL-4參與環(huán)磷酰胺所致的免疫抑制過程。與模型組比較，給藥組的IL-2、IL-4含量明顯提高，提示黃芪皂苷在上調(diào)IL-2、IL-4方面具有較好的作用，對(duì)機(jī)體低下的細(xì)胞免疫具有一定的恢復(fù)作用。

IL-6是一種主要由免疫活性細(xì)胞分泌的多功能因子，不僅具有免疫調(diào)節(jié)及抗腫瘤作用，且能促進(jìn)細(xì)胞的增殖分化，加速血小板的再生，具有顯著的造血調(diào)控作用。有研究表明外周血IL-6的水平與造血功能成負(fù)相關(guān)，當(dāng)造血功能出現(xiàn)問題，機(jī)體代償性分泌IL-6以促進(jìn)造血［15-16］。因此血清IL-6的水平可以在一定程度上反映骨髓造血功能。本實(shí)驗(yàn)中模型組小鼠IL-6升高，推測(cè)是由于環(huán)磷酰胺引起的造血功能損傷。與模型組比較，給藥組IL-6含量明顯降低，說明黃芪皂苷具有降低IL-6含量的作用，表明黃芪皂苷可以保護(hù)化療導(dǎo)致的骨髓造血功能損傷，促進(jìn)造血功能的恢復(fù)，增強(qiáng)其對(duì)造血因子的調(diào)控。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典［S］.一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：283.

［2］孫舒玉，何小娟，羅丹，等.黃芪多糖對(duì)順鉑治療S180荷瘤鼠的增效減毒作用［J］.中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2013，19（9）：1031-1033.

［3］劉海曄，周潔.注射用黃芪多糖聯(lián)合化療減毒增效96例臨床觀察［J］.天津藥學(xué)，2007，19（2）：31-33.

［4］王聰，王一騰，魏鑫.環(huán)磷酰胺的臨床應(yīng)用現(xiàn)狀［J］.臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2008，7（8）：179-181.

［5］段萍，王再謨.黃芪在惡性腫瘤化療中的增效減毒作用的臨床研究［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2002，22（7）：515-517.

［6］周超，何軼，林瑞超，等.黃芪4種皂苷提取物的制備及其在黃芪總皂苷含量測(cè)定中的應(yīng)用［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（22）：56-59.

［7］萬春平.黃芪皂苷Ⅲ通過IFN-γ介導(dǎo)體外免疫調(diào)節(jié)作用的研究［J］.云南中醫(yī)中藥雜志，2011，32（9）：69-71.

［8］徐明，胡秀萍，朱虹，等.黃芪總提物的免疫調(diào)節(jié)作用［J］.中藥藥理與臨床，2005，21（3）：27-29.

［9］許杜娟，吳強(qiáng)，楊雁.黃芪總苷的抑瘤作用及其作用機(jī)制［J］.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2003，19（7）：823-826.

［10］Kim JW，F(xiàn)erris RL，Whiteside TL.Chemokine C receptor expression and protection of circulating CD8+T lymphocytes from apoptosis［J］.Clin Cancer Res，2005，11（21）：7901-7910.

［11］高允海.自擬健脾清瘀湯對(duì)術(shù)后腸功能障礙的治療作用研究［J］.吉林中醫(yī)藥，2007，27（5）：16-17.

［12］浦權(quán).實(shí)用血液病理學(xué)［M］.北京：科學(xué)出版社，2013：13-14.

［13］劉娟，初杰.不同提取方法的當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)化療貧血模型的藥效學(xué)研究［J］.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，13（8）：113-115.

［14］謝寧，袁曉霞，關(guān)慧波，等.補(bǔ)腎丹對(duì)環(huán)磷酰胺所致免疫低下小鼠血清IL-2，IL-4的調(diào)節(jié)作用［J］.吉林中醫(yī)藥，2012，32（3）：277-279.

［15］孫偉正，李志俠，王金環(huán).補(bǔ)髓生血顆粒對(duì)造血負(fù)調(diào)控因子IL-6和TGF-β1的影響［J］.中醫(yī)藥信息，2004，21（5）：25-27.

［16］王茜.補(bǔ)腎活血法與益氣補(bǔ)血法對(duì)骨髓抑制小鼠造血功能調(diào)控作用的比較［D］.北京：解放軍醫(yī)學(xué)院，2013：38-39.

Effect of astragaloside on interleukin-2,interleukin-4 and interleukin-6 in chem otherapy induced anem icm ice

LIANG Ke1MA Jin2QU Yi1ZHENG Bingyuan1QIAO Tie1
1.Department of Prescription,Liaoning University of Traditional Chinese Medicine,Liaoning Province,Shenyang 110847,China;2.The Second Hospital Affiliated to Liaoning University of Traditional Chinese Medicine,Liaoning Province,Shenyang 110034,China

Ob jective To observe the effect of astragaloside on interleukin-2(IL-2),interleukin-4(IL-4)and interleukin-6(IL-6)in chemotherapy induced anemic mice.M ethods 64 Kunmingmice which were 6-7 weeks old were picked as the research objects and random ly divided into four groups:normal group,model group,positive control group and treated group.Each group was 16 mice,halfmale and half female.Chemotherapy anemiamodelswere established by Cyclophosphamide.Normal group was fed without special treatment.Model group,positive control group and treated group were given 0.2 g/kg of Cyclophosphamide by intraperitoneal injection in 1,3,5 d,respectively.In 7 d,normal group and model group received 10 mL/kg of distilled water by intragastric administration;positive control group was fed 5 mL/kg of Huangqijing suspension;treated group was given 10 mL/kg of astragaloside solution.The mice were drawn blood from eyeball after 14 days treatment.The ELISA was used to test the concentrations of IL-2,IL-4 and IL-6 in mouse serum.Results Compared with the contents of IL-2［(911.5±157.6)ng/L］,IL-4［(711.4± 119.8)ng/L］and IL-6［(193.3±71.0)ng/L］of normal group,the concentrations of IL-2［(245.0±104.3)ng/L］, IL-4［(124.3±54.9)ng/L］inmodel group were significantly lower,and the concentration of IL-6［(1245.7± 254.5)ng/L］was evidently higher,the differenceswerestatistically significant(P＜0.05).Compared with model group,the contents of IL-2［(640.8±192.8)ng/L］,IL-4［(574.0±112.4)ng/L］were increased significantly,and the content of IL-6［(521.5±203.8)ng/L］in treated group was obviously decreased,with statistically significant differences(P＜0.05).Conclusion Astragaloside can increase the concentrations of IL-2 and IL-4,decrease the content of IL-6 in anemia modelmice induced by chemotherapy.The changes in the contents of IL-2,IL-4 and IL-6 are associated with immune disorders and hematopoietic depression caused by Cyclophosphamide-induced anemia.Astragaloside can improve mouse low immunity and myelosuppression induced by Cyclophosphamide.

Astragaloside;Chemotherapy-induced anemia;Interleukin-2;Interleukin-4;Interleukin-6

R285.5

A[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]1673-7210（2015）06（c）-0016-03

2015-03-01本文編輯：張瑜杰）

遼寧省科學(xué)技術(shù)計(jì)劃項(xiàng)目（博士啟動(dòng)基金計(jì)劃）（20111129）；遼寧省高等學(xué)校杰出青年學(xué)者成長(zhǎng)計(jì)劃項(xiàng)目（LJQ2014098）。

梁可（1986-），女，碩士，從事中藥復(fù)方配伍規(guī)律及其效應(yīng)機(jī)制研究。

喬鐵（1976-），男，醫(yī)學(xué)博士，副教授，主要從事方劑配伍規(guī)律研究。