腫瘤標(biāo)志物分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)研究的新進(jìn)展

李時(shí)孟1，潘寶香2，劉春迎3，謝風(fēng)1*

(1.吉林大學(xué)中日聯(lián)醫(yī)院 檢驗(yàn)科，吉林 長(zhǎng)春130033；2.吉林大學(xué)南湖校區(qū)醫(yī)院 口腔科，吉林 長(zhǎng)春130012；

3.吉林大學(xué)南湖校區(qū)醫(yī)院 護(hù)理部，吉林 長(zhǎng)春130012)

腫瘤標(biāo)志物(tumor marker，TM)是指在惡性腫瘤發(fā)生和生長(zhǎng)過(guò)程中，由腫瘤細(xì)胞的基因表達(dá)而合成分泌的或因腫瘤細(xì)胞反應(yīng)而異常產(chǎn)生和(或)升高的，提示腫瘤存在和生長(zhǎng)的一類物質(zhì)[1]。近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的迅猛發(fā)展，檢測(cè)手段不斷提高，已有多種檢測(cè)技術(shù)，現(xiàn)針對(duì)腫瘤標(biāo)記物相關(guān)分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)及其發(fā)展作一綜述。

1分子診斷技術(shù)

1.1生物芯片技術(shù)

生物芯片是一種對(duì)樣本進(jìn)行快速分析和檢測(cè)的高新技術(shù)，近年來(lái)在檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)方面發(fā)展迅猛，已經(jīng)用于病毒和細(xì)菌檢測(cè)、自身免疫病免疫標(biāo)志物檢測(cè)、遺傳性疾病檢測(cè)以及腫瘤標(biāo)志物的聯(lián)合及單一檢測(cè)等方面[2,3]。根據(jù)芯片載體材料的不同可分為基因芯片、蛋白芯片、細(xì)胞芯片以及組織芯片[4]。目前，在臨床上應(yīng)用最多的是蛋白芯片，多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片(C-12蛋白芯片)技術(shù)已日趨成熟，其利用抗原抗體特異性結(jié)合的抗體夾心方法，將多種腫瘤標(biāo)志物抗體包被在固相基質(zhì)中，捕捉待測(cè)血清中相應(yīng)腫瘤標(biāo)志物，然后加入標(biāo)有示蹤物的第二抗體，催化化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生光信號(hào)，再通過(guò)檢測(cè)儀讀取信號(hào)，實(shí)現(xiàn)腫瘤標(biāo)志物的定量檢測(cè)[5,6]。與傳統(tǒng)免疫技術(shù)相比，它可同時(shí)對(duì)12種常見(jiàn)的腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè)，所需樣本量更少[7]，效率更高，診斷更全面準(zhǔn)確。龔倩[8]等及匡紅[9]等的研究均表明多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片更適用于健康體檢及無(wú)癥狀人群普查，做到早發(fā)現(xiàn)、早診斷，提高腫瘤患者的治愈率和生存率。

1.2單克隆抗體技術(shù)

單克隆抗體(McAb)是只識(shí)別單一抗原表位的抗體，來(lái)源于單個(gè)B淋巴細(xì)胞的克隆或一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的克隆[10]。與目前用于臨床診斷的癌胚抗原類、酶類、激素類等腫瘤標(biāo)志物相比，單克隆抗體性狀單一、生物活性單一、特異性更強(qiáng)，可檢測(cè)特異性腫瘤標(biāo)志物用于腫瘤的臨床診斷。篩選和制備特異性腫瘤標(biāo)志物的單克隆抗體一直是研究的熱點(diǎn)，Ktnaeger[11]等運(yùn)用單克隆抗體制備技術(shù)成功地發(fā)現(xiàn)了小細(xì)胞肺癌的一種特異性標(biāo)記物，許曉光[12]等研究應(yīng)用淋巴細(xì)胞雜交瘤抗體制備技術(shù)和紅細(xì)胞的花環(huán)實(shí)驗(yàn)，制備并篩選出了三株可能識(shí)別腫瘤特異性或相關(guān)性表面抗原的單克隆抗體，劉保才[13]等進(jìn)行了針對(duì)肝癌候選標(biāo)志物HCCR的單克隆抗體制備及鑒定的研究，最終得到了一株可特異性識(shí)別HCCR蛋白的單克隆抗體，在對(duì)直徑小于兩厘米的肝癌患者診斷中，陽(yáng)性率顯著高于AFP，二者聯(lián)合檢查可提高早期肝癌和小細(xì)胞肝癌的檢出率。

1.3循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)

循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)是1869年一名澳大利亞的內(nèi)科醫(yī)生Thomas Ashworth[14]首次在一位死于腫瘤轉(zhuǎn)移的患者血液中檢測(cè)到的一類與原發(fā)腫瘤相似的細(xì)胞，被其稱之為循環(huán)腫瘤細(xì)胞。由于外周血中CTC數(shù)量很少，很難精確分離，限制了CTC的臨床應(yīng)用，但隨著對(duì)腫瘤發(fā)生機(jī)制的不斷了解及現(xiàn)代檢測(cè)技術(shù)的迅猛發(fā)展，CTC作為一種實(shí)時(shí)的“液體活檢”標(biāo)志物[15]，有望成為一種新型的療效評(píng)估標(biāo)記物[16]。血液循環(huán)中檢測(cè)到CTC并非意味著腫瘤存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，但會(huì)增大轉(zhuǎn)移的概率，在多種腫瘤研究中已證實(shí)CTC陽(yáng)性患者的總生存率(OS)和無(wú)進(jìn)展生存期(DFP)明顯短于陰性患者[17]。CTC的檢測(cè)分為富集和分析兩大部分。富集技術(shù)主要包括密度梯度離心法、基于細(xì)胞大小的膜濾過(guò)法以及免疫磁性分離法，其中免疫磁性分離法是目前應(yīng)用最多的方法，該法具有高度的特異性及富集效率，提高了檢測(cè)的敏感性和特異性[18]。分析技術(shù)也有很多種，如免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)、酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)、逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)、CTC芯片技術(shù)以及CellSearchTM檢測(cè)系統(tǒng)，它是美國(guó)食品和藥管局(FDA)唯一批準(zhǔn)，可用于臨床檢測(cè)轉(zhuǎn)移性乳腺癌、結(jié)直腸癌以及前列腺癌患者循環(huán)血中的CTC的檢測(cè)系統(tǒng)[19]。但由于CTC檢測(cè)的價(jià)格昂貴，故失訪率較高[17]，若能開(kāi)發(fā)出敏感性和特異性更高，同時(shí)成本價(jià)格更為合理的檢測(cè)方法，CTC檢測(cè)可更廣泛地應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)工作中。

2小結(jié)與展望

腫瘤發(fā)病隱匿，目前已明確的腫瘤疾病就多達(dá)兩百余種，且常規(guī)影像學(xué)檢查、細(xì)胞病理學(xué)檢查等對(duì)多種腫瘤都不能進(jìn)行早期診斷，特異性診斷指標(biāo)的缺乏也導(dǎo)致腫瘤的診斷及治療滯后，故腫瘤標(biāo)志物早期檢測(cè)可為腫瘤患者贏得更多的生存機(jī)會(huì)。臨床檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物的方法很多，傳統(tǒng)的標(biāo)記免疫技術(shù)不斷地更新發(fā)展，同時(shí)，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的廣泛應(yīng)用，也使腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)進(jìn)入了新的階段，蛋白芯片作為一種多變量分析技術(shù)，標(biāo)本需求量更小、準(zhǔn)確性更高，價(jià)格亦比單項(xiàng)檢測(cè)相對(duì)低廉，可用于腫瘤的早期篩查。循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)有望成為早期診斷與預(yù)測(cè)腫瘤轉(zhuǎn)移及預(yù)后的新型檢驗(yàn)項(xiàng)目。但目前的腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)只能在專業(yè)實(shí)驗(yàn)室中開(kāi)展，成本高，檢測(cè)周期長(zhǎng)，存在一定的局限性，床旁檢驗(yàn)技術(shù)(POCT)已成為醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)發(fā)展的新模式。因其具有微型化、檢驗(yàn)效率高、周期短等特點(diǎn)，近年來(lái)也陸續(xù)用于臨床腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)，如膀胱腫瘤尿液標(biāo)志物的檢測(cè)、宮頸癌腫瘤標(biāo)志物的快速篩查以及結(jié)合分子生物技術(shù)的全自動(dòng)分子診斷系統(tǒng)[20]的應(yīng)用。相信伴隨更多特異性腫瘤標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)和更新的檢測(cè)技術(shù)的不斷問(wèn)世，可為腫瘤的早期診斷及篩查提供更加可靠的依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]王鴻利.實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社,2005.

[2]翟金萍,鄧月影,郎愛(ài)東.生物芯片技術(shù)用于中藥研究的新進(jìn)展[J].藥物生物技術(shù),2013,20(1):72.

[3]李喜瑩,李珊珊.生物芯片技術(shù)及其在臨床檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用進(jìn)展[J].分子診斷與治療雜志,2011,3(1):62.

[4]時(shí)瑛.腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)技術(shù)的研究進(jìn)展[J].新疆醫(yī)學(xué),2011,41:38.

[5]劉靜靜,劉巧玲.多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片在惡性腫瘤檢測(cè)中的效果觀察[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)刊,2014,16(2):321.

[6]婁加陶,顧軍,高春芳,等.蛋白芯片檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物及其與其他方法的比較[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2009,24(6):466.

[7]Uzoma I,Zhu H.Interactome mapping:using protein microarray technology to reconstruct diverse protein networks[J].Genomics Proteomics Bioinformatics,2013,11(1):18.

[8]龔倩,王金金.多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片技術(shù)在健康體檢人群防癌普查中的應(yīng)用評(píng)價(jià)[J].免疫學(xué)雜志,2012,28(10):896.

[9]匡紅,孫晨,李靜,等.多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片技術(shù)在人群健康體檢中的應(yīng)用[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2013,34(9):1074.

[10]范娜娜,丁倩,趙田田,等.單克隆抗體藥物與血液系統(tǒng)惡性腫瘤的治療.中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào),2011,33(9):1015.

[11]Krueger P,Nitz C，F(xiàn)oster R,et al.A new small cell lung cancer (SCLC) - specific marker discovered through antigenic subtraction of neuroblastona cells[J].Cancer Immunol Immunother,2003,52(6):367.

[12]許曉光,黃海燕,宋朝君,等.腫瘤細(xì)胞表面抗原的單克隆抗體—免疫沉淀篩選法[J].解放軍醫(yī)學(xué)雜志,2008,33(11):1348.

[13]劉保才,霍景瑞,劉英富,等.肝癌候選標(biāo)志物HCCR單克隆抗體的制備和鑒定[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2011,27(10):1094.

[14]Ashworth TR.A case of cancer in which cells similar to those in the tumours were seen in the blood after death[J].Medical Journal Australia,1869,14:146.

[15]Alix-Panabières C,Pantel K.Circulating tumor cells:liquid biopsy of cancer[J].Clin Chem,2013,59(1):110.

[16]Reid AH,Attard G,Danila DC,et al.Significant and sustained antitumor activity in post-docetaxel,castration-resistant prostate cancer with the CYP17 inhibitor abiraterone acetate[J].J Clin Oncol,2010,28(9):1489.

[17]曾瀝瓊,楊竹.循環(huán)腫瘤細(xì)胞在卵巢癌預(yù)后中的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)信息,2014,27(5):604.

[18]黃同海.循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)的研究新進(jìn)展[J].中國(guó)腫瘤臨床,2007,34(8):476.

[19]Miller MC,Doyle GV,Terstappen LW.Significance of circulating tumor cells detected by the CellSearch system in patients with metastatic breast colorectal and prostate cancer[J].J Oncol,2010,2010:617421.

[20]張臘紅,劉玉華,陳兆軍.POCT在腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)領(lǐng)域的應(yīng)用與發(fā)展[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2014,37(11):808.

(收稿日期：2015-01-17)

作者簡(jiǎn)介：李時(shí)孟(1990-)，女，在讀碩士，研究方向?yàn)榕R床檢驗(yàn)在疾病診斷學(xué)中的應(yīng)用。

文章編號(hào)：1007-4287(2015)12-2148-02

*通訊作者