武均宜肖 鋒王恩軍靳 祎*

1.中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院，湖南 長沙 410000；2.河北大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，河北 保定 071000

刺五加注射液對人乳腺癌細(xì)胞體外抑制的實驗研究

武均宜1肖 鋒2王恩軍2靳 祎2*

1.中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院，湖南 長沙 410000；2.河北大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，河北 保定 071000

目的：探討刺五加注射液對人乳腺癌細(xì)胞MCF－7的體外增殖的影響。方法：采用MTT法測定了不同劑量的刺五加注射液對MCF－7細(xì)胞的體外增殖的抑制作用，并通過倒置顯微鏡觀察其細(xì)胞形態(tài)的變化。結(jié)果：刺五加注射液可以抑制MCF－7細(xì)胞的增殖，量效關(guān)系良好；形態(tài)學(xué)觀察到細(xì)胞凋亡。結(jié)論：刺五加注射液對MCF－7細(xì)胞增殖具有較強(qiáng)的抑制作用。

刺五加注射液；人乳腺癌細(xì)胞；MCF－7；增殖作用；抑制作用

刺五加又名五加參，為五加科植物刺五加的根和莖?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明刺五加具有抗腫瘤、抗氧化、抗血栓、提高免疫力等多方面的的作用［1－2］。據(jù)報道，刺五加及其提取物對肺癌、胃癌、艾氏腹水癌及白血病等多種腫瘤均有較強(qiáng)抑制作用，還可改善腫瘤化療患者的免疫狀況，提高機(jī)體的抗腫瘤功效［3－4］。本試驗測定不同劑量的刺五加注射液對人乳腺癌MCF－7細(xì)胞的抑制作用，為刺五加抗腫瘤作用的研究及今后的臨床應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 刺五加注射液（批號：2007111411，黑龍江省完達(dá)山制藥廠）；順鉑（批號：04080212，齊魯制藥有限公司）；MCF－7細(xì)胞 （由河北大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院提供）；四甲基偶氮唑鹽（MTT）、RPMI 1640培養(yǎng)液（美國Sigma公司）；0.25%胰蛋白酶消化液（美國HyClone公司）。二甲亞砜（DMSO，上海紫一試劑廠）；胎牛血清 （中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所）。

1.2方法

1.2.1 細(xì)胞的培養(yǎng) MCF－7細(xì)胞復(fù)蘇后，貼壁生長于含10%胎牛血清，青霉素和鏈霉素各100U／ml的RPMI 1640完全培養(yǎng)液中，并置于37℃，5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.2.2 刺五加注射液對細(xì)胞增殖抑制率的影響 采用MTT法，將MCF－7細(xì)胞按照5×104個／ml的密度接種到96孔培養(yǎng)板中，試驗分為以下幾組：刺五加注射液組 （10、20、40μl），陰性對照組加相同劑量的生理鹽水，陽性對照組加50μg／m l的順鉑，終體積為200μl／孔。培養(yǎng)24 h后加入5μg／μl的MTT液，繼續(xù)培養(yǎng)4h，棄上清液，加入DMSO后磁力震蕩15min，用酶標(biāo)儀測定各孔吸光度A值，測定波長λ＝570nm，參考波長λ＝630nm，計算細(xì)胞增殖的抑制率：抑制率 （%）＝（對照組A值－實驗組A值）／對照組A值×100%

1.2.3 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察 取生長狀態(tài)良好的MCF－7細(xì)胞接種于48孔細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)，培養(yǎng)24h，實驗組加入40μl／孔的刺五加注射液，對照組加入生理鹽水，培養(yǎng)24h后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)。

1.2.4 統(tǒng)計學(xué)分析 數(shù)據(jù)采用The SAS system 6.12統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析。計量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用單因素方差分析，P＜0.05表示有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對MCF－7細(xì)胞增殖的抑制作用 由表1可知，MCF－7細(xì)胞經(jīng)不同劑量的刺五加注射液作用24h后，細(xì)胞增殖抑制率顯著增加，顯示較明顯的細(xì)胞毒性反應(yīng)，且隨著藥物劑量的增加，抑制率逐漸增強(qiáng)，顯示良好的量效關(guān)系。與陰性對照組比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化刺五加注射液作用MCF－7細(xì)胞后，形態(tài)學(xué)發(fā)生了顯著變化（見圖1）。陰性對照組MCF－7細(xì)胞貼壁良好，呈不規(guī)則長梭形或多角形，排列無方向性，細(xì)胞邊緣清晰。實驗組細(xì)胞經(jīng)刺五加注射液作用后，細(xì)胞多數(shù)呈圓形，胞膜起皺，培養(yǎng)基內(nèi)懸浮著較多的細(xì)胞和碎片。

3 討論

刺五加注射液為經(jīng)水醇法提取制成的滅菌制劑，含黃酮、刺五加多糖和刺五加苷等多種有效成分，已廣泛應(yīng)于臨床多種疾病的治療［5］。有研究顯示，刺五加注射液對體外培養(yǎng)HeLa細(xì)胞、A549細(xì)胞的增殖均有較強(qiáng)的抑制作用，并能促進(jìn)細(xì)胞凋亡［6、7］。本試驗研究表明，刺五加注射液對體外培養(yǎng)的人乳腺癌MCF－7細(xì)胞增殖有較強(qiáng)的抑制作用，10μl／孔、20μl／孔、40μl／孔的刺五加注射液作用細(xì)胞24h后，細(xì)胞抑制率分別48.18%、60.23%和84.67%，呈現(xiàn)良好的劑量效應(yīng)關(guān)系。說明刺五加注射液對MCF－7細(xì)胞的抑制作用在此范圍內(nèi)與其劑量呈正相關(guān)，即隨著藥物劑量的增加，抑制作用明顯增強(qiáng)。而刺五加注射液對MCF－7細(xì)胞的抑制作用及詳細(xì)機(jī)制還有待于今后深入研究。

［1］董梅，李廷利.刺五加化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展 ［J］.中醫(yī)藥學(xué)報，2011，39（3）：98－100.

［2］許妍姬.刺五加對癡呆模型小鼠記憶障礙及MDA含量、SOD和乙酰膽堿脂酶活性的影響［J］.中國老年學(xué)雜志，2010，9（30）：1238－1240.

［3］豐俊東，林代華，劉希琴，等.刺五加皂苷對人肝癌細(xì)胞株血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)的抑制作用［J］.中藥新藥與臨床藥理，2007，18（5）：339－341.

［4］Yoon TJ，Yoo YC，Lee SW，et al.Anti－metastatic activity of acanthopanax senticosus extract and its possible immunologicalmechanism of action［J］. JEthnopharmacol，2004，93（2）：247.

［5］杜秀芳，劉偉娜，詹文紅.刺五加注射液的臨床應(yīng)用進(jìn)展 ［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2007，16（24）：3603－3604.

［6］王倩，趙剛.刺五加注射液誘導(dǎo)宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡機(jī)理的研究［J］.公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué)，2013，24（2）：13－17.

［7］靳祎，王恩軍，朱寶成.刺五加注射液對人肺腺癌A549細(xì)胞增殖的抑制作用［J］.軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院學(xué)報，2009，30（5）：729－730.

R285.5

A

1007－8517（2015）11－0014－02

2015.03.26）

河北省中醫(yī)藥管理局科研計劃項目（2009061）。

武均宜（1995－），女，大學(xué)本科，醫(yī)學(xué)檢驗專業(yè)，E-mail：wujunyi1688＠163.com。

靳祎（1977－），女，副教授，從事抗腫瘤中藥及化學(xué)生物學(xué)研究。E-mail：jinyi2009＠163.com。