王海華， 王海珍， 曾 瑾， 姜玉新， 王 靜， 周萍萍

（皖南醫(yī)學院生理教研室，安徽蕪湖241002）

水溶性蜂膠聯(lián)合阿司匹林對大鼠炎性痛作用

王海華， 王海珍， 曾 瑾， 姜玉新， 王 靜， 周萍萍

（皖南醫(yī)學院生理教研室，安徽蕪湖241002）

目的探討水溶性蜂膠聯(lián)合阿司匹林對大鼠炎性痛作用效應及其可能機制。方法將弗氏完全佐劑造模成功的36只炎性痛大鼠隨機均分成6組，炎性痛模型組 （模型組）和5個處理組 （水溶性蜂膠組，阿司匹林組，水溶性蜂膠+阿司匹林組，水溶性蜂膠+納洛酮組，水溶性蜂膠+N-硝基-L-精氨酸甲酯 （L-NAME）組。隨機選取6只大鼠為正常對照組 （對照組）。測定各組大鼠的熱痛閾潛伏期和機械痛閾值，血清中IL-6、TNF-α及NO的水平，致炎足關(guān)節(jié)滲出液中PLA2和PGE2的水平。結(jié)果與對照組相比，模型組大鼠第1天開始熱痛閾潛伏期和機械痛閾值明顯降低，熱痛覺和機械痛覺過敏持續(xù)14d。模型組大鼠血清中IL-6、TNF-α及NO和滲出液中PLA2和PGE2的水平明顯增高。與模型組相比，水溶性蜂膠組、阿司匹林組和水溶性蜂膠+阿司匹林組大鼠熱痛閾潛伏期和機械痛閾值均升高，血清中IL-6、TNF-α及NO和滲出液中PLA2和PGE2的水平明顯下降。與水溶性蜂膠組相比，水溶性蜂膠+阿司匹林組和水溶性蜂膠+非選擇性一氧化氮合酶抑制劑組升高大鼠熱痛閾潛伏期和機械痛閾值，而水溶性蜂+納洛酮組大鼠卻明顯降低，差異有顯著性 （P＜0.05，P＜0.01）。結(jié)論水溶性蜂膠聯(lián)合阿司匹林對炎性痛大鼠的抗炎鎮(zhèn)痛機制可能是抑制細胞因子及炎性介質(zhì)的產(chǎn)生而實現(xiàn)的，阿片受體途徑可能也發(fā)揮一定的作用。

水溶性蜂膠；阿司匹林；大鼠；炎性痛；鎮(zhèn)痛；IL-6；TNF-α；NO

疼痛是大多數(shù)疾病的重要癥狀，也是一切炎癥的主要癥狀，慢性炎性疼痛的治療是世界醫(yī)學難題之一，對患者的工作和生活影響較大，現(xiàn)有臨床各類抗炎藥雖有一定療效，但均因同時具有不同程度的副作用而限制了其對疼痛的有效治療；因此，深入探討炎性疼痛產(chǎn)生的機制，尋求更為有效的治療方法，就顯得尤其重要。

蜂膠（propolis）是蜜蜂采集植物幼芽中的樹脂并混入其上顎腺分泌物及蜂蠟等混合加工而成的，是自然界中珍貴稀有的能改變生命狀態(tài)的天然物質(zhì)，無毒副作用［1］，2005年就錄入 《中華人民共和國藥典》，有 “紫色黃金”的美譽［2］，蜂膠的化學成分復雜，類黃酮和萜烯類化合物是蜂膠的主要活性成分。蜂膠具有多種藥理作用，如抗炎鎮(zhèn)痛、增強免疫及心血管藥理作用等［3］，對蜂膠的抗炎鎮(zhèn)痛作用有諸多文獻報道［4-6］，在抗炎作用機制方面也取得了一定的進展，但對于蜂膠抗炎活性研究的藥物開發(fā)卻不盡人意，尤其是在蜂膠與抗炎藥物的相互作用研究較少，對于蜂膠與非甾體抗炎藥的相互作用尚未見報道［7-8］。本實驗通過注射完全弗氏佐劑到大鼠左側(cè)后肢足底皮下造成關(guān)節(jié)周圍組織的炎癥反應，復制炎性疼痛大鼠模型，通過水溶性蜂膠 （總黃酮量200 mg/kg）及水溶性蜂膠（總黃酮量 200 mg/kg）聯(lián)合阿司匹林 （100 mg/kg）對大鼠灌胃 （1次/日），連續(xù)14 d，采用熱痛法和機械壓痛法，測定各組大鼠熱痛閾潛伏期和機械壓痛閾值變化；通過腹腔注射受體拮抗劑干預，觀察對各組大鼠熱痛閾潛伏期和機械壓痛閾值的影響，檢測大鼠血清中IL-6、TNF-α及NO的水平，致炎足關(guān)節(jié)滲出液中PLA2和PGE2的水平，同時觀察大鼠致炎足及其肝臟的形態(tài)學變化，旨在探討水溶性蜂膠及其聯(lián)合阿司匹林對大鼠炎性痛的鎮(zhèn)痛效應及其可能機制，為蜂膠在醫(yī)藥上的開發(fā)和利用提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.2 主要儀器與試劑 PL-200熱刺痛儀（成都泰盟科技有限公司）；BW-YLS-3E電子壓痛儀、YLS-7B足跖容積測量儀 （上海軟隆科技發(fā)展有限公司）；UV-3200PCS紫外可見分光光度計 （上海美譜達儀器有限公司）；Model-680型酶標儀 （美國BIO-RAD公司）；Beckman Coulter微量臺式離心機（美國Beckman公司）。NO試劑盒（南京建成生物工程研究所）；PLA2、PGE2、TNF-α、IL-6試劑盒（合肥博美生物科技有限公司）；其余試劑均為分析純 （國藥集團化學試劑有限公司）。

1.3 實驗動物 清潔級雄性SD大鼠48只，體質(zhì)量 （200±20）g，由合肥蜀山實驗動物中心提供，實驗動物合格證號：SCXK（蘇）2009-0001，籠養(yǎng)3～4 d后進行行為學測試和實驗，12 h～12 h明暗周期，室溫20～22℃。動物適應性喂養(yǎng)一周。

1.4 試驗方法

1.4.1 實驗分組 雄性SD大鼠42只，隨機分為7組 （n=6）：正常對照組 （NC組）、炎性痛模型組（CFA組）、炎性痛+水溶性蜂膠組（CFA+ WSP組）、炎性痛+阿司匹林組（CFA+ASP組）、炎性痛+水溶性蜂膠+阿司匹林組（CFA+WSP+ ASP組）、炎性痛 +水溶性蜂膠 +納洛酮組（CFA+WSP+NAL組）和炎性痛+水溶性蜂膠+非選擇性一氧化氮合酶抑制劑組（CFA+WSP+LNAME組）。

1.4.2 慢性炎性疼痛模型的建立 炎性痛模型組（CFA組），消毒大鼠左側(cè)后肢，用1 mL注射器抽取150μL弗氏完全佐劑（Complete freund's adjuvant，CFA內(nèi)含0.1%滅活結(jié)核桿菌；Sigma），于左側(cè)后肢足底皮下注射，注射后按壓數(shù)分鐘，以促進藥物擴散。正常對照組 （NC組）足底皮下注射150μL生理鹽水，其余操作同炎性痛模型組。

1.4.3 水溶性蜂膠在炎性痛模型中的鎮(zhèn)痛作用

43支MDT團隊，從覆蓋的疾病種類數(shù)量上已十分可觀，如何推動這些團隊有效運行呢？“醫(yī)務部門的參與將MDT的管理運營正規(guī)化、有效化，多學科整合門診和特需門診應運而生?！睂O湛介紹道，“為了提高MDT特需門診的效率，我們設定了流程?！睂O湛說，首先由MDT負責人遞交書面申請，經(jīng)過醫(yī)務處和門診部審核批準，再由特需醫(yī)療部安排出診時間、地點及頻次。

測定各組大鼠基礎(chǔ)痛閾值，每日相同時間點分別給予炎性痛+水溶性蜂膠組、炎性痛+水溶性蜂膠+納洛酮組及炎性痛+水溶性蜂膠+非選擇性一氧化氮合酶抑制劑組大鼠灌胃WSP（蜂膠總黃酮量200 mg/kg），炎性痛+阿司匹林組 （大鼠灌胃1 mL阿司匹林（100 mg/kg），炎性痛+水溶性蜂膠+阿司匹林組大鼠灌胃WSP（蜂膠總黃酮量200 mg/kg）和阿司匹林水溶液（100 mg/kg）1 mL，NC組和炎性痛模型組大鼠灌胃等容積的生理鹽水，連續(xù)用藥14 d；大鼠于炎性痛模型第7天，每日相同時間點，腹腔注射（ip）納洛酮（4 mg/kg）為炎性痛+水溶性蜂膠+納洛酮組；腹腔注射 （ip）LNAME（100μg/kg）為炎性痛+水溶性蜂膠+非選擇性一氧化氮合酶抑制劑組，NC組和炎性痛模型組大鼠腹腔注射等體積的生理鹽水為對照，連續(xù)給藥7 d；其他操作同炎性痛+水溶性蜂膠組，給藥1.5 h后，分別用PL-200熱刺痛儀和BW-YLS-3E電子壓痛儀測定各組大鼠的熱痛閾潛伏期和機械痛閾值。

1.5 行為學測定

1.5.1 一般情況測定 觀察動物每天左后肢變化，如有無紅腫，注射部位有無滲液感染等，進食有無影響；觀察步態(tài)姿勢，有無舔咬現(xiàn)象及肢體癱瘓功能障礙，每日測定大鼠體質(zhì)量。

1.5.2 足跖容積測定 在每天相同時間點，用YLS-7B足跖容積測量儀分別測定正常對照組及炎性痛模型組大鼠的左側(cè)足跖的容積。

1.5.3 熱刺痛法 測試前讓大鼠在較黑暗的環(huán)境中適應約5min，待大鼠安靜后，移動熱輻射光源，使其通過透明玻璃板聚焦于大鼠左后趾足底部皮膚，觀察大鼠對熱傷害性刺激的反應。當大鼠出現(xiàn)抬足、舔腳反應時的時間為熱痛閾潛伏期 （Thermal withdrawal latency，TWL）。當時間達到30 s，而大鼠仍無反應時便停止照射，以免損傷皮膚，并以30 s作為最高痛閾。每日于給藥后30 min測定痛閾，測定時每組循環(huán)測定3次，兩次時間間隔大于5 min，取3次測定值的均數(shù)作為大鼠的熱痛閾潛伏期。

1.5.4 機械壓痛法 在室溫、安靜狀態(tài)下，將大鼠左側(cè)后肢足背部置于壓痛儀硅板上，腳踩踏板增加壓爪強度，當大鼠出現(xiàn)縮腿、掙扎、嘶叫時，踩下踏板，此時壓強為機械壓痛閾值（Mechanical withdrawal threshold，MWT）。當機械壓痛質(zhì)量達到250 g，而大鼠仍無反應時便停止壓爪，以免損傷皮膚，并以250 g作為最高痛閾。痛閾測定時每組循環(huán)測定3次，2次時間間隔大于5 min，取3次測定值的均數(shù)作為大鼠的機械壓痛閾值。

1.6 生化檢測及形態(tài)學觀察

1.6.1 大鼠血清中IL-6、TNF-α及NO水平的測定 于制備炎性痛模型第14天，大鼠頸總動脈取血3～5 mL，分離血清，測定其中IL-6、TNF-α及NO水平。

1.6.2 大鼠致炎足關(guān)節(jié)滲出液中PGE2和PLA2水平的測定 于制備炎性痛模型第14天，將大鼠處死，在致炎足踝關(guān)節(jié)上方0.5 cm處剪取后足腫脹足爪，縱向切開，放入5 m L生理鹽水的試管中，4℃浸泡過夜，以3 000 r/min離心10 min，取上清液，嚴格按照試劑盒說明書采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測其中PGE2和PLA2的量。

1.6.3 大鼠致炎足及肝臟的形態(tài)學觀察 留取各組大鼠致炎足及肝臟于10%福爾馬林溶液中浸泡，進行HE染色觀察其形態(tài)學變化。

1.7 數(shù)據(jù)處理及分析 分別以引起機械痛閾的質(zhì)量數(shù)值 （g）、熱痛閾的照射時間 （s）來表示機械痛閾和熱痛閾。采用SPSS 16.0軟件進行統(tǒng)計分析，實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差 （x±s）表示，多組均數(shù)比較用單因素方差分析（One way ANOVA），兩兩比較用S-N-K法，以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。采用Graph Pad Prism 5軟件作圖。

2 結(jié)果

2.1 足跖容積測定 炎性痛模型組大鼠左足跖皮下注射完全弗氏佐劑后開始腫脹，足跖容積與正常對照組相比顯著升高 （P＜0.01），直至造模后第14天足跖容積仍高于正常對照組 （P＜0.01）。結(jié)果表明炎性痛模型構(gòu)建成功。見圖1。

圖1 炎性痛模型組大鼠與正常組大鼠足跖容積變化（n=6，x±s）Fig.1 Paw volume change between CFA group and NC group（n=6，x±s）

2.2 各組大鼠機械痛閾值 與正常對照組相比，炎性痛模型組大鼠注射完全弗氏佐劑后第1天開始機械痛閾值明顯下降，持續(xù)14 d仍存在 （P＜0.01），提示炎性痛模型大鼠存在機械痛覺過敏；同炎性痛模型組相比，炎性痛+水溶性蜂膠組、炎性痛+阿司匹林組和炎性痛+水溶性蜂膠+阿司匹林組大鼠在灌胃給藥第2天后機械痛閾值出現(xiàn)增高，直到造模后第14天差異仍舊存在，差異有顯著性 （P＜0.05）（見圖2）。

圖2 各組大鼠機械痛閾值變化 （n=6，x±s）Fig.2 Change of MWT in different groups of rats（n=6，x±s）

如圖3所見，給各組大鼠腹腔注射用藥前，與正常對照組相比，炎性痛模型組、炎性痛+水溶性蜂膠組、炎性痛+水溶性蜂膠+納洛酮組和炎性痛+水溶性蜂膠+非選擇性一氧化氮合酶抑制劑組大鼠機械痛閾值明顯低于正常對照組 （P＜0.05），與炎性痛模型組相比，炎性痛+水溶性蜂膠組大鼠機械痛閾值明顯增高 （P＜0.01）；腹腔注射阿片受體阻斷劑納絡酮 （NAL）后，炎性痛+水溶性蜂膠+納洛酮組大鼠機械痛閾值增高程度被部分阻斷，同炎性痛+水溶性蜂膠組相比，差異有顯著性，表明腹腔注射阿片受體阻斷劑納絡酮能部分阻斷WSP對炎性痛大鼠的鎮(zhèn)痛作用；腹腔注射非選擇性一氧化氮合酶抑制劑L-NAME后，炎性痛+水溶性蜂膠+非選擇性一氧化氮合酶抑制劑組大鼠機械痛閾值明顯高于炎性痛+水溶性蜂膠組，具有統(tǒng)計學意義 （P＜0.01），表明腹腔注射非選擇性一氧化氮合酶抑制劑L-NAME后，通過減少炎性痛大鼠外周組織NO的生成，從而增強了WSP的抗炎鎮(zhèn)痛效應。見圖3。

2.3 各組大鼠熱痛閾值 與正常對照組相比，炎性痛模型組大鼠注射弗氏完全佐劑后第1天開始熱痛閾值明顯下降，持續(xù)14 d仍存在 （P＜0.01），提示炎性痛模型大鼠存在熱痛覺過敏；同炎性痛模型組相比，炎性痛+水溶性蜂膠組、炎性痛+阿司>匹林組和炎性痛+水溶性蜂膠+阿司匹林組大鼠在>灌胃給藥第2 天后熱痛閾值亦明顯增高， 直到造模>后第14 天差異仍舊存在， 有顯著性差異（P＜0.05） （見圖4）。

圖3 不同阻斷劑對水溶性蜂膠在炎性痛模型中的機械痛閾值的影響 （n=6，x±s）Fig.3 Effect of b lockers of w ater-soluble propolis on MWT in groups（n=6，x±s）

圖4 各組大鼠熱痛閾值變化 （n=6，x±s）Fig.4 Change of TW L in different groups of rats（n= 6，x±s）

給各組大鼠腹腔注射用藥前，與正常對照組相比，炎性痛模型組、炎性痛+水溶性蜂組、炎性痛+水溶性蜂膠+納洛酮組和炎性痛+水溶性蜂膠+非選擇性一氧化氮合酶抑制劑組大鼠熱痛閾值明顯低于正常對照組 （P＜0.05），與炎性痛模型組相比，炎性痛+水溶性蜂膠組大鼠熱痛閾值明顯明顯增高 （P＜0.01）；腹腔注射阿片受體阻斷劑納絡酮（NAL）后，炎性痛+水溶性蜂膠+納洛酮組大鼠熱痛閾值增高程度被部分阻斷，同炎性痛+水溶性蜂膠組相比，差異有顯著性，表明腹腔注射阿片受體阻斷劑納絡酮能部分阻斷WSP對炎性痛大鼠的鎮(zhèn)痛作用；腹腔注射非選擇性一氧化氮合酶抑制劑L-NAME后，炎性痛+水溶性蜂膠+非選擇性一氧化氮合酶抑制劑組大鼠熱痛閾值明顯高于炎性痛+水溶性蜂膠組，具有統(tǒng)計學意義 （P＜0.01），表明腹腔注射非選擇性一氧化氮合酶抑制劑LNAME后，通過減少炎性痛大鼠外周組織NO的生成，從而增強了WSP的抗炎鎮(zhèn)痛效應。見圖5。

圖5 不同阻斷劑對水溶性蜂膠在炎性痛模型中的熱痛閾值的影響 （n=6，x±s）Fig.5 Effect of b lockers of w ater-soluble propolis on TW L in groups（n=6，x±s）

2.4 水溶性蜂膠聯(lián)合阿司匹林對炎性痛大鼠血清中IL-6、TNF-α及NO水平的影響 與正常對照組相比，炎性痛模型組大鼠血清中IL-6、TNF-α及NO水平明顯增高 （P＜0.01）；同炎性痛模型組相比，炎性痛+水溶性蜂膠組，炎性痛+阿司匹林組和炎性痛+水溶性蜂膠+阿司匹林組大鼠血清中IL-6、TNF-α及NO水平均顯著降低（P＜0.05）；同炎性痛+水溶性蜂膠組和炎性痛+阿司匹林組相比，炎性痛+水溶性蜂膠+阿司匹林組大鼠血清中IL-6、TNF-α及NO水平也有明顯降低（P＜0.05），說明WSP通過抑制炎性痛大鼠外周組織炎性因子的釋放而發(fā)揮鎮(zhèn)痛效應，與阿司匹林 （ASP）聯(lián)合使用其作用增強，具有協(xié)同效應 （見表1）。

表1 水溶性蜂膠聯(lián)合阿司匹林對炎性痛大鼠血清中促炎性因子IL-6、TNF-α和NO水平的影響（n=6，x±s）Tab.1 E ffects of water-soluble propolis in combination w ith aspirin on the contents of IL-6，TNF-αand NO in serum of inflammatory pain in rats（n=6，x±s）

2.5 水溶性蜂膠聯(lián)合阿司匹林對大鼠致炎足關(guān)節(jié)滲出液中PLA2和PGE2水平的影響 與正常對照組相比，炎性痛模型組大鼠致炎足關(guān)節(jié)滲出液中PLA2和PGE2水平明顯增高 （P＜0.01）；同炎性痛模型組相比，炎性痛+水溶性蜂膠組、炎性痛+阿司匹林組和炎性痛+水溶性蜂膠+阿司匹林組大鼠患足關(guān)節(jié)滲出液中PLA2和PGE2水平均降低（P＜0.05）；同炎性痛+水溶性蜂膠組和炎性痛+阿司匹林組相比，炎性痛+水溶性蜂膠+阿司匹林組大鼠致炎足關(guān)節(jié)滲出液中PLA2和PGE2含量明顯降低 （P＜0.05）。結(jié)果表明WSP具有抑制炎性痛大鼠炎性部位PLA2和PGE2的釋放而發(fā)揮鎮(zhèn)痛效應，與阿司匹林 （ASP）聯(lián)合使用其作用增強，具有協(xié)同效應 （見表2）。

表2 水溶性蜂膠聯(lián)合阿司匹林對炎性痛大鼠致炎足關(guān)節(jié)滲出液中PLA2和PGE2水平的影響 （n=6，x±s）Tab.2 Effects of water-soluble p ropolis in combination w ith aspirin on the contents of PLA2and PGE2in induced inflammatory foot joint exudate of inflamm atory pain in rats（n=6，x±s）

2.6 HE染色

2.6.1 大鼠足跖部病理變化的組間比較 正常對照組大鼠左側(cè)足皮下組織結(jié)構(gòu)清晰整齊，無炎性細胞浸潤；炎性痛模型組大鼠致炎足皮下結(jié)締組織排列紊亂，大量炎癥細胞浸潤，水腫明顯；炎性痛+水溶性蜂膠組和炎性痛+阿司匹林組大鼠致炎足皮下組織輕微水腫，炎性細胞浸潤減少；炎性痛+水溶性蜂膠+阿司匹林組大鼠致炎足皮下組織排列整齊，無明顯水腫，炎性細胞浸潤減少 （見圖6）。

2.6.2 各組大鼠肝臟病理變化 正常對照組大鼠肝細胞為多邊形，界限較清楚，細胞體積較大，核仁清楚，肝血竇內(nèi)可見散在巨噬細胞；炎性痛模型組大鼠肝細胞水腫，肝血竇內(nèi)大量炎性細胞浸潤；炎性痛+水溶性蜂膠組和炎性痛+阿司匹林組大鼠肝血竇內(nèi)一定量炎性細胞浸潤；炎性痛+水溶性蜂膠+阿司匹林組大鼠肝血竇內(nèi)少量炎性細胞浸潤（見圖7）。

3 討論

炎癥是機體在有害刺激作用下，多種因素導致局部組織細胞損傷的病理過程，也是機體對抗損傷的防御性保護反應。在致炎因素刺激下，細胞膜磷脂酶A2（PLA2）被激活，水解膜磷脂的酯鍵，釋放出花生四烯酸，經(jīng)環(huán)氧合酶作用產(chǎn)生前列腺素，前列腺素E2（PGE2）是其中主要組分，PGE2具有強烈的擴血管作用，從而引起炎癥部位組織水腫，炎性滲出，同時還具有致敏痛覺神經(jīng)末梢，造成痛覺過敏；多種炎癥介質(zhì)和細胞因子調(diào)控炎癥反應過程，其中一氧化氮 （NO）在炎癥反應的許多環(huán)節(jié)中發(fā)揮復雜的調(diào)節(jié)作用［10］，如在細胞間信息傳遞過程中起信使作用，促炎作用包括舒血管作用，引起炎癥部位組織水腫，增加炎性滲出等；TNF-α是一具有重要生物學功能的細胞因子［11］，能激活血管內(nèi)皮功能，增加白細胞黏附，激活凝血系統(tǒng)，抑制纖溶，激活單核-巨噬細胞釋放IL-6和PGE2等炎癥介質(zhì)等多途徑發(fā)揮其致炎作用。

圖6 各組大鼠足跖部HE染色鏡下圖片（HE×400）Fig.6 M icroscope images of rats paw HE staining in groups（HE×400）

圖7 各組大鼠肝臟HE染色鏡下圖片（HE×400）Fig.7 M icroscope images of rat liver HE staining in groups（HE×400）

疼痛是炎癥的主要癥狀，國際上已經(jīng)將疼痛列為第五生命體征。疼痛的評定主要有痛閾的測定、疼痛的主體評測和客體評測等［12］。慢性炎性疼痛對患者的工作和生活影響較大，現(xiàn)有臨床各類抗炎藥雖有一定療效，但均因同時具有不同程度的副作用而限制了其對疼痛的有效治療，深入探討炎性疼痛產(chǎn)生的機制，尋求更為有效的治療方法亟待解決。

阿司匹林 （ASP）又稱乙酰水楊酸，屬于非甾體抗炎藥，其通過抑制環(huán)氧合酶的活性，使前列腺素等炎癥介質(zhì)生成減少，從而實現(xiàn)其抗炎鎮(zhèn)痛作用，由于其本身具有酸性，造成胃腸道的不良反應，限制了其在臨床上的廣泛應用。蜂膠有 “紫色黃金”的美譽［2］，具有多種藥理作用，如抗炎鎮(zhèn)痛和心血管藥理作用等，對蜂膠的抗炎鎮(zhèn)痛作用有諸多報道，對其抗炎機制研究也取得了一定的進展，但對于蜂膠抗炎活性研究的藥物開發(fā)卻不盡人意，尤其是在蜂膠與抗炎藥物的相互作用研究較少［13-14］，對于蜂膠與非甾體抗炎藥的相互作用尚未見報道。

本實驗通過建立炎性痛致炎性疼痛大鼠模型，通過蜂膠總黃酮 （200 mg/kg）及蜂膠總黃酮（200 mg/kg）聯(lián)合阿司匹林 （100 mg/kg）［7］對大鼠灌胃 （1次/d），連續(xù)14 d，采用熱痛法和機械壓痛法，測定各組大鼠熱痛閾潛伏期和機械壓痛閾值變化；實驗結(jié)果顯示，與正常對照組相比，炎性痛模型組大鼠注射弗氏完全佐劑后第1天開始MWT和TWL均明顯下降，持續(xù)14 d仍存在，提示炎性痛模型大鼠存在機械痛覺和熱痛覺過敏，血清中IL-6、TNF-α及NO水平明顯增高，患足關(guān)節(jié)滲出液中PLA2和PGE2水平明顯增高；同炎性痛模型組相比，炎性痛+水溶性蜂膠組、炎性痛+阿司匹林組和炎性痛+水溶性蜂膠+阿司匹林組大鼠在灌胃給藥第2天后MWT和TWL均出現(xiàn)增高，直到造模后第14天差異仍舊存在，血清中IL-6、TNF-α及NO水平明顯降低，大鼠患足關(guān)節(jié)滲出液中PLA2和PGE2水平明顯降低，差異有顯著性；大鼠足跖部和肝臟形態(tài)學檢測顯示，同炎性痛模型組相比，炎性痛+水溶性蜂膠組、炎性痛+阿司匹林組和炎性痛+水溶性蜂膠+阿司匹林組大鼠足跖部皮下組織炎性細胞浸潤明顯減少，水腫減輕；大鼠肝血竇內(nèi)炎性細胞浸潤明顯減少，肝細胞水腫明顯減輕。給各組大鼠腹腔注射用藥前，與正常對照組相比，炎性痛模型組、炎性痛+水溶性蜂膠組、炎性痛+水溶性蜂膠+納洛酮組和炎性痛+水溶性蜂膠+非選擇性一氧化氮合酶抑制劑組大鼠MWT和TWL均明顯低于正常對照組，與炎性痛模型組相比，炎性痛+水溶性蜂膠組大鼠MWT和TWL均明顯增高；腹腔注射阿片受體阻斷劑納絡酮（NAL）后，炎性痛+水溶性蜂膠+納洛酮組大鼠MWT和TWL增高程度均被部分阻斷，同炎性痛+水溶性蜂膠組相比，差異有顯著性，表明腹腔注射阿片受體阻斷劑納絡酮能部分阻斷WSP對炎性痛大鼠的鎮(zhèn)痛作用；腹腔注射非選擇性一氧化氮合酶抑制劑后，炎性痛+水溶性蜂膠+非選擇性一氧化氮合酶抑制劑組大鼠MWT和TWL均明顯高于炎性痛+水溶性蜂膠組，具有統(tǒng)計學意義 （P＜0.05，P＜0.01），表明腹腔注射非選擇性一氧化氮合酶抑制劑L-NAME后，通過減少炎性痛大鼠外周組織NO的生成，從而增強了WSP的抗炎鎮(zhèn)痛效應。

總而言之，實驗結(jié)果同樣證實WSP對炎性痛大鼠有明顯的抗炎鎮(zhèn)痛作用，聯(lián)合阿司匹林后，其抗炎鎮(zhèn)痛作用明顯增強，其機制可能是抑制細胞因子及炎性介質(zhì)的產(chǎn)生，降低炎癥部位組織PLA2和PGE2的產(chǎn)生而實現(xiàn)的，阿片受體途徑可能也發(fā)揮一定的作用。

［1］蔣春紅，呂武清，胡棠洪.蜂膠的藥理作用研究概況［J］.中國醫(yī)藥指南，2011，9（17）：42-43.

［2］姚樹桐，桑 慧，商戰(zhàn)平，等.蜂膠水提液對腸缺血再灌注大鼠肺損傷及NF-κB/ICAM-1表達的影響［J］.營養(yǎng)學報，2011，33（1）：75-79.

［3］王秀清，申樹芳，張英鋒，等.蜂膠的有效成分與功效［J］.渤海大學學報：自然科學版，2010，31（3）：219-224.

［4］胡福良，李英華，陳民利，等.蜂膠醇提液和水提液對急性炎癥動物模型的作用［J］.浙江大學學報：農(nóng)業(yè)與生命科學版，2003，29（4）：444-448.

［5］胡福良，李英華，朱 威，等.蜂膠醇提液對大鼠急性胸膜炎的作用及其機制的研究［J］.營養(yǎng)學報，2007，29（2）：189-191.

［6］胡福良，李英華，朱 威，等.蜂膠對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎的作用及其機制的研究［J］.中國藥學雜志，2005，40（15）：1146-1148.

［7］Castaldo S，Capasso F.Propolis，an old remedy used inmodern medicine［J］.Fitoterapia，2002，73（suppl1）：S1-6.

［8］李英華，朱 威，胡福良.蜂膠的抗炎作用及其機制研究進展［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2012，24（6）：856-859.

［9］韓淑燕，李海霞，屠鵬飛.三七總皂苷和紅花總黃酮配伍對急性血瘀大鼠血液流變學的改善作用［J］.中國藥理學與毒理學雜志，2011，25（1）：62-67.

［10］Cirino G，Distrutti E，Wallace JL.Nitric oxide and inflammation［J］.Inflamm Allergy Drug Targets，2006，5（2）：115-119.

［11］Junger H，Sorkin L S.Nociceptive and inflammatory effects of subcutaneous TNFalpha［J］.Pain，2000，85（1-2）：145-151.

［12］Merboth M K，Barnason S.Managing pain：the fifth vital sign［J］.Nurs Clin North Am，2000，35（2）：375-383.

［13］Oksuz H，Duran N，Tamer C，et al.Effect of propolis in the treatment of experimental Staphylococcus aureus keratitis in rabbits［J］.Ophthalmic Res，2005，37（6）：328-334.

［14］Duran N，Koc A，Oksuz H.et al.The protective role of topical propolis on experimental keratitis via nitric oxide levels in rabbits［J］.Mol Cell Biochem，2006，281（1-2）：153-161.

Effects of water soluble propolis combined with aspirin on inflammatory pain and itsmechanisms in rats

WANG Hai-hua， WANG Hai-zhen， ZENG Jin， JIANG Yu-xin， WANG Jing， ZHOU Ping-ping
（Departmentof Physiology，Wannan Medical College，Wuhu 241002，China）

AIMTo explore the effects of water soluble propolis（WSP）in combination with aspirin on inflammatory pain and its possiblemechanisms in rats.METHODSThirty-sixmale ratswith the inflammatory pain successfully induced by feeding freund's adjuvant（CFA）were randomly and equally divided into six groups，including inflammatory pain model group（CFA group）；CFA+WSP group；CFA+aspirin group；CFA+WSP+aspirin group；CFA+WSP+Naloxone group（NAL group）；CFA+WSP+L-NAME group，six rats were served as the normal control group（NC group）.Each group of ratswasmeasured for the thermalwithdrawal latency（TWL）and mechanical withdrawal threshold（MWT）.The expressions of IL-6，TNF-αand NO in serum，and PLA2and PGE2in induced inflammatory foot joint effusion of rats were detected.RESULTSThe TWL and MWT of rats in the CFA group were significantly lower than those of the NC group from the first day，their thermal and mechanical hyperalgia continued for fourteen days；The expressions of IL-6，TNF-αand NO in serum，and PLA2and PGE2in induced inflammatory foot joint effusion of rats significantly increased in the CFA group.The TWL and MWT of CFA+WSP，CFA+aspirin and CFA+WSP+aspirin groupswere significantly higher than those of the CFA group，while the positive expression levels of IL-6，TNF-αand NO in serum，and PLA2and PGE2in induced inflammatory foot joint effusion were significantly lower than those of the CFA group.The TWL and MWT of CFA+WSP+aspirin and CFA+WSP+L-NAME groups were higher than those of the CFA+WSP group，while the TWL and MWT of CFA+WSP+NAL group were lower than those of the CFA+WSP group，the differenceswere significant（P＜0.05 or P＜0.01）.CONCLUSIONA good anti-inflammatory and analgesic effectofWSP combined with aspirin may be related to the inhibition of the production of cytokinesand inflammatorymediators.Opioid receptormay also play a key role.

water soluble propolis（WSP）；aspirin；rat；inflammation pain；analgesic；IL-6；TNF-α；NO

R285.5

：A

：1001-1528（2015）06-1157-08

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.06.002

2014-12-11

安徽省高校省級科學研究重點項目 （KJ2013A251）；安徽省2012年省級教學研究重點項目 （2012jyxm313）；國家自然科學基金資助項目（81172790）；皖南醫(yī)學院重點科研項目培育基金 （WK2012Z01）

王海華 （1967—），男，碩士，副教授，碩士生導師，研究方向為心血管病理生理。Tel：13675536187，E-mail：wanghaihua9972@sina.com