賈小艷，陳勤，李飛，馮偉，杜靖

（1.新疆醫(yī)科大學(xué)厚博學(xué)院，新疆烏魯木齊 830011；2.新疆醫(yī)科大學(xué)高職學(xué)院機(jī)能教研室，新疆烏魯木齊 830011；3.武警新疆總隊(duì)醫(yī)院，新疆烏魯木齊 830091）

硫氫化鈉預(yù)處理大鼠腎缺血再灌注損傷對(duì)肝臟組織的影響*

賈小艷1，陳勤2，李飛3，馮偉1，杜靖2

（1.新疆醫(yī)科大學(xué)厚博學(xué)院，新疆烏魯木齊 830011；2.新疆醫(yī)科大學(xué)高職學(xué)院機(jī)能教研室，新疆烏魯木齊 830011；3.武警新疆總隊(duì)醫(yī)院，新疆烏魯木齊 830091）

目的探討硫氫化鈉（NaHS）預(yù)處理大鼠腎缺血再灌注損傷（RIRI）對(duì)肝臟組織的影響。方法清潔級(jí)雄性Wistar大鼠30只，體重250～300 g，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為5組（n=6）：假手術(shù)組（S組）、腎缺血90 min再灌注60 min組（I/R 1組）、腎缺血120 min再灌注60 min組（I/R 2組）、NaHS+腎缺血90 min組（A組）、NaHS+腎缺血120 min組（B組）。采用右腎切除后左腎分別缺血90和120 min再灌注60 min的方法制備RIRI模型。A、B組于再灌注前20 min腹腔注射NaHS 100μg/kg，其余同I/R 1、2組。再灌注結(jié)束時(shí)腹主動(dòng)脈采血3 ml，檢測(cè)血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）含量，并取腎、肝臟組織，光鏡下觀察病理結(jié)果，酶聯(lián)免疫法（ELISA）檢測(cè)硫化氫（H2S）含量，肝臟組織采用硫代巴比妥酸顯色法檢測(cè)丙二醛（MDA）含量，二硫二硝基苯甲酸法檢測(cè)谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）活性。結(jié)果與S組比較，I/R 1、2組血清中Scr、BUN、ALT、AST含量升高，腎、肝臟組織H2S含量降低，肝臟組織MDA含量升高，GSH-Px活性降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），腎臟及肝臟組織出現(xiàn)病理?yè)p傷。與I/R 1組比較，I/R 2組血清中Scr、BUN含量升高，A組血清中ALT、AST含量降低，腎與肝臟組織H2S含量升高，肝臟組織MDA含量降低，GSH-Px活性升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），腎臟及肝臟組織病理?yè)p傷減輕。與I/R 2組比較，B組血清中ALT、AST含量降低，腎與肝臟組織H2S含量升高，肝臟組織MDA含量降低，GSH-Px活性升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），腎臟及肝臟組織病理?yè)p傷減輕。結(jié)論大鼠RIRI誘發(fā)遠(yuǎn)隔器官肝臟組織損傷與組織內(nèi)H2S含量降低有關(guān)，外源性NaHS可減輕大鼠RIRI引起的遠(yuǎn)隔器官肝臟組織損傷，其機(jī)制與抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用有關(guān)。

硫氫化鈉；腎缺血再灌注損傷；肝臟組織；丙二醛；谷胱甘肽過(guò)氧化物酶

腎缺血再灌注損傷（renal ischemia-reperfusion injury，RIRI）即腎臟在缺血的基礎(chǔ)上恢復(fù)血流，組織損傷進(jìn)一步加重［1］。腎臟由于其功能及血流分布特點(diǎn)，使其對(duì)缺血及缺血再灌注敏感，RIRI是臨床上導(dǎo)致急性腎小管壞死和腎移植失敗的重要因素［2］。許多研究顯示［3-4］，RIRI不僅損傷原位組織器官，還會(huì)誘發(fā)遠(yuǎn)隔器官損傷，嚴(yán)重影響疾病的轉(zhuǎn)歸及預(yù)后。因此，研究防治RIRI及對(duì)遠(yuǎn)隔器官的影響，對(duì)解決臨床實(shí)際問(wèn)題有積極的指導(dǎo)意義。

硫化氫（hydrogen sulfide，H2S）作為體內(nèi)新型的氣體信號(hào)分子，廣泛參與機(jī)體多器官系統(tǒng)的功能調(diào)節(jié)。多項(xiàng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究顯示［5-6］，外源性H2S供體硫氫化鈉（sodium hydrosulphide，NaHS）對(duì)組織器官缺血再灌注及遠(yuǎn)隔器官有保護(hù)作用，但其機(jī)制尚不清楚。本研究通過(guò)給予NaHS溶液對(duì)不同時(shí)間RIRI模型大鼠進(jìn)行缺血前預(yù)處理，擬探討H2S對(duì)不同時(shí)間RIRI大鼠肝臟組織的影響及機(jī)制，為RIRI的防治提供新手段。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組

清潔級(jí)Wistar雄性大鼠30只，由新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，體重250～300 g，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為5組（n=6）：假手術(shù)組（S組）、缺血90 min再灌注60 min組（I/R 1組）、缺血120 min再灌注60 min組（I/R 2組）、NaHS+腎缺血90 min組（A組）、NaHS+腎缺血120 min組（B組），實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前禁食12 h，自由飲水。

1.2 不同時(shí)間RIRI模型制備

10 %水合氯醛（0.5 ml/100 g）腹腔注射麻醉大鼠后，鼠臺(tái)固定，沿腹白線開(kāi)腹約5 cm，鈍性分離皮下組織與筋膜，暴露腹腔。S組游離雙側(cè)腎蒂，只穿線，不結(jié)扎。I/R 1組暴露右腎及腎蒂，雙線結(jié)扎后切除右腎作為自身對(duì)照，再暴露左腎及腎蒂，分離腎包膜及左腎動(dòng)脈，用1根絲線將開(kāi)口一面朝上的塑料軟管和動(dòng)脈固定好，可見(jiàn)左腎顏色由鮮紅變?yōu)榘导t，腎缺血模型成功，缺血90 min后沿塑料管先前的切口剪開(kāi)絲線，恢復(fù)動(dòng)脈血供，若腎臟顏色逐漸由暗紅變成鮮紅色表明再灌注成功。I/R 2組缺血120 min后恢復(fù)組織血供，余操作與I/R 1組相同。A、B組于再灌注前20 min腹腔注射NaHS 100μg/kg（Sigma公司，美國(guó)），余操作同I/R 1、2組；S組、I/R 1組和I/R 2組以等容量生理鹽水替代NaHS。操作完成后關(guān)閉腹腔，并于腹部覆蓋紗布，手術(shù)燈光照射以保溫并計(jì)時(shí)。

1.3 觀察指標(biāo)

再灌注60 min結(jié)束時(shí)打開(kāi)腹腔，實(shí)驗(yàn)各組大鼠均腹主動(dòng)脈采血3 ml，緩慢注入EP管，TGL-20M離心機(jī)（成都泰盟儀器公司）4℃、3000r/min離心10min后取上清液。意大利AUTOLAB自動(dòng)生化儀檢測(cè)血清肌酐（serum creatinine，Scr）、尿素氮（blood urea nitrogen BUN）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine amino transferase，ALT）和門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aepartate aminotransferase，AST）含量。采集完血樣，斷頭處死大鼠，取左腎后將切口向大鼠頭端延長(zhǎng)，取肝臟左上葉。從中間剖開(kāi)腎臟，與肝臟組織一同置于冷磷酸鹽溶液（0.1 mol/L，pH值7.4）中沖洗干凈并吸干表面水分，取腎下極和肝臟組織各一塊置于10%中性甲醛溶液中固定，常規(guī)石蠟包埋、切片，HE染色，光學(xué)顯微鏡BX51（Olympus公司，日本）觀察病理變化。冰板上留取相同部位腎、肝臟組織各0.5 g，MP-2002分析天平（上海梅特勒托利多儀器有限公司）稱重并以1∶9比例加入冷生理鹽水，ZS-83-1型內(nèi)切式組織勻漿器（成都泰盟儀器公司）制備組織勻漿，低溫3 500 r/min離心10 min，取上清液，WD-2102A型自動(dòng)酶標(biāo)儀（北京六一儀器廠）、酶聯(lián)免疫法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測(cè)H2S含量，硫代巴比妥酸顯色法檢測(cè)肝組織中丙二醛（malonaldehyde，MDA）含量，二硫二硝基苯甲酸法檢測(cè)谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）活性（南京建成生物工程研究所）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，方差齊比較用單因素方差分析，組間兩兩比較用LSD法，方差不齊用秩和檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肝、腎組織形態(tài)學(xué)變化

2.1.1 肝臟組織①S組肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)組織正常，肝細(xì)胞排列整齊，細(xì)胞核染色較淺，核質(zhì)分布均勻，呈球形（見(jiàn)圖1）；②I/R 1組肝小葉結(jié)構(gòu)存在，部分肝細(xì)胞核濃縮，部分肝竇擴(kuò)張（見(jiàn)圖2）；③I/R 2組肝小葉結(jié)構(gòu)存在，肝細(xì)胞顯著水腫，肝細(xì)胞脂肪變性，肝竇擴(kuò)張，枯否細(xì)胞輕度增生（見(jiàn)圖3）；④A組肝小葉結(jié)構(gòu)存在，個(gè)別肝細(xì)胞脂肪變性，枯否細(xì)胞輕度增生（見(jiàn)圖4）；⑤B組肝小葉結(jié)構(gòu)存在，肝細(xì)胞點(diǎn)、灶狀壞死，肝竇擴(kuò)張，枯否細(xì)胞輕度增生，匯管區(qū)輕度擴(kuò)大，見(jiàn)少許淋巴細(xì)胞及漿細(xì)胞增生（見(jiàn)圖5）。

2.1.2 腎臟組織①S組腎單位結(jié)構(gòu)正常（見(jiàn)圖6）；②I/R 1組腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮輕度增生，腎小球球囊腔輕度增寬，腎小管上皮輕度水腫、空泡變性（見(jiàn)圖7）；③I/R 2組腎小管上皮顯著水腫，空泡變性，個(gè)別腎小管上皮細(xì)胞核消失，間質(zhì)血管增生、擴(kuò)張充血（見(jiàn)圖8）；④A組腎小囊擴(kuò)張，腎小管細(xì)胞變性程度減輕，未見(jiàn)明顯異常（見(jiàn)圖9）；⑤B組腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞輕度增生，腎小管上皮輕度水腫（見(jiàn)圖10）。

2.2 肝、腎組織功能變化

圖1 S組肝組織（HE×40）

圖2 I/R 1組肝組織（HE×40）

圖3 I/R 2組肝組織（HE×40）

圖4 A組肝組織（HE×40）

圖5 B組肝組織（HE×40）

圖6 S組腎組織（HE×40）

圖7 I/R 1組腎組織（HE×40）

圖8 I/R 2組腎組織（HE×40）

圖9 A組腎組織（HE×40）

圖10 B組腎組織（HE×40）

與S組比較，I/R 1組和I/R 2組血清中Scr、BUN、ALT、AST含量升高；與I/R 1組比較，I/R 2組血清中Scr、BUN含量升高，A組血清中ALT、AST含量降低；與I/R 2組比較，B組血清中ALT、AST含量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。方差齊性檢驗(yàn)顯示，F(xiàn)Scr=0.982，P=0.397；FBUN=0.316，P=0.734；FALT=0.181，P=0.947；FAST=1.595，P=0.207。單因素方差分析顯示，F(xiàn)Scr=13.743，P=0.000；FBUN=155.072，P= 0.000；FALT=1235.374，P=0.000；FAST=1 254.459，P= 0.000。見(jiàn)表1、2。

2.3 肝、腎組織勻漿H2S含量

與S組左腎比較，I/R 1、2組自身對(duì)照右腎組織H2S含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與S組左腎比較，肝、腎組織H2S含量降低；與I/R 1組比較，A組肝、腎組織H2S含量升高；與I/R 2組比較，B組肝、腎組織H2S含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。方差齊性檢驗(yàn)顯示，F(xiàn)肝組織=0.925，P=0.464；F腎組織= 0.612，P=0.657。單因素方差分析顯示，F(xiàn)肝組織=35.805，P=0.000；F腎組織=11.077，P=0.000。見(jiàn)表3。

表1 大鼠血清Scr、BUN含量比較（n=6，±s）

表1 大鼠血清Scr、BUN含量比較（n=6，±s）

注：1）與I/R 1組比較，P=0.005；2）與I/R 1組比較，P=0.000；3）與I/R 2組比較，P=0.046；4）與I/R 2組比較，P=0.003；5）與S組比較，P=0.000

組別Scr/（μmol/L）BUN/（mmol/L）S組126.28±4.221）3.99±0.282）I/R 1組140.71±10.213）7.24±0.524）I/R 2組150.76±6.235）8.06±0.345）

表2 大鼠血清ALT、AST含量比較（n=6，u/L，±s）

表2 大鼠血清ALT、AST含量比較（n=6，u/L，±s）

注：1）與I/R 1組比較，P=0.000；2）與I/R 2組比較，P=0.056；3）與I/R 2組比較，P=0.060；4）與S組比較，P=0.000；5）與I/R 1組比較，P=0.040；6）與I/R 1組比較，P=0.048；7）與I/R 2組比較，P= 0.047；8）與I/R 2組比較，P=0.000

組別ALTAST S組32.41±3.591）51.43±3.351）I/R 1組151.47±3.892）250.70±3.323）I/R 2組154.60±4.864）253.10±4.524）A組144.60±3.675）206.70±5.936）B組148.59±3.617）238.75±9.778）

2.4 肝臟組織勻漿MDA含量及GSH-Px活性

與S組比較，肝臟組織MDA含量升高，GSH-Px活性降低；與I/R 1組比較，A組肝臟組織MDA含量降低，GSH-Px活性升高；與I/R 2組比較，B組肝臟組織MDA含量降低，GSH-Px活性升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。方差齊性檢驗(yàn)顯示，F(xiàn)MDA=2.535，P=0.65；FGSH-Px=2.489，P=0.076。單因素方差分析顯示，F(xiàn)MDA=8.599，P=0.000；FGSH-Px=18.407，P=0.000。見(jiàn)表4。

表3 大鼠肝、腎組織中H2S含量比較（n=6，pg/ml，±s）

表3 大鼠肝、腎組織中H2S含量比較（n=6，pg/ml，±s）

注：1）與I/R 1組比較，P=0.001；2）與I/R 1組比較，P=0.000；3）與I/R 2組比較，P=0.524；4）與I/R 2組比較，P=0.041；5）與S組比較，P=0.000；6）與I/R 1組比較，P=0.046；7）與I/R 1組比較，P=0.000；8）與I/R 2組比較，P=0.000；9）與I/R 2組比較，P=0.046

組別腎肝S組319.65±27.151）387.29±20.562）I/R 1組265.13±24.193）361.50±19.944）I/R 2組258.81±21.365）339.45±16.125）A組279.61±18.266）394.77±32.327）B組286.79±13.998）360.28±43.759）

表4 大鼠肝臟組織MDA含量、GSH-Px活性比較（n=6，±s）

表4 大鼠肝臟組織MDA含量、GSH-Px活性比較（n=6，±s）

注：1）與I/R 1組比較，P=0.000；2）與I/R 2組比較，P=0.054；3）與I/R 2組比較，P=0.066；4）與S組比較，P=0.045；5）與S組比較，P= 0.000；6）與I/R 1組比較，P=0.044；7）與I/R 1組比較，P=0.036；8）與I/R 2組比較，P=0.039；9）與I/R 2組比較，P=0.030

組別MDA/（nmol/mg pro）GSH-Px/（u/g pro）S組9.37±3.921）1.55±0.061）I/R 1組14.68±1.502）0.99±0.173）I/R 2組16.38±1.454）0.95±0.175）A組11.95±1.766）1.20±0.127）B組13.07±1.458）1.29±0.089）

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用右腎切除和左腎結(jié)扎后再灌注方法制備RIRI模型［7］，張榮等［8］選擇腎缺血90和120 min后再灌注60min作為RIRI組，通過(guò)檢測(cè)血清Scr、BUN含量及腎組織病理形態(tài)學(xué)改變驗(yàn)證制備模型。本研究中，與S組大鼠相比，I/R 1、2組血清Scr、BUN含量升高，腎組織有病理?yè)p傷，腎功能受損，與報(bào)道一致［9-10］，說(shuō)明RIRI模型制備成功。

RIRI是一個(gè)十分復(fù)雜的病理生理過(guò)程，氧自由基產(chǎn)量大于腎臟自身抗氧化防御系統(tǒng)可引起脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和DNA損傷，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞功能障礙以及組織損傷［11］。肝臟是人體內(nèi)最大的實(shí)質(zhì)性臟器，血流量大，易受循環(huán)中的有害物質(zhì)影響而致肝臟病理及肝功能損傷，因此本實(shí)驗(yàn)選擇肝臟作為RIRI的遠(yuǎn)隔器官。RIRI造成遠(yuǎn)隔器官肝臟組織損傷機(jī)制尚不明確，推測(cè)可能機(jī)制為來(lái)源于腎臟的各種化學(xué)物質(zhì)包括氧自由基、細(xì)胞因子、黏附分子等大量進(jìn)入體循環(huán)。

MDA是不飽和脂肪酸過(guò)氧化分解的終產(chǎn)物，其含量的高低不僅可以直接反映體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化的強(qiáng)度和速率，還可以間接反應(yīng)組織或細(xì)胞損傷的嚴(yán)重程度，常被作為判斷缺血再灌注損傷的重要依據(jù)［12］。GSH-Px是機(jī)體內(nèi)廣泛存在的一種重要的過(guò)氧化物分解酶，能催化還原型谷胱甘肽（glutathione，GSH）變?yōu)檠趸虶SH，使有毒的過(guò)氧化物還原成無(wú)毒的羥基化合物，同時(shí)促進(jìn)雙氧水H2O2的分解，從而保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)及功能不受過(guò)氧化物的干擾和損害［13］。本研究選擇上述2項(xiàng)指標(biāo)，以探討RIRI對(duì)遠(yuǎn)隔器官肝臟組織的影響是否與氧化應(yīng)激有關(guān)，并以血清ALT、AST含量高低反映肝功能的受損程度。結(jié)果顯示，與S組比較，I/R 1、2組血清ALT、AST含量升高，肝臟組織MDA含量升高，GSH-Px活性降低，肝、腎組織形態(tài)學(xué)出現(xiàn)損傷，提示大鼠RIRI可誘發(fā)肝臟組織損傷，其機(jī)制與抗氧化有關(guān)。因此針對(duì)抗氧化進(jìn)行的靶向治療可能對(duì)減輕RIRI誘發(fā)的遠(yuǎn)隔器官損傷具有一定的作用。

H2S作為一種氣體信號(hào)分子，在體內(nèi)1/3以氣體H2S形式，2/3以NaHS形式存在。NaHS在體內(nèi)通過(guò)解離作用與H2S形成一種動(dòng)態(tài)平衡，且NaHS濃度便于精確定量H2S濃度，因此本研究以NaHS作為H2S供體。本實(shí)驗(yàn)前期研究中，外源性給予NaHS 100μg/kg能明顯升高腎臟組織中H2S濃度，但對(duì)正常大鼠腎功能無(wú)顯著影響，也不引起形態(tài)學(xué)改變。前期結(jié)果中H2S對(duì)RIRI大鼠腎組織及遠(yuǎn)隔器官腦組織有保護(hù)作用，其在腎、腦組織的含量高低與其損傷程度有關(guān)，但其機(jī)制尚不清楚。多項(xiàng)研究表明［14-16］，H2S可通過(guò)抗氧化作用減輕缺血再灌注組織、細(xì)胞損傷。本實(shí)驗(yàn)中，分別給予I/R 1、2組大鼠再灌注前20 min腹腔注射NaHS溶液，檢測(cè)血清ALT、AST含量及肝臟組織MDA含量、GSH-Px活性，觀察肝、腎組織病理改變并檢測(cè)其H2S含量，研究RIRI大鼠引起的原位器官和遠(yuǎn)隔器官肝臟組織損傷是否與內(nèi)源性H2S含量變化有關(guān)，給予外源性H2S供體是否可改善原位器官和遠(yuǎn)隔器官肝臟組織損傷，這種改善是否與抗氧化機(jī)制有關(guān)。研究結(jié)果顯示，與I/R1組比較，A組血清中ALT、AST含量降低，肝、腎組織H2S含量升高，肝臟組織MDA含量降低，GSH-Px活性升高，肝、腎組織病理?yè)p傷減輕。與I/R 1組比較，I/R 2組血清Scr、BUN含量升高，肝臟組織H2S含量下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；I/R 2組肝、腎組織病理?yè)p傷表現(xiàn)更明顯。I/R 1、2組血清ALT和AST含量、肝臟組織MDA含量、GSH-Px活性、腎組織H2S含量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，考慮與I/R 1、2組缺血時(shí)間相差較小有關(guān)，為今后的實(shí)驗(yàn)方向提供思路。與I/R 2組比較，B組血清中ALT、AST含量降低，肝、腎組織H2S含量升高，肝臟組織MDA含量降低，GSH-Px活性升高，肝、腎組織病理學(xué)損傷減輕，提示大鼠RIRI誘發(fā)的遠(yuǎn)隔器官肝臟組織損傷與組織內(nèi)H2S含量降低有關(guān)；外源性NaHS可減輕大鼠不同時(shí)間RIRI引起的遠(yuǎn)隔器官肝臟組織損傷，其機(jī)制與抗氧化有關(guān)。

目前，H2S的抗氧化損傷作用機(jī)制尚不明確，近年來(lái)的實(shí)驗(yàn)研究指出：①H2S可通過(guò)激活核因子網(wǎng)織紅細(xì)胞相關(guān)因子-2（nuclear factor cry-throid-2-related factor 2，Nrf-2）信號(hào)分子活性，調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)氧化還原環(huán)境起到抗氧化作用［17-19］；②H2S通過(guò)下調(diào)NADH氧化酶活性，抑制活性氧物質(zhì)產(chǎn)生［20］；③H2S通過(guò)提高細(xì)胞內(nèi)還原型谷胱甘肽的生成能力及線粒體中谷胱甘肽的比重，提高抗氧化能力［14］。

綜上所述，大鼠RIRI誘發(fā)的遠(yuǎn)隔器官肝臟組織損傷與組織內(nèi)H2S含量降低有關(guān)，且隨著腎缺血時(shí)間延長(zhǎng)，再灌注后腎組織及遠(yuǎn)隔器官肝臟組織損傷加重，過(guò)氧化物水平升高。外源性NaHS可減輕不同時(shí)間RIRI引起的大鼠遠(yuǎn)隔器官肝臟組織損傷，其機(jī)制與抗氧化有關(guān)。

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（申海菊編輯）

Effect of sodium hydrosulfide preconditioning on hepatic tissue following renal ischemia-reperfusion injury in rats*

Xiao-yan JIA1,Qin CHEN2,Fei LI3,Wei FENG1,Jing DU2
（1.Houbo College,Xinjiang Medical University,Urumqi,Xinjiang 830011,P.R.China;2. Department of Medical Physiology&Biochemistry,Higher Vocational College,Xinjiang Medical University,Urumqi,Xinjiang 830011,P.R.China;3.Xinjiang Corps Hospital of the Chinese People's Armed Police Force,Urumqi,Xinjiang 830091,P.R.China）

【Objective】To observe the effect of sodium hydrosulfide（NaHS）on hepatic tissue following renal ischemia-reperfusion injury（RIRI）in rats.【Methods】Thirty male Wistar rats weighing 250～300 g were randomized into 5 groups（6 in each group）using a random number table:sham operation group（group S）; group I/R 1 with 60 min reperfusion following 90 min ischemia;group I/R 2 with 60 min reperfusion following 120 min ischemia;group A with NaHS+60 min reperfusion following 90 min ischemia and group B with NaHS+60 min reperfusion following 120 min ischemia.RIRI was induced by right nephrectomy and occlusion of the left kidney artery for about 90 min or 120 min followed by 60 min reperfusion in rats anesthetized with intraperitoneal chloral hydrate.NaHS 100 μg/kg was injected intraperitoneally 20 min before ischemia in the groups A and B,and the rest procedures were similar to those previously described in the groups I/R 1 and I/R 2.Blood samples were collected at the end of reperfusion to determine serum creatinine（Scr）,blood urea nitrogen（BUN）,alanine aminotransferase（ALT）and aspartate aminotransferase（AST）concentrations.Kidney and hepatic tissue were removed for microscopic examination.The content of H2S was determined in the renal and hepatic tissuethrough enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）.The content of malonaldehyde（MDA） was determined in the hepatic tissue through thiobarbituric acid method and the activity of glutathione peroxidase（GSH-PX）through 5,5-dithio-bis-2-nitrobenzoic acid（DTNB）method.【Results】Compared with the group S,serum Scr,BUN,ALT and AST concentrations were significantly increased,the content of H2S in the renal and hepatic tissue was significantly decreased,the MDA concentration of hepatic tissue was significantly increased and GSH-PX concentration was significantly decreased in the groups I/R 1 and I/R 2（P＜0.05）.Microscopic examination showed that both kidney tissue and hepatic tissue were severely damaged. Compared with the group I/R 1,serum Scr and BUN concentrations were significantly increased（P＜0.05）; ALT and AST concentrations were significantly decreased,the content of H2S in the renal and hepatic tissue was significantly increased,the MDA concentration of hepatic tissue was significantly decreased and GSH-PX concentration was significantly increased in the group I/R 2（P＜0.05）and the pathological changes of both kidney tissue and hepatic tissue were significantly attenuated.Compared with the group I/R 2,ALT and AST concentrations were significantly decreased,the content of H2S in the renal and hepatic tissue was significantly increased,the MDA concentration of hepatic tissue was significantly decreased and GSH-PX concentration was significantly increased in the group B（P＜0.05）and the pathological changes of both kidney tissue and hepatic tissue were significantly attenuated.【Conclusions】Hepatic tissue injury induced by renal ischemiareperfusion in rats is associated with decrease in hydrogen sulfide content of tissue.Exogenous NaHS can attenuate hepatic tissue injury induced by renal ischemia-reperfusion in rats and antioxidant system is involved in the mechanism.

hydrogen sulfide;renal ischemia-reperfusion injury;hepatic tissue;malonaldehyde;glutathione peroxidase

R364.1

A

1005-8982（2015）23-0007-06

2015-02-09

新疆醫(yī)科大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)計(jì)劃項(xiàng)目（No：CX2015085）

杜靖，E-mail：dujingzhw@qq.com