何紅暉

（長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林 長春 130021）

HPLC檢測柴銀口服液中葛根素的含量分析

何紅暉

（長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林 長春 130021）

目的 運用HPLC法對差銀口服液只能夠葛根素的含量進行檢測分析。方法 提取出柴銀口服液中葛根素含量后，運用Agilent Eclipse XDB-C18作為色譜柱，將甲醇-水（25∶75）作為流動相，流速控制為1.0mL/min，所檢測的波長為250 nm，柱溫控制為30 ℃。結(jié)果 葛根素和峰面積線性關(guān)系最佳為0.02064～0.8256 μg；葛根素峰面積的RSD為0.19%，試驗儀器的精密度較好；葛根素峰面積的RSD為1.63%，表明，在24 h內(nèi)，供試品溶液具有良好的穩(wěn)定性；批號11113003、00512028以及00512010樣品中含有的葛根素含量分別是0.8446、08357、0.8235 g/L，n=3時，其RSD分別為1.79%、2.27%、1.99%。結(jié)論 采用HPLC法對柴銀口服液中的葛根素含量進行檢測，具有簡便、快速、靈敏度高、專屬性強以及重復(fù)性好的優(yōu)點，可將其作為控制柴銀口服液質(zhì)量的有效方法。

HPLC；柴銀口服液；葛根素；含量

柴銀口服液成分主要包括柴胡、金銀花、葛根、黃苓、連翹、青蒿、薄荷、桔梗、荊芥、苦杏仁以及魚腥草等中藥成分，諸多藥方聯(lián)用，能夠起到利咽止咳、清熱解毒的作用，適宜于治療上呼吸道感染外感風(fēng)熱癥［1］?；颊吲R床癥狀主要包括頭痛、發(fā)熱、汗出、咽痛、咳嗽以及鼻塞流涕等。目前，臨床中關(guān)于柴銀口服液中黃苓苷、連翹苷以及綠原酸等含量測定方法已有相關(guān)文獻報道，但關(guān)于葛根素含量的測定方法尚無文獻報道［2］。葛根具備解肌退熱的作用，適宜用來治療外感發(fā)熱頭痛，其作為葛根的一種成分，準確測定其含量，能夠保障制劑質(zhì)量［3］。筆者對柴銀口服液中葛根素的含量采用HPLC法進行測定，具體報道如下。

1　材料與方法

1.1檢驗儀器和藥物試劑。①檢驗儀器：檢測儀器主要使用Agilent1200型高效液相色譜儀，檢測設(shè)備主要包括四元泵、自動進樣器、VWD檢測器以及ChenStation化學(xué)工作站等，天平設(shè)備使用由梅特勒公司生產(chǎn)的Mettler AE240型電子天平。②藥物試劑：葛根對照品（中國藥品生物制品檢定所；批號110752.200511），柴銀口服液（魯南厚普制藥有限公司；國藥準字Z20010124；規(guī)格為每支20mL；批號分別為11113003、00512010以及00512028），使用的甲醇是色譜純，所使用的其他試劑為分析純，水是重蒸水。

1.2方法

1.2.1色譜條件設(shè)置：選用Aglient Eclipse XDB-C18作為色譜柱，其規(guī)格大小為4.6 mm×150 mm，5μm，將比例為25∶75的甲醇-水作為流動相，流速控制為每分鐘1.0mL；所檢測的波長為250 nm，柱溫控制為30 ℃。在此環(huán)境下，色譜峰中，能夠?qū)⒏鸶睾蜆悠穼崿F(xiàn)良好分離，將時間保留為10min左右，根據(jù)葛根素峰，所計算出的理論塔板數(shù)多于5000。

1.2.2制備溶液。對照品溶液的制備：精密稱量10.33 mg葛根素對照品，將其放置在50mL的量瓶內(nèi)；然后使用甲醇定容，搖晃均勻后，即可得到206.5 mg/L的對照品儲備溶液；精密量取1mL溶液后，將其放置在10mL的量瓶內(nèi)，使用甲醇進行定容，然后即可得到20.65 mg/L的對照品溶液，放置在4 ℃的冰箱中放置保存。

供試品溶液的配置：精密稱取0.5mL該溶液，將其放置到10mL的量瓶中，將甲醇加入進去，加入到刻度位置，充分搖勻后，濾膜濾過0.22μm，然后取出過濾液，即可得到供試品溶液。

陰性空白對照溶液的配置：根據(jù)藥物處方的比例、生產(chǎn)工藝對葛根陰性樣品進行制備，其制備方法同供試品溶液制備法，最后制成陰性空白對照溶液。

1.2.3線性關(guān)系：分別精密稱取1、2、5、10、20、40μL的葛根素對照品溶液后，將其注入到液相色譜儀中。將葛根素進樣量設(shè)置為橫坐標X，將其峰面積設(shè)置為縱坐標Y，將標準曲線設(shè)置出來，得到以下回歸方程：Y=3897.52X+1.20（r=0.9999，n=6）。

1.2.4精密度試驗：精密稱取5μL對照品溶液，在相同色譜條件下，連續(xù)性重復(fù)進樣六次，然后記錄峰面積。

1.2.5穩(wěn)定性試驗：取批號為11113003的供試品，分別在0、2、4、8、12、24 h，在設(shè)置的色譜條件下，進樣5μL，并準確記錄峰面積。

1.2.6重復(fù)性試驗：選取同一種樣品，批號均為11113003，在設(shè)置的色譜條件下，并運用上面提到的溶液制備法制作出供試品溶液，分別取樣5μL，對其含量進行測定。

1.2.7測定樣品：取出批號為11113003、00512010以及00512028的柴銀口服液樣品，根據(jù)溶液制備法制備出供試品溶液，在色譜條件下，對各批的柴銀口服液樣品進行測定，對其中葛根素含量進行計算。

2　結(jié) 果

2.1線性范圍和精密度情況：精密稱取葛根素對照品溶液后，結(jié)果表明，葛根素和峰面積線性關(guān)系最佳為0.02064～0.8256 μg。精密稱量5μL對照品溶液后，n=6時，葛根素峰面積的RSD為0.19%，試驗儀器的精密度較好。

2.2穩(wěn)定性試驗和重復(fù)性試驗結(jié)果：對供試品溶液0、2、4、8、12、24 h的峰面積進行記錄，結(jié)果表明，n=6時，葛根素峰面積的RSD為1.63%，表明，在24 h內(nèi)，供試品溶液具有良好的穩(wěn)定性。將同一個批號的6份樣品按照溶液制備法制備出供試品溶液，在設(shè)置好的色譜條件下，進樣5μL，測定出的葛根素平均含量為0.8447 g/L，n=6時，其RSD為1.79%，結(jié)果表明具有良好的重復(fù)性。

2.3樣品測定含量結(jié)果：對3批柴銀口服液樣品制備出供試品溶液后，批號11113003、00512028以及00512010樣品中含有的葛根素含量分別是0.8446、08357以及0.8235 g/L，n=3時，其RSD分別為1.79%、2.27%以及1.99%。

3　討 論

通過對水、乙醇、30%乙醇以及甲醇等樣品稀釋溶劑進行比較后，對樣品進行稀釋時，使用甲醇或者乙醇會發(fā)生少量絮狀沉淀現(xiàn)象，如用水或者30%乙醇對樣品進行稀釋，則依然為紅棕色澄清溶液［4］。對四種不同稀釋溶劑樣品溶液進行分析后，結(jié)果表明葛根素含量無顯著差別，其中，使用甲醇溶液進行稀釋時，所產(chǎn)生的雜質(zhì)色譜峰較少，適宜選擇其作為稀釋溶劑［5］。

通過對甲醇-水以及乙腈-水的流動性體系給葛根素產(chǎn)生的分離效果進行了解后，表明兩種體系均能夠有效滿足葛根素含量測定的系統(tǒng)適用性，立足于經(jīng)濟學(xué)角度進行考慮，色譜流動相體系適宜選擇甲醇-水［6］。

綜上所述，采用HPLC法對柴銀口服液中的葛根素含量進行檢測，具有簡便、快速、靈敏度高、專屬性強以及重復(fù)性好的優(yōu)點，可將其作為控制柴銀口服液質(zhì)量的有效方法。

［1］ 李翔，劉皈陽，馬建麗，等.HPLC測定柴銀口服液中葛根素的含量［J］.中國實驗方劑學(xué)雜志，2013，19（11）：131-133.

［2］ 李翔，劉皈陽，馬建麗，等.柴銀口服液快速HPLC特征指紋圖譜研究［J］.中國藥師，2014，17（1）：38-40.

［3］ 蔡清宇，唐慧慧，康琛，等.HPLC測定柴銀口服液中連翹苷含量［J］.中國實驗方劑學(xué)雜志，2011，17（16）：94-95.

［4］ 安曉敏，樊磊磊，劉乃強，等.蒼苓止瀉口服液中葛根素含量的高效液相色譜測定［J］.時珍國醫(yī)國藥，2014，25（11）：9-10.

［5］ 許廣華，李小偉，韓雙.頸痛舒口服液中葛根素含量測定方法的研究［J］.中國民族民間醫(yī)藥，2014，10（7）：13-14.

［6］ 蔡清宇，唐慧慧，康琛，等.HPLC測定柴銀口服液中連翹苷含量［J］.中國實驗方劑學(xué)雜志，2011，17（16）：94-95.

R927.2

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1671-8194（2015）10-0073-02