黃露胡長明許明旺王秀萍陳丹

（1華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬梨園醫(yī)院，湖北 武漢 430074；2武漢大學(xué)藥學(xué)院，430072）

HPLC測定人血漿中塞克硝唑的濃度

黃露1胡長明1許明旺1王秀萍1陳丹2

（1華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬梨園醫(yī)院，湖北 武漢 430074；2武漢大學(xué)藥學(xué)院，430072）

目的：建立高效液相色譜法測定人血漿中塞克硝唑的藥物濃度。方法：色譜柱：Thermo ODS-2柱（250 mm ×4.6 mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈-水（20∶80），流速為1.0 m L/min。紫外檢測器檢測波長為310 nm。結(jié)果：人血漿中塞克硝唑線性范圍為0.25～ 100 mg/L，r=0.999 6；平均回收率大于90%，低、中、高濃度樣品的日內(nèi)和日間RSD均小于9.00%，各種條件下血漿樣品的穩(wěn)定性良好。結(jié)論：本法操作簡便快速,靈敏度高,專屬性強(qiáng)，適用于塞克硝唑血藥濃度測定。

塞克硝唑；高效液相色譜法；血藥濃度檢測

塞克硝唑是硝基咪唑類化合物，與甲硝唑、替硝唑具有相似的化學(xué)結(jié)構(gòu)，藥理活性也頗為相似，臨床上可用于治療原蟲（阿米巴、賈第蟲和陰道毛滴蟲）和厭氧菌引起的感染。已有較多文獻(xiàn)報(bào)道采用高效液相色譜法（HPLC）測定血中塞克硝唑的濃度[1-2]，該法簡便、靈敏、準(zhǔn)確，更適用于大樣本的血漿樣本的測定?，F(xiàn)對HPLC測定人血漿中塞克硝唑濃度報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

日本島津 Shimadzu高效液相色譜儀（含LC-20AT泵，SPD-M 20A型紫外檢測器，SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器，LCsolution工作站）；AUW 220D島津分析天平（日本島津公司產(chǎn)品）；XH-C渦旋振蕩器（南京東邁光電儀器有限公司）；高速冷凍離心機(jī)（北京白洋醫(yī)用離心機(jī)有限責(zé)任公司）。

塞克硝唑?qū)φ掌罚兌取?9.0%，批號：130142-200703，中國食品藥品檢定研究院）。內(nèi)標(biāo)：甲硝唑?qū)φ掌罚兌取?9.0%，批號：100152-200902，中國食品藥品檢定研究院）；甲醇、乙腈為色譜純，水為雙蒸水（自制）。

2 方法和結(jié)果

2.1色譜條件

固定相為Thermo ODS-2色譜柱（250 mm× 4.6 mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈-水（20∶80），流速為1.0m L/min，柱溫為25℃，檢測波長：310 nm[3-5]。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液和內(nèi)標(biāo)液的配制

精密稱取塞克硝唑?qū)φ掌愤m量，用甲醇溶解并定容，配得1 000 mg/L標(biāo)準(zhǔn)貯備液，臨用前以甲醇稀釋，得到不同濃度的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密稱取甲硝唑?qū)φ掌罚▋?nèi)標(biāo)）適量，用甲醇溶解并定容，配得 600 mg/L標(biāo)準(zhǔn)貯備液，臨用前用甲醇稀釋至60 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.3 樣品處理

精密吸取血漿樣本200μL于2 m L的離心管內(nèi)，精密加入20μL內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液 （濃度為60 mg/L），渦旋混勻后加入甲醇 0.3 m L，渦旋混勻5 m in，15 000 rpm離心10 m in，取上清液20μL進(jìn)樣，測定塞克硝唑和內(nèi)標(biāo)甲硝唑的峰面積。

2.4 方法專屬性

按上述色譜條件和血漿處理方法，檢測所得色譜圖如圖1。塞克硝唑和內(nèi)標(biāo)甲硝唑的保留時(shí)間分別為 5.7 m in，8.5 m in，峰形較好，血漿中雜質(zhì)不干擾測定。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線和最低定量限

吸取空白血漿180μL，加塞克硝唑系列標(biāo)準(zhǔn)溶液20μL，配制成相當(dāng)于塞克硝唑血藥濃度為0.25，0.5，1，5，10，25，50，80，100 mg/L的血漿樣品，按“樣品處理”項(xiàng)下操作，以待測物與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值（Y）對待測物濃度（C）進(jìn)行回歸運(yùn)算，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：

圖1 塞克硝唑?qū)傩訦PLC圖

Y=0.141C－0.003。

r=0.999 6，線性范圍為0.25～ 100 mg/L，定量下限可達(dá)0.25 mg/L。

2.6 精密度考察和回收率考察

配制終濃度為 1，10，80 mg/L的低、中、高濃度血漿樣本，于同一天內(nèi)測定5次和每天5次連續(xù)測定3天，計(jì)算日內(nèi)、日間精密度及相對回收率。絕對回收率為低、中、高3個(gè)濃度的峰面積與對應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣所得峰面積之比，結(jié)果見表1。同時(shí)得到在中濃度時(shí)內(nèi)標(biāo)甲硝唑絕對回收率為（97.41± 2.01）%。

2.7 穩(wěn)定性

表1 血漿中塞克硝唑的精密度及回收率

配制終濃度為 1，10，80 mg/L的低、中、高濃度血漿樣本，分別對室溫放置穩(wěn)定性（室溫放置6 h后考察）、凍融穩(wěn)定性（反復(fù)凍融 3次）、長期冷凍穩(wěn)定性（-70℃冰箱保存4周）以及血漿樣品處理后穩(wěn)定性（室溫放置12 h）進(jìn)行考察。結(jié)果見表2，各濃度穩(wěn)定性考察的 RSD均小于8.0%，表明血漿樣品在上述條件下放置穩(wěn)定。

表2 塞克硝唑穩(wěn)定性

3 討論

對于分離塞克硝唑和內(nèi)標(biāo)甲硝唑時(shí)流動(dòng)相的選擇比較容易[6-7]，在保證分離完全的前提下提高分析效率，因此選擇乙腈-水的比例為20∶80，樣品在10 min左右完成進(jìn)樣。在沉淀劑的選擇上，考察過乙腈和甲醇的沉淀效果。乙腈容易包裹藥物導(dǎo)致藥物峰面積不穩(wěn)定，最終選擇甲醇作為蛋白沉淀劑。本方法藥物峰形良好，基線平穩(wěn)，定量下限可達(dá)到0.25 mg/L，并且出峰時(shí)間較短，大大提高了分析效率，適合大樣本的分析。

[1] 張錦琳，袁耀佐，錢文，等.HPLC法測定塞克硝唑的含量及有關(guān)物質(zhì)[J].中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，40（6）：527-530.

[2] 孟婷，趙敏，呂韶敏，等.高效液相色譜法測定塞克硝唑中有關(guān)物質(zhì)[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，28（3）：282-283.

[3] 汪鳳梅，蔣程，鄧淑麗，等.高效液相色譜法測定血液和唾液中的塞克硝唑濃度[J].中國藥學(xué)雜志，2009，44（22）：1735-1737.

[4] 尚彬如，陳義強(qiáng)，張麗英，等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定飼料中7種硝基咪唑類藥物[J].中國畜牧雜志，2011，47（13）：66-70.

[5] 孫亞欣，肇麗梅，朱旭，等.高效液相色譜法測定注射用頭孢西酮在健康人血漿和尿中的濃度[J].中國臨床藥理學(xué)雜志，2010，26（5）：372-375.

[6] 陳張好，黃文靜，劉小娟，等.高效液相色譜法測定化妝品中4種硝基咪唑類藥物[J].理化檢驗(yàn) -化學(xué)分冊，2014，50（2）：184-186.

[7] 張金安，郭均平，沈惠，等.HPLC法測定塞克硝唑片的有關(guān)物質(zhì)[J].中國藥師，2011，14（6）：834-835.

Determ ination of Secnidazole Concentration in Plasma by HPLC

Huang Lu1，Hu Changming1，Xu M ingwang1，Wang Xiuping1，Chen Dan2（1 Liyuan Hospital of Tongji Medical College of Huazhong University of Science and Technology，Hubei Wuhan 430074，China；2 School of Pharmaceutical Sciences of Wuhan University，430072）

Objective：To establish a HPLC method for the determination of secnidazole concentration in human plasma.Methods：Liquid chromatography was performed on Thermo ODS-2 column（250 mm×4.6 mm，5μm）. The mobile phase of a mixture of acetonitrile water（20∶80）was used at a flow rate of 1.0 m L/min.The detection wavelength was at 310 nm．Results:A linearity was obtained w ithin the range of secnidazole concentrations from 0.25 to 100 mg/L（r=0.999 6）.The average recovery was more than 90%and the intra-day and inter-day RSDs were less than 9.00%.The stability of plasma samples under different conditions was good.Conclusion：It was proved that the method is easy for operation，it is sensitive and specific for the determ ination of the secnidazole concentrations in plasma．

Secnidazole；HPLC；Plasma Concentration Determ ination

10.3969/j.issn.1672-5433.2015.06.006

2015-02-14）

黃露，女，藥師。研究方向：臨床藥學(xué)。E-mail：282668237@qq.com

王秀萍，女，副主任藥師。研究方向：臨床藥學(xué)、醫(yī)院藥學(xué)。通訊作者E-mail：meiwang916665@126.com