霍慧靈， 李漢成， 任孟月， 馬欽海， 譚曉梅，2， 羅佳波，2*

（1.南方醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，廣東廣州510515；2.南方醫(yī)科大學(xué)廣東省中藥制劑重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州510515）

石膏用量對(duì)麻黃入血生物堿類的影響

霍慧靈1， 李漢成1， 任孟月1， 馬欽海1， 譚曉梅1，2， 羅佳波1，2*

（1.南方醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，廣東廣州510515；2.南方醫(yī)科大學(xué)廣東省中藥制劑重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州510515）

目的采用UPLC-MS/MS探討不同用量石膏配伍麻黃對(duì)麻黃中移行入血生物堿類成分藥動(dòng)學(xué)的影響。方法將24只大鼠隨機(jī)分成4組，各組分別灌胃麻黃-石膏不同配比 （1∶0，1∶1，1∶2，1∶4）水煎液后，于不同時(shí)間點(diǎn)采血，所得血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)經(jīng)DAS 3.2.2得出相關(guān)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。結(jié)果4組的藥時(shí)曲線下面積 （AUC0-t）、達(dá)峰時(shí)間（tmax）有顯著差異。與單味麻黃組相比，麻黃-石膏1∶1與1∶2組去甲基麻黃堿、去甲基偽麻黃堿和麻黃堿AUC0-t減少，麻黃-石膏1∶2與1∶4組此三成分tmax均縮短，但對(duì)于偽麻黃堿和甲基麻黃堿差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在麻黃-石膏合用組中，隨著石膏用量的加大，5種麻黃類生物堿的藥動(dòng)學(xué)變化整體表現(xiàn)為t1/2z、MRT、Vz/F逐漸增加，tmax、CLz/F逐漸減少。結(jié)論石膏用量的改變可對(duì)麻黃中效毒成分的藥動(dòng)學(xué)行為產(chǎn)生規(guī)律性的影響，與傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中麻黃石膏配比用藥的臨床經(jīng)驗(yàn)相吻合。

麻黃；石膏；生物堿；劑量配比；藥動(dòng)學(xué)

目前，通過(guò)定量分析配伍后化學(xué)成分在機(jī)體內(nèi)的變化規(guī)律，從其生物藥劑學(xué)特征探索藥效發(fā)揮的物質(zhì)基礎(chǔ)，已成為中醫(yī)配伍理論研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)。但是中藥成分復(fù)雜，一方一藥往往難以得出規(guī)律性的認(rèn)識(shí)，而藥對(duì)雖組成簡(jiǎn)單卻代表著系列衍生方的核心特征，其中蘊(yùn)含著豐富的客觀規(guī)律［1-2］。

麻黃-石膏作為中醫(yī)常用藥對(duì)，當(dāng)兩藥用量比例不同時(shí)，君臣不一，功效迥異，適應(yīng)證有所差異：①麻黃量大于石膏，如大青龍湯，重在發(fā)散郁熱，治療寒邪束表、汗不得出、熱不得越而形成的里有郁熱之證；②麻黃用量小于石膏，如麻杏石甘湯，主清瀉肺熱；③麻黃石膏用量相等，如越婢湯，則為發(fā)越水氣［3-4］。麻黃-石膏功效的改變是否與體內(nèi)效毒成分的動(dòng)態(tài)變化相吻合？不同劑量比例存在的變化規(guī)律是否與增效減毒的配伍內(nèi)涵相關(guān)？為此，本研究借助UPLC-MS/MS手段，比較臨床常用的麻黃-石膏劑量配比 （1∶0、1∶1、1∶2、1∶4）對(duì)自麻黃移行入血特征成分去甲基麻黃堿、去甲基偽麻黃堿、麻黃堿、偽麻黃堿和甲基麻黃堿藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的影響，從藥動(dòng)學(xué)角度闡釋麻黃-石膏劑量配比的合理性，以期為該藥對(duì)的傳統(tǒng)配伍理論提供現(xiàn)代科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 UPLC-MS/MS系統(tǒng)（Agi1ent 1290 Infinity-G6410，美國(guó)安捷倫公司）；統(tǒng)計(jì)軟件DAS 3.2.2；1/10萬(wàn)天平（美國(guó)DENVER公司）；渦旋振蕩混合器 （上海滬西分析儀器廠）；HC-3018R高速冷凍離心機(jī) （安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 藥品 麻黃為麻黃科植物草麻黃Ephedra sinica Stapf的干燥草質(zhì)莖 （產(chǎn)地吉林，20101002），石膏為硫酸鹽類石膏族礦物Gypsum（產(chǎn)地湖北，20110712），藥材均購(gòu)自廣東致信中藥飲片有限公司，經(jīng)南方醫(yī)科大學(xué)中藥鑒定教研室馬驥教授鑒定為正品?；瘜W(xué)對(duì)照品鹽酸麻黃堿（ephedrine hydroch1oride，171241-201007）、鹽酸偽麻黃堿（pseudoephedrine hydroch1oride，171237-200807）、鹽酸甲基麻黃堿（methy1ephedrine hydroch1oride，171247-200301）和鹽酸金剛烷胺 （內(nèi)標(biāo)，100426-201002）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；鹽酸去甲基麻黃堿（norephedrine hydroch1oride，純度≥98%）和鹽酸去甲基偽麻黃堿（norpseudoephedrine hydroch1oride，純度≥98%）為市售。

1.3 試劑 乙腈 （色譜純，Merck公司）；甲酸（分析純，Tedia公司），乙醚、二氯甲烷均為市售分析純。

1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)雄性SD大鼠24只，體質(zhì)量 （220±20）g，購(gòu)于南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)SCXK（粵）2011-0015。

2 方法

2.1 檢測(cè)條件

2.1.1 色譜條件 色譜柱Agi1ent Zorbax SB-C18（3.5μm，2.1 mm×100 mm）；柱溫25℃；體積流量0.4 mL/min；流動(dòng)相為乙腈（A）-0.1%甲酸水（B），梯度洗脫 （0～3 min，3%A；3～5 min，3%～4%A；5～7 min，4%A；7～7.5 min，4%～18%A；7.5～9 min，18%A；9～9.1 min，18% A→3%A；9.1～14.5 min，3%A）。

2.1.2 質(zhì)譜條件 采用電噴霧離子源；噴霧電壓4 000 V；毛細(xì)管溫度350℃；氣體體積流量8.0 L/min；正離子方式檢測(cè)；掃描方式為MRM模式，用于定量分析的監(jiān)測(cè)離子去甲基麻黃堿/去甲基偽麻黃堿m/z 152.1＞134.1（Fragmentor=75，Co11ision Energy=8）、麻黃堿/偽麻黃堿m/z 166.1＞148.1（88，12）、甲基麻黃堿m/z 180.2＞162.1（110，12）和內(nèi)標(biāo)m/z152.2＞135.1（95，20）。

2.2 混合對(duì)照溶液的制備 分別取去甲基麻黃堿（NME）、去甲基偽麻黃堿 （NMP）、麻黃堿 （E）、偽麻黃堿 （PE）和甲基麻黃堿 （ME）對(duì)照品適量，用甲醇溶解并定容，制成質(zhì)量濃度分別為212.40、219.90、2 441.0、1 022.4、407.1μg/mL的對(duì)照品貯備液。精密量取各對(duì)照品貯備液適量，用甲醇稀釋成分別含去甲基麻黃堿21.240、去甲基偽麻黃堿21.990、麻黃堿244.10、偽麻黃堿102.24和甲基麻黃堿40.710μg/mL的混合對(duì)照品，依次逐級(jí)稀釋得系列溶液，于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3 灌胃用藥液的制備 結(jié)合前期藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)［5］的煎煮方法與用藥劑量，依不同比例 （1∶0、1∶1、1∶2、1∶4）分別稱取麻黃36 g、石膏 （0、36、72、144 g），加1 680mL蒸餾水，先加入麻黃浸泡30 min，煮20 min，放入石膏繼續(xù)煎煮30 min，保持微沸，四層紗布過(guò)濾，濾液減壓回收溶劑，殘?jiān)眠m量水溶解，制成相當(dāng)于麻黃藥材質(zhì)量濃度為0.5 g/mL的藥液，于4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

采用HPLC［5］測(cè)得單味麻黃水煎液中去甲基麻黃堿、去甲基偽麻黃堿、麻黃堿、偽麻黃堿和甲基麻黃堿的含有量 （以每1 g麻黃生藥量計(jì)）依次為0.172 0、0.289 2、5.144、1.942、0.393 6 mg/g（n=6）；麻黃-石膏1∶1中對(duì)應(yīng)5種成分的含有量為0.172 3、0.289 9、5.152、1.949、0.395 8 mg/g（n=6）；麻黃-石膏1∶2為0.172 4、0.290 4、5.158、1.951、0.397 2 mg/g（n=6）；麻黃-石膏1∶4為 0.172 6、0.290 3、5.162、1.951和0.397 4 mg/g（n=6）。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，各成分在4組間均無(wú)顯著差異 （P＞0.05），即本研究中石膏劑量的變化不影響麻黃生物堿類成分的體外溶出。

2.4 給藥與血樣采集 將大鼠隨機(jī)分成4組 （單味麻黃、麻-石1∶1、麻-石1∶2、麻-石1∶4，n= 6），給藥前禁食12 h，自由飲水，眼眶靜脈叢采血0.5 mL作為零時(shí)間點(diǎn)。按4 g/kg（以麻黃生藥量計(jì)）分別灌胃給予藥液，于給藥后0.08、0.25、0.5、1、1.5、2.5、4、6、8、10、12、24、36和48 h眼眶靜脈取血，置預(yù)先肝素化的 EP管中，4 000 r/min離心10 min，分離血漿，-80℃保存待測(cè)。

2.5 血樣預(yù)處理 取上述血漿100μL，加入2.264μg/mL內(nèi)標(biāo)溶液40μL，再加入甲醇50μL、飽和Na2CO3溶液40μL，渦旋混勻30 s，加乙醚-二氯甲烷（3∶2，V/V）1.2 mL，渦旋2 min后4 000 r/min離心10 min，分取上清液。加乙醚-二氯甲烷（3∶2，V/V）1.2 mL重復(fù)萃取1次，合并上清液，以N2流吹干，殘留物用乙腈-0.1%甲酸水 （3∶97）渦旋復(fù)溶，14 000 r/min離心10 min，取上清液10μL進(jìn)樣分析。

2.6 方法學(xué)考察

2.6.1 專屬性 在建立的分析方法下，去甲基麻黃堿、去甲基偽麻黃堿、麻黃堿、偽麻黃堿、甲基麻黃堿和內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間分別為3.1、3.6、4.9、5.5、6.1、8.8 min，達(dá)到基線分離，血漿中物質(zhì)不干擾5種生物堿與內(nèi)標(biāo)的測(cè)定，見(jiàn)圖1。

圖1 血漿樣品LC-MS圖Fig.1 Typical LC-MS chromatogram s of five alkaloids in rat p lasma

2.6.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線與定量下限 取空白血漿100μL，加入系列對(duì)照品混合溶液50μL，除不加甲醇外，按 “2.5”項(xiàng)操作，每一質(zhì)量濃度雙樣本分析，以待測(cè)物與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值為縱坐標(biāo)，樣品中待測(cè)物質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，用加權(quán)最小二乘法進(jìn)行回歸分析，求得標(biāo)準(zhǔn)曲線去甲基麻黃堿y=0.001 406x+ 0.000 513 4（r2=0.997 5）、去甲基偽麻黃堿y= 0.001 664x+0.000 587 2（r2=0.999 0）、麻黃堿y=0.001 165x+0.006 688（r2=0.991 9）、偽麻黃堿y=0.001 469x+0.001 815（r2=0.997 1）和甲基麻黃堿y=0.000 957 1x+0.000 175 8（r2= 0.996 7），分別在0.53～1 062、0.55～1 099.5、6.10～12 205、2.56～5 112、和1.02～2 035.5 ng/mL線性關(guān)系良好，最低定量為0.53、0.55、6.10、2.56和1.02 ng/mL。

2.6.3 精密度與準(zhǔn)確度 按上述方法制備線性范圍內(nèi)5種生物堿低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度的質(zhì)量控制樣品 （QC）（去甲基麻黃堿1.06、53.10、531.0 ng/mL；去甲基偽麻黃堿1.10、54.98、549.8 ng/mL；麻黃堿12.21、610.25、6 102.5ng/mL；偽麻黃堿5.11、255.60、2 556.0 ng/mL和甲基麻黃堿2.04、101.78、1 017.8 ng/m L），每一質(zhì)量濃度5樣本分析，連續(xù)測(cè)定3 d，根據(jù)當(dāng)日的隨行標(biāo)曲算得QC樣品質(zhì)量濃度，與配制質(zhì)量濃度比較，計(jì)算日內(nèi)、日間精密度 （RSD）和準(zhǔn)確度（RE）。結(jié)果，日內(nèi)RSD＜9.9% （低質(zhì)量濃度＜18.2%）、日間 RSD＜3.6% （低質(zhì)量濃度 ＜16.7%）、RE均在 ±9.7% （低質(zhì)量濃度 ± 16.3%）之間。

2.6.4 提取回收率和基質(zhì)效應(yīng) 按 “2.6.3”項(xiàng)制備低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度的血漿樣品各5份（溶液A）。另取空白血漿100μL，除不加系列溶液和內(nèi)標(biāo)外，按 “2.5”項(xiàng)操作，向得到的上清液中加入相應(yīng)質(zhì)量濃度的溶液50μL和內(nèi)標(biāo)40μL，渦旋混合，N2流吹干，殘留物復(fù)溶 （溶液B）。另取純水100μL，按 “溶液B”法操作得溶液C，以每一質(zhì)量濃度兩種處理方法的峰面積比值計(jì)算提取回收率 （A/B）與基質(zhì)效應(yīng) （B/C），結(jié)果見(jiàn)表1，符合相關(guān)的體內(nèi)分析要求。

2.6.5 穩(wěn)定性考察 按 “2.6.3”項(xiàng)制備低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度的血漿樣品各5份，考察樣品處理后室溫放置12 h，處理前3次凍融循環(huán)和-80℃保存15 d的穩(wěn)定性。結(jié)果表明，處理后室溫放置12 h后血漿濃度的RE在±10.5% （低質(zhì)量濃度±15.2%）內(nèi)，處理前3次凍融循環(huán)后 RE在±11.5% （低質(zhì)量濃度±16.0%）內(nèi)，-80℃保存15 d后RE在±13.0% （低質(zhì)量濃度± 16.0%）內(nèi)，其RSD＜10.9% （低質(zhì)量濃度＜16.7%），穩(wěn)定性良好。

表1 去甲基麻黃堿、去甲基偽麻黃堿、麻黃堿、偽麻黃堿、甲基麻黃堿和內(nèi)標(biāo)的提取回收率與基質(zhì)效應(yīng)（n=5）Tab.1 Recoveries and m atrix effects of five alkaloids and IS.（n=5）

3 結(jié)果

3.1 藥動(dòng)學(xué)參數(shù) 大鼠灌胃單味麻黃、麻黃-石膏1∶1、麻黃-石膏1∶2、麻黃-石膏1∶4水煎液后，5種麻黃類生物堿 （去甲基麻黃堿、去甲基偽麻黃堿、麻黃堿、偽麻黃堿、甲基麻黃堿）的藥-時(shí)曲線如圖2。經(jīng)DAS 3.2.2處理，得主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，見(jiàn)表2。

圖2 大鼠分別灌胃麻黃-石膏不同配比水煎液 （1∶0；1∶1；1∶2；1∶4）后平均血藥濃度-時(shí)間曲線（，n=6）Fig.2 M ean p lasm a concentration-tim e profiles for five alkaloids in rat p lasma after oral adm inistration of different doses of gypsum in Ephedrae Herba-Gypsum Decoction（，n=6）

3.2 數(shù)據(jù)分析 借助SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件，采用One-way ANOVA比較多組之間藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的均值，以LSD法（方差齊性）與Games-Howe11法（方差不齊）進(jìn)行多重比較。結(jié)果顯示，各組組內(nèi)5種麻黃類生物堿的吸收趨勢(shì)（AUC0-t/Dose）均為去甲基麻黃堿≈去甲基偽麻黃堿＞麻黃堿≈偽麻黃堿≈甲基麻黃堿 （見(jiàn)圖3）。4組的AUC0-t、tmax有顯著差異 （P＜0.05），但Cmax變化不明顯。其中與單味麻黃相比，對(duì)于成分去甲基麻黃堿、去甲基偽麻黃堿和麻黃堿，麻黃-石膏1∶1與1∶2時(shí)吸收程度下降 （AUC0-t減少），麻黃-石膏1∶2與1∶4時(shí)吸收速率提高 （tmax縮短）。成分偽麻黃堿和甲基麻黃堿雖存在上述變化，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。此外，在3個(gè)麻黃-石膏合用組中，隨著石膏用量的加大，5種麻黃類生物堿的藥動(dòng)學(xué)行為變化整體表現(xiàn)為參數(shù)t1/2z、MRT、Vz/F逐漸增加，tmax、CLz/F逐漸減少。

表2 灌胃麻黃-石膏不同配比水煎液后去甲基麻黃堿、去甲基偽麻黃堿、麻黃堿、偽麻黃堿和甲基麻黃堿的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（，n=6）Tab.2 Pharmacokinetic parameters of five alkaloids in rat p lastm a after oral adm inistration of d ifferent doses of gypsum Ephedrae Herda-Gypsum Decoction（，n=6）

表2 灌胃麻黃-石膏不同配比水煎液后去甲基麻黃堿、去甲基偽麻黃堿、麻黃堿、偽麻黃堿和甲基麻黃堿的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（，n=6）Tab.2 Pharmacokinetic parameters of five alkaloids in rat p lastm a after oral adm inistration of d ifferent doses of gypsum Ephedrae Herda-Gypsum Decoction（，n=6）

注：與單味麻黃組比較，1）P＜0.05；與麻-石1∶1組比較，2）P＜0.05；與麻-石1∶2組比較，3）P＜0.05

化合物 組別AUC0-t/（ng·h·mL-1）C max/（ng·mL-1）Tmax/h t1/2z/h MRT/h（CLz/F）/（mL·h-1·kg-1）（Vz/F）/（L·kg-1）去甲基麻黃堿 單味麻黃 851.6±80.8 233.5±92.4 1.67±0.41 17.60±7.36 6.64±0.93 0.77±0.05 19.89±9.07麻-石∶1 565.3±201.21） 177.8±67.8 1.58±0.50 4.39±2.411） 3.48±1.011） 1.32±0.94 7.38±4.081）麻-石∶2 542.0±118.01） 138.8±30.4 0.92±0.381，2） 5.48±5.081） 3.84±1.541） 1.12±0.27 7.81±5.881）麻-石∶4 750.0±94.82，3） 214.3±71.0 0.92±0.491，2） 17.49±5.682，3）5.51±1.002，3） 0.86±0.09 21.66±7.012，3）去甲基偽麻黃堿 單味麻黃 1 283±126 305.4±126.2 1.67±0.41 17.76±8.18 7.38±0.94 0.86±0.05 22.29±11.08麻-石∶1 776.8±284.41） 235.3±89.2 1.50±0.55 3.21±1.261） 3.42±1.091） 1.70±1.30 6.27±1.61麻-石∶2 759.3±145.11） 201.3±42.9 0.92±0.381，2） 2.82±1.921） 3.38±0.581） 1.26±0.251） 5.04±3.551）麻-石∶4 1 122±2312，3） 387.2±275.0 0.92±0.491，2） 7.61±7.03 3.53±1.111） 1.00±0.21 10.08±6.97麻黃堿 單味麻黃 7 139±1 386 2 335±1 348 1.42±0.67 16.30±4.95 5.44±0.83 2.87±0.50 68.87±26.00麻-石∶1 4 756±1 9591） 2 006±1 006 1.25±0.27 1.02±0.561） 2.20±0.371） 4.24±1.51 6.26±4.571）麻-石∶2 5 380±8471） 1 907±552 0.58±0.201，2） 9.02±4.392） 4.12±1.282） 4.51±0.721） 59.35±30.482）麻-石∶4 6 317±899 2 287±789 0.38±0.141，2） 23.56±8.902，3）5.49±1.132） 3.42±0.49 115.1±44.42）偽麻黃堿 單味麻黃 2 253±458 769.7±414.3 1.25±0.76 14.83±5.10 4.96±0.49 3.49±0.70 73.79±27.61麻-石∶1 1 635±718 701.2±349.8 1.08±0.38 2.07±1.471） 2.18±0.421） 5.33±3.33 13.74±6.921）麻-石∶2 1 745±318 831.5±290.3 0.54±0.25 4.64±3.891） 2.63±0.881） 3.92±0.76 26.55±20.621）麻-石∶4 2 528±6152，3） 1 350±810 0.33±0.132） 39.17±16.452，3）5.11±1.242，3） 2.69±0.473） 158.3±83.32，3）甲基麻黃堿 單味麻黃 325.7±162.3 168.5±134.5 1.33±0.26 45.58±31.15 6.45±2.21 4.66±2.06 284.8±177.2麻-石∶1 256.9±127.0 172.6±105.6 1.50±0.00 2.68±2.24 1.61±0.251） 6.48±2.92 24.30±22.11麻-石∶2 276.3±60.9 88.58±25.75 0.83±0.59 22.05±18.58 7.22±2.162） 4.83±1.05 140.8±102.4麻-石∶4 336.0±59.8 100.9±18.7 0.83±0.59 61.09±38.622）9.68±1.061，2，3）3.33±0.59 271.6±125.02）

圖3 灌胃麻黃-石膏不同配比水煎液后去甲基麻黃堿、去甲基偽麻黃堿、麻黃堿、偽麻黃堿和甲基麻黃堿的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)比值（，n=6）Fig.3 Ratios of pharmacok inetic parameters of five alkaloids in rat p lasma after oral adm inistration of different doses of gypsum in Ephedrae Herba-Gypsum Decoction（，n=6）

4 討論

4.1 移行入血成分的選擇 前期研究［3］借助HPLC發(fā)現(xiàn)不同配比的麻黃-石膏水煎液中存在10個(gè)共有峰，經(jīng)已有對(duì)照品參照確認(rèn)了其中5個(gè)成分去甲基麻黃堿、去甲基偽麻黃堿、麻黃堿、偽麻黃堿和甲基麻黃堿，它們所涵蓋的藥毒理學(xué)作用［6-12］，恰與麻黃 “發(fā)汗解熱、宣肺平喘、利水消腫”的功效對(duì)應(yīng)，亦與其 “峻烈”之藥性吻合。它們雖均屬麻黃類生物堿，化學(xué)結(jié)構(gòu)相似但效毒強(qiáng)度有所區(qū)別，體現(xiàn)在發(fā)汗平喘功效，麻黃堿≈ 甲基麻黃堿＞偽麻黃堿 （偽麻黃堿對(duì)支氣管平滑肌存在雙向調(diào)節(jié)）；利尿功效，偽麻黃堿＞麻黃堿；興奮中樞神經(jīng)功效，麻黃堿＞偽麻黃堿＞甲基麻黃堿 （甲基麻黃堿幾乎無(wú)中樞興奮作用）；去甲基麻黃堿主要用于增強(qiáng)身體機(jī)能。為此麻黃-石膏不同配比下功效側(cè)重的改變，可能與效毒成分藥動(dòng)學(xué)行為變化隨之產(chǎn)生不同比例物質(zhì)群有關(guān)。故本實(shí)驗(yàn)選取去甲基麻黃堿、去甲基偽麻黃堿、麻黃堿、偽麻黃堿和甲基麻黃堿作為研究石膏劑量變化對(duì)麻黃移行入血成分藥動(dòng)學(xué)影響的主要檢測(cè)指標(biāo)。

4.2 檢測(cè)方法的建立 按試驗(yàn)劑量灌服大鼠后所得含藥血漿濃度較低，過(guò)去HPLC、GC-MS［13-14］難以測(cè)定，故采用靈敏度較高的LC-MS/MS定量分析5種麻黃類生物堿的含量。經(jīng)正負(fù)離子掃描發(fā)現(xiàn)5成分均在正離子模式下有較好的響應(yīng)，且根據(jù)其分子離子峰與產(chǎn)物離子完成Fragmentor和co11ision等參數(shù)優(yōu)化，最低定量限可達(dá)納克級(jí)。此外，對(duì)甲醇-水、乙腈-水流動(dòng)相進(jìn)行系統(tǒng)探索，發(fā)現(xiàn)乙腈-水中加入適量甲酸可改善峰型亦提高待測(cè)物的質(zhì)譜響應(yīng)，尚能實(shí)現(xiàn)去甲基麻黃堿/去甲基偽麻黃堿、麻黃堿/偽麻黃堿同分異構(gòu)體在色譜上良好分離。針對(duì)血樣預(yù)處理常用的方法，考察了蛋白沉淀法、液液萃取法與SPE固相萃取法，結(jié)果采用乙醚-二氯甲烷 （3∶2）萃取時(shí)待測(cè)物的內(nèi)源性物質(zhì)干擾相對(duì)較少，回收率較高。本實(shí)驗(yàn)所建立的同時(shí)測(cè)定生物樣品中去甲基麻黃堿、去甲基偽麻黃堿、麻黃堿、偽麻黃堿和甲基麻黃堿的LC/MS-MS較以往的方法靈敏、快速，能滿足中藥麻黃乃至含麻黃生物堿藥品的體內(nèi)成分監(jiān)測(cè)，指導(dǎo)臨床安全用藥。

4.3 麻黃石膏不同配比下的藥動(dòng)學(xué)行為 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明石膏劑量的改變可對(duì)麻黃中效毒成分 （去甲基麻黃堿、去甲基偽麻黃堿、麻黃堿、偽麻黃堿和甲基麻黃堿）的藥動(dòng)學(xué)行為產(chǎn)生規(guī)律性影響。結(jié)合傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)對(duì)麻黃石膏臨床用藥的認(rèn)識(shí)，加之檢測(cè)指標(biāo)的效毒差異 （見(jiàn) “4.1”項(xiàng)），發(fā)現(xiàn)與麻黃-石膏1∶1比，當(dāng)1∶2、1∶4時(shí)，成分麻黃堿、偽麻黃堿與甲基麻黃堿吸收速率加快、滯留時(shí)間延長(zhǎng)，表觀分布容積增加，吸收程度升高，生物利用度提高，與麻黃量少于石膏功效重在解熱平喘相銜接，但臨床常用比例為1∶2，原因可能在于1∶4時(shí)去甲基麻黃堿、麻黃堿的藥代特征趨于單味麻黃，而麻黃屬 “峻烈”之品［15］，不良反應(yīng)的發(fā)生率相應(yīng)提高。對(duì)于麻黃-石膏1∶1時(shí)，盡管麻黃堿與偽麻黃堿的生物利用度有所下降，可是兩成分間AUC0-t、Vz/F的比值分別為2.9∶1與0.5∶1，均較麻黃-石膏1∶2與單味麻黃低 （見(jiàn)圖3），引用概念 “中藥藥效物質(zhì)的疊加作用”［16］，推測(cè)互為同分異構(gòu)體的麻黃堿與偽麻黃堿結(jié)構(gòu)極其相似，可能具有相同的藥效基團(tuán)，在相同的利尿作用靶點(diǎn)上相互競(jìng)爭(zhēng)，麻黃-石膏1∶1時(shí)偽麻黃堿較麻黃堿占據(jù)份額提升，“此消彼長(zhǎng)”，平喘作用降低的同時(shí)利尿效應(yīng)增強(qiáng)，實(shí)現(xiàn)麻黃量等于石膏重在發(fā)越水氣（利尿）的目的。此外麻黃配伍石膏，可使成分麻黃堿、去甲基麻黃堿的AUC0-t、Cmax減少，消除速率加快，一定程度上降低了毒副作用的風(fēng)險(xiǎn)。

本研究從藥動(dòng)學(xué)方面證實(shí)臨床麻黃-石膏據(jù)“證”定 “比”的科學(xué)性與合理性，至于其劑量改變導(dǎo)致參數(shù)變化的機(jī)制尚不明確，本課題組猜想：（1）結(jié)構(gòu)相似的麻黃生物堿類成分在特定的條件下可實(shí)現(xiàn)相互間的轉(zhuǎn)化，其轉(zhuǎn)化程度除與藥物本身有關(guān)，還受到所處環(huán)境的作用； （2）石膏的加入可使體內(nèi)藥物作用靶點(diǎn)的內(nèi)環(huán)境發(fā)生改變，如pH、離子濃度、滲透壓等理化性質(zhì)； （3）由于石膏加入量的不同，所引起的生物體內(nèi)環(huán)境變化程度有所差異，即使同一劑量對(duì)不同靶標(biāo)位置的影響亦有所區(qū)別，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)特定靶點(diǎn) （如肺、腎、腦、心等組織器官）中麻黃藥效/毒成分群比例的調(diào)節(jié)，達(dá)到麻黃解熱、平喘、利尿功效的偏頗。為了進(jìn)一步驗(yàn)證本課題組的構(gòu)想，實(shí)驗(yàn)后期將分析劑量配比對(duì)麻黃類生物堿體內(nèi)組織分布、對(duì)石膏移行入血元素藥動(dòng)學(xué)的影響，可為麻黃-石膏 “增效減毒”的配伍內(nèi)涵提供更為翔實(shí)的數(shù)據(jù)支撐。

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Effect of gypsum dosage on p lasm a concentration of Ephedrae Herba alkaloids

HUO Hui-1ing1， LI Han-cheng1， REN Meng-yue1， MA Qin-hai1， TAN Xiao-mei1，2， LUO Jia-bo1，2*

（1.School of Chinese Medical Sciences，Southern Medical University，Guangzhou 510515，China；2.Guangdong Provincial Key Laboratory of Chinese Medicine Pharmaceutics，Southern Medical University，Guangzhou 510515，China）

AIMTo investigate the effect of the various gypsum dosages on pharmacokinetic changes of the p1asma concentration of Ephedrae Herba a1ka1oids by UPLC-MS/MS.METHODSTwenty-four SD ratswere random1y divided into four groupsand ora11y administered with EphedraeHerba-gypsum（1∶0，1∶1，1∶2，1∶4，m/ m）decoction.Their b1ood was co11ected at different time points，and the main pharmacokinetic parameters were ca1cu1ated by DAS 3.2.2 software.RESULTSSignificant differences in AUC0-tand tmaxwere observed among four groups.The 1∶1 and 1∶2 groups shared AUC0-tdecreases of norephedrine，norpseudoephedrine and ephedrine as compared to the 1∶0 group，whi1e 1∶2 and 1∶4 groups had shortened tmax，but no variation in their contents of pseudoephedrine and methy1ephedrine.With the gypsum dosage increased，the genera1 pharmacokinetic changes of the five Ephedrae Herba a1ka1oidsmanifested as the increases in t1/2z，MRT and Vz/F，but the decreases in tmaxand CLz/F.CONCLUSIONEphedrae Herba f1uctuating efficacy or toxicity due to change in gypsum dosage may exp1ain the regu1ar ratio a1eration in c1inica1administration of Ephedrae Herba and gypsum.

Ephedrae Herba；gypsum；a1ka1oids；dosage；pharmacokinetics

R966

A

1001-1528（2015）08-1689-07

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.08.012

2014-10-18

國(guó)家自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目 （81030066）

霍慧靈 （1989—），女，碩士，從事中藥復(fù)方制劑組方原理及配伍規(guī)律研究。Te1： （020）61689112，E-mai1：hh1study@ 163.com