抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體檢測(cè)對(duì)老年ANCA相關(guān)性小血管炎病情活動(dòng)程度的影響

蔣茵唐開獎(jiǎng)宋星慧覃玉花韋陽(yáng)妙

(廣西醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院，廣西柳州545000)

摘要〔〕目的探討抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體(AECA)檢測(cè)對(duì)老年抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體(ANCA)相關(guān)性小血管炎病情活動(dòng)程度的預(yù)測(cè)價(jià)值。方法選取56例老年抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體相關(guān)性小血管炎(AASV)患者作為觀察組，60例健康獻(xiàn)血者作為對(duì)照組，全部研究對(duì)象采集固定的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)為抗原，細(xì)胞酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法檢測(cè)血清AECA，比較兩組患者AECA陽(yáng)性率的差異，分析AASV患者AECA與臨床病情活動(dòng)性指標(biāo)的相關(guān)性。結(jié)果觀察組血清AECA陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，不同類型AASV患者中的血清AECA陽(yáng)性率比較發(fā)現(xiàn)，變應(yīng)性肉芽腫性血管炎血清AECA陽(yáng)性率明顯高于顯微鏡下多血管炎和肉芽腫性多血管炎，肉芽腫性多血管炎血清AECA陽(yáng)性率明顯高于顯微鏡下多血管炎(P<0.05)，AASV病情活動(dòng)期血清AECA陽(yáng)性率、血清AECA和血沉(ESR)水平均明顯高于病情緩解期(P<0.05)，且AECA陽(yáng)性組BVAS分值和ESR水平明顯高于AECA陰性組患者(P<0.05)。結(jié)論抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體在AASV診斷和鑒別診斷、病情活動(dòng)程度預(yù)測(cè)中具有重要的價(jià)值。

關(guān)鍵詞〔〕抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體；抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體；小血管炎

中圖分類號(hào)〔〕R593〔

通訊作者：唐開獎(jiǎng)(1968-)，男，副主任醫(yī)師，主要從事風(fēng)濕免疫學(xué)研究。

第一作者：蔣茵(1981-)，女，主治醫(yī)師，主要從事風(fēng)濕免疫學(xué)研究。

抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體(ANCA)相關(guān)性小血管炎(AASV)是自身免疫性炎癥反應(yīng)造成的中小血管炎癥性疾病，呈暫時(shí)緩解性或復(fù)發(fā)性，同時(shí)病情呈持續(xù)發(fā)展的免疫系統(tǒng)疾病〔1〕。AASV 疾病主要是指變應(yīng)性肉芽腫性血管炎(EGPA)、顯微鏡下多血管炎(MPA)和肉芽腫性多血管炎(GPA)〔2〕。EGPA、MPA和GPA患者血液ANCA陽(yáng)性表達(dá)率超于80%〔3〕，因此被稱之為AASV。AASV常累及全身多臟器損傷，臨床癥狀復(fù)雜，目前尚缺乏有效的病情活動(dòng)程度的評(píng)價(jià)指標(biāo)。AECA是血管炎癥性疾病的重要生物學(xué)標(biāo)志，AECA在血管性炎癥患者中的變化及其臨床意義的研究較多〔4〕，但關(guān)于抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體檢測(cè)對(duì)老年AASV病情活動(dòng)程度的預(yù)測(cè)價(jià)值研究較少。

1資料與方法

1.1臨床資料選取2009年1月至2014年1月我院住院部或門診部老年AASV患者56例作為觀察組，納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡>60歲，均符合美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)老年AASV活動(dòng)期的診斷標(biāo)準(zhǔn)〔5〕，其ANCA陽(yáng)性率>80%。同期選取60例健康獻(xiàn)血者作為對(duì)照組。觀察組男44例，女12例，年齡：60～74〔平均(67.42±6.31)〕歲，其中EGPA 10例，病程(77.01±13.06)個(gè)月，MPA 16例，病程(13.09±5.21)個(gè)月，GPA 30例，病程(10.31±3.11)個(gè)月；對(duì)照組男46例，女14例，年齡61～77〔平均(76.34±10.77)〕歲；兩組患者性別、年齡等一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究已經(jīng)通過(guò)本醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，并獲取全部研究對(duì)象的知情同意。

1.2檢測(cè)方法全部研究對(duì)象空腹采集靜脈血，離心操作收集血清，采用細(xì)胞酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定AECA。具體步驟：抗原獲取通過(guò)體外分離和培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)，抗原鑒定通過(guò)人Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫組化鑒定HUVEC符合內(nèi)皮細(xì)胞的組織學(xué)特點(diǎn)。細(xì)胞酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Cyto-ELISA)法檢測(cè)：體外分離和培養(yǎng)HUVEC混合培養(yǎng)，形成單層內(nèi)皮細(xì)胞，同時(shí)將其轉(zhuǎn)移至96孔細(xì)胞培養(yǎng)板繼續(xù)反復(fù)細(xì)胞培養(yǎng)種植。37℃、5%CO2環(huán)境下孵育，2 d后形成單層內(nèi)皮細(xì)胞，磷酸鹽緩沖液(PBS)反復(fù)沖洗3次，采用0.5%Triton-X-100、0.2%戊二醛固定15 min，37℃環(huán)境下采用2%牛血清白蛋白封閉120 min，37℃環(huán)境下放入1∶50待檢測(cè)血清，120 min后放入酶標(biāo)羊抗人IgM型抗體(Sigma 公司)，采用四甲基聯(lián)苯胺(TMB)顯色劑顯色，終止，讀取數(shù)值(P/N)，P(檢測(cè)值)/N(陰性對(duì)照數(shù)值)= P(檢測(cè)值)-B(空白對(duì)照數(shù)值)/N(陰性對(duì)照數(shù)值)-B(空白對(duì)照數(shù)值)。P/N數(shù)值大于正常對(duì)照組平均數(shù)值3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差則作為陽(yáng)性。

1.3觀察指標(biāo)比較AASV患者和健康獻(xiàn)血者、不同類型AASV(EGPA、MPA和GPA)、不同AASV病情活動(dòng)程度間的AECA陽(yáng)性率的差異。比較不同病情活動(dòng)程度患者血清AECA陽(yáng)性率的差異，其中治療前，血管炎癥狀較重，嚴(yán)重影響正常生活提示病情活動(dòng)期，患者經(jīng)有效治療后，血管炎癥狀明顯減輕，不影響正常生活提示病情緩解期。參照明翰血管炎臨床病情活動(dòng)(BVAS)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)〔6〕，比較AECA陽(yáng)性AASV患者和AECA陽(yáng)性AASV患者間BVAS分值的差異，同時(shí)比較AECA陽(yáng)性AASV患者和AECA陽(yáng)性AASV患者間血沉(ESR)水平的差異，其中BVAS分值越高，ESR水平越高，病情活動(dòng)程度越嚴(yán)重。

2結(jié)果

2.1組間血清AECA陽(yáng)性率比較觀察組血清AECA陽(yáng)性率(62.50%，35例)明顯高于對(duì)照組(3.33%，2例)(P<0.05)。EGPA血清AECA陽(yáng)性率〔8例(80.00%)〕明顯高于MPA(43.75%，7例)和GPA(66.67%，20例)，GPA陽(yáng)性率明顯高于MPA(P<0.05)。治療前病情活動(dòng)期血清AECA陽(yáng)性率(62.50%，35例)明顯高于緩解期(25.00%，14例)(P<0.05)。

2.2不同病情活動(dòng)程度血清AECA和ESR水平比較治療前病情活動(dòng)期血清AECA(1.75±0.61)和〔ESR(45.62±10.11)mm/h〕水平均明顯高于緩解期〔(1.08±0.14)，(16.52±8.01)mm/h〕(P<0.05)。

2.3AASV患者AECA與臨床病情活動(dòng)程度的相關(guān)性AECA陽(yáng)性組BVAS分值〔(18.32±6.21)分〕和ESR水平〔(58.31±11.31)mm/h〕明顯高于AECA陰性組〔(8.56±4.32)分，(24.47±8.21)mm/h〕(P<0.05)。

3討論

AASV是中小血管炎癥的類型之一，以血管壁炎癥為主要病理發(fā)病機(jī)制，導(dǎo)致了血管炎癥發(fā)生和器官組織供血異常、組織缺血壞死。由于多種臟器受累及，尚缺乏特異性的AASV診斷及其鑒別診斷、評(píng)價(jià)病情活動(dòng)程度、治療效果和預(yù)后的有效方法。國(guó)內(nèi)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)中小血管炎的發(fā)生率約20/100萬(wàn)〔7〕，并呈逐年上升，但國(guó)內(nèi)尚缺乏有效的統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)。臨床上根據(jù)其炎癥累及血管大小，病理特點(diǎn)、部位和類型評(píng)估其病情活動(dòng)程度，病情較輕者可能表現(xiàn)為皮膚輕微病變，但病情較重的可能影響患者的視力，肺、腎、腦等重要臟器，導(dǎo)致多器官功能異常甚至是嚴(yán)重威脅患者的生命健康。AECA自Lindquist發(fā)現(xiàn)以來(lái)，其在血管炎癥性疾病中的作用機(jī)制成為熱門研究領(lǐng)域〔8〕。相關(guān)研究顯示AECA在血管炎癥性疾病中呈高表達(dá)狀態(tài)，是血管炎癥性病變和血管受損的重要標(biāo)志，其高表達(dá)具有促進(jìn)系統(tǒng)性血管炎癥疾病的發(fā)生和發(fā)展〔9〕。

本研究揭示了血清AECA陽(yáng)性率在AASV的診斷和分類診斷中具有重要的意義，在不同AASV類型中血清AECA陽(yáng)性率差異顯著，與文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果相一致〔10〕。另外血清AECA在病情程度的評(píng)估中具有重要的價(jià)值，與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道具有高度相符性〔11〕。相關(guān)研究表明，緩解期AASV患者AECA陰性，且隨著病情的不斷緩解，其血清AECA水平不斷下降并逐漸趨于正常水平〔12〕。另有研究〔13〕表明，AASV疾病復(fù)發(fā)前期，其血清AECA呈升高趨勢(shì)，AECA持續(xù)陽(yáng)性與復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)明顯相關(guān)。在臨床治療期間，如發(fā)現(xiàn)AECA呈持續(xù)性陽(yáng)性，則應(yīng)維持性給予有效的臨床治療，AECA在指導(dǎo)臨床治療中亦具有重要的作用〔14〕。另一方面， 研究結(jié)果證實(shí)了AECA與AASV患者病情活動(dòng)程度緊密相關(guān)。因此，AECA在AASV患者病情活動(dòng)程度的預(yù)測(cè)中具有重要的價(jià)值。

4參考文獻(xiàn)

1李立明，李金玉，曾小平，等.抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體與抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體聯(lián)合檢測(cè)在診斷血管炎中的應(yīng)用〔J〕.贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011；31(1):38-40.

2李香玲，王炎強(qiáng)，黃琰.ANCA 相關(guān)性小血管炎臨床特征及治療分析〔J〕.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2009;29(20):3912-5.

3劉春生，姚勝萍，王毅.抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體與抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體的臨床應(yīng)用價(jià)值〔J〕.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2009;36(18)：3570-3.

4彭寬，鞠北華，黃清水，等.抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體兩種檢測(cè)方法學(xué)的比較分析〔J〕.實(shí)用醫(yī)技雜志，2014；21(3)：236-9.

5王增玲，商進(jìn)春，李春梅.PAD4在抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體相關(guān)性小血管炎中的作用及意義〔J〕.北京大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2014;46(2)：200-6.

6杜瑩玨，賴蓓，石婧，等.系統(tǒng)性血管炎常用指標(biāo)對(duì)疾病活動(dòng)評(píng)估的意義〔J〕.中國(guó)臨床保健雜志，2014;17(2):113-5.

7王漢萍，鄭文潔，唐福林，等.系統(tǒng)性血管炎患者抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體的臨床意義及其靶抗原〔J〕.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2008;28(10)：1040-4.

8Li MT,Ai J,Tian Z，etal.Prevalence of anti-endothelial cell antibodies in patients with pulmonary arterial hypertension associated with connective tissue diseases〔J〕.Chin Med Sci J,2010;25(1):27-31.

9Régent A,Lofek S,Dib H,etal.Identification of target antigens of anti-endothelial cell antibodies in patients with anti-neutrophil cytoplasmic antibody-associated vasculitides: A proteomic approach〔J〕.Clin Immunol,2014;153(1):123-35.

10Miura K,Aoun K,Yoshida S,etal.Autoantibodies directed against labile epitopes on cell surface proteins in autoimmune disease patients:proposal of a novel ELISA for the detection of anti-endothelial cell antibodies〔J〕.J Immunol Meth,2012;382(1-2):32-9.

11高穎，趙雪，李峰.抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體與自身免疫病〔J〕.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2008;29(5)：450-1.

12陳柏諭，任少敏.抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體與系統(tǒng)性血管炎關(guān)系的研究進(jìn)展〔J〕.臨床兒科雜志， 2013;31(9)：891-3.

13劉秀艷，翟力軍.以腎損害為首發(fā)的ANCA相關(guān)性小血管炎誤診20例〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志，2012；32(15)： 3298-9.

14李香玲，王炎強(qiáng)，趙學(xué)蘭，等.老年ANCA相關(guān)性小血管炎腎損害的臨床分析〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志， 2011；31(17)：3361-2.

〔2014-04-15修回〕

(編輯袁左鳴)