李 云，鄒佩霞，姚 遠(yuǎn)，朱克剛，祁 濤

(1.湖北省十堰市太和醫(yī)院(湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院),湖北 十堰 442000；2.湖北醫(yī)藥學(xué)院,湖北 十堰 442000；3.河南省平煤神馬醫(yī)療集團(tuán)總醫(yī)院，河南 平頂山 467099)

參麥注射液對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用

李 云1，鄒佩霞1，姚 遠(yuǎn)1，朱克剛2，祁 濤3

(1.湖北省十堰市太和醫(yī)院(湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院),湖北 十堰 442000；2.湖北醫(yī)藥學(xué)院,湖北 十堰 442000；3.河南省平煤神馬醫(yī)療集團(tuán)總醫(yī)院，河南 平頂山 467099)

目的 觀察參麥注射液對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。方法 選取8只健康大鼠為對(duì)照組，另16只大鼠采用結(jié)扎左側(cè)冠狀動(dòng)脈前降支30min后松解扎扣再灌注60min以制作心肌缺血再灌注損傷模型，并隨機(jī)分為模型組及參麥組。3組大鼠均經(jīng)尾靜脈分別注射生理鹽水或參麥注射液，于給藥前及給藥后1周、2周分別測(cè)定血清肌酸激酶(CK)、血清丙二醛(MDA)、總超氧化物歧化酶(T-SOD)、內(nèi)皮素-1(ET-1)及一氧化氮(NO)含量，并于治療2周后測(cè)量心肌缺血面積。結(jié)果 模型組大鼠造模后MDA、CK及ET-1含量均明顯增高(P均<0.05)，T-SOD及NO含量明顯下降(P均<0.05)。在應(yīng)用參麥注射液后，MDA、CK及ET-1含量均有不同程度的降低(P均<0.05)，T-SOD及NO含量均增高(P均<0.05)，且心肌缺血面積低于模型組(P<0.05)。結(jié)論 參麥注射液對(duì)大鼠缺血再灌注損傷有一定的防治作用，其作用機(jī)制可能是提高自由基清除酶活性，促進(jìn)NO產(chǎn)生以清除氧自由基,減少脂質(zhì)過(guò)氧化，改善再灌注損傷血管內(nèi)皮功能紊亂。

參麥注射液；心肌缺血再灌注；丙二醛；血清肌酸激酶；總超氧化物歧化酶；一氧化氮

心肌缺血再灌注損傷臨床常見(jiàn)于心肌梗死、冠脈搭橋術(shù)、冠脈溶栓術(shù)、再通術(shù)等[1]，臨床主要表現(xiàn)為心律失常及血清心肌酶譜升高等[2]。參麥注射液經(jīng)現(xiàn)代工藝加工而成，由紅參和麥冬兩味中藥組成，主要有效成分為人參皂甙、麥冬皂甙等，方中紅參具剛健溫燥之性，最能振奮元?dú)?麥冬可養(yǎng)陰潤(rùn)肺，益胃生津，清心除煩[3]。該藥具有益氣固脫、養(yǎng)陰生津、生脈之功效。臨床應(yīng)用已證實(shí)其可改善微循環(huán)，擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，增加冠脈流量，清除氧自由基，降低心肌耗氧量，提高心、腦供血不足等缺血耐受性[4]。本實(shí)驗(yàn)采用大鼠心肌缺血再灌注損傷模型，經(jīng)尾靜脈注射給藥，系統(tǒng)觀察了該藥對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的影響,旨在為其臨床治療閉塞性血管疾病如冠心病、腦梗死、心肌梗死等提供實(shí)驗(yàn)及理論依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)資料

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Wistar大鼠24只，體質(zhì)量160～200 g，由湖北醫(yī)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施使用許可證SYXK(鄂)2011-0031，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證SCXK(鄂)2011-0008。

1.2 儀器及藥品 參麥注射液(杭州正大青春寶藥業(yè)有限公司，10 mL/支，國(guó)藥準(zhǔn)字Z330220021，批號(hào)：010873)。血清肌酸激酶(CK)、血清丙二醛(MDA)、總超氧化物歧化酶(T-SOD )檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所；內(nèi)皮素-1(ET-1)及一氧化氮(NO)試劑盒均購(gòu)自杭州達(dá)文生物有限公司。

1.3 分組及大鼠心肌缺血模型制備 選取8只健康大鼠作為對(duì)照組，另16只按文獻(xiàn)[5]方法分別制備心肌缺血?jiǎng)游锬Ｐ停⒉捎秒S機(jī)數(shù)字表編號(hào)隨機(jī)分為模型組、參麥組。所有動(dòng)物在造模前夜停止喂食，不禁水，采用腹腔注射2%戊巴比妥鈉(120 mg/kg )方法將已分組的大鼠麻醉，仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)，在胸骨左緣第4—5肋間隙開(kāi)胸暴露心臟，術(shù)中保持胸膜完整，接小動(dòng)物呼吸機(jī)，以絲線距心臟根部0.2 cm處結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支30 min后松解扎扣復(fù)灌60 min，反復(fù)3次后抽出絲線關(guān)閉胸腔，造成大鼠心肌缺血?jiǎng)游锬Ｐ汀?duì)照組僅開(kāi)胸但不結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支造模。參麥組再灌注即刻，尾靜脈注射參麥注射液4mL/(kg·d)[按成人體表面積換算：大鼠(200 g)/人(70 kg)=0.018/1]，連續(xù)給藥2周；模型組及對(duì)照組術(shù)后即刻尾靜脈注射0.9%氯化鈉注射液4mL/(kg·d)，連續(xù)給藥2周。

1.4 檢測(cè)指標(biāo) 參照文獻(xiàn)[6]方法，3組大鼠于再灌注前及給藥1周、2周后經(jīng)耳靜脈取血，靜置1 h后置于高速離心機(jī)，按5 000 r/min離心10 min后, 取上清液，按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作檢測(cè)CK、MDA、T-SOD、ET-1及NO含量。于第2周取血畢后斷頭處死動(dòng)物，剪開(kāi)胸腔暴露心臟找到胸主動(dòng)脈，用1%伊該文思藍(lán)1 mL經(jīng)由主動(dòng)脈行注入左心室，剪下心臟，剔除心房及右室擴(kuò)藍(lán)染區(qū)域，-20 ℃冰凍2 min，經(jīng)HE染色秤左心室質(zhì)量并測(cè)定梗死范圍。

2 結(jié) 果

2.1各組血清CK及MDA含量比較 對(duì)照組血清CK及MDA含量給藥后無(wú)明顯變化，模型組給藥1周和給藥2周血清CK及MDA含量均明顯高于對(duì)照組(P均<0.05)。參麥組給藥1周和給藥2周血清CK及MDA含量均明顯低于模型組(P均<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 各組血清MDA及CK含量比較

注：①與對(duì)照組比較，P<0.05；②與模型組比較，P<0.05。

2.2 各組血清T-SOD、ET-1及NO含量比較 對(duì)照組T-SOD、ET-1及NO含量給藥后無(wú)明顯變化；模型組給藥1周和給藥2周血清T-SOD及NO含量均明顯低于對(duì)照組(P均<0.05)， ET-1含量明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。參麥組給藥1周和2周后血清T-SOD及NO含量均明顯高于模型組(P均<0.05)， ET-1含量顯著低于模型組(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 各組血清T-SOD、ET-1及NO含量比較

注：①與對(duì)照組比較，P<0.05；②與模型組比較，P<0.05。

2.3 各組心肌缺血情況比較 2周后測(cè)得對(duì)照組心肌無(wú)梗死現(xiàn)象。參麥組心肌梗死范圍及壞死區(qū)質(zhì)量均明顯低于模型組(P均<0.05)。見(jiàn)表3。

3 討 論

氧自由基化學(xué)性質(zhì)極為活潑，正常情況下，氧自由基的生成與清除維持著動(dòng)態(tài)平衡，當(dāng)心肌缺血再灌注時(shí)，常引起氧自由基的爆發(fā)產(chǎn)生，氧自由基的毒性反應(yīng)極其強(qiáng)烈[7]，此時(shí)機(jī)體會(huì)產(chǎn)生大量MAD、CK及 ET-1，由于Ca2+-ATP酶活性降低，造成細(xì)胞膜基本特征的改變，引起細(xì)胞代謝和功能障礙，甚至死亡，生化指標(biāo)則反映在T-SOD酶活性及NO合成降低。血管內(nèi)皮細(xì)胞能合成和分泌多種生物活性物質(zhì)，如NO、ET-1等，它們可維持血管的正常舒縮狀態(tài)，改善冠心病心肌缺血患者冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮功能,增加冠狀動(dòng)脈血流[8]。CK是一種存在于心肌細(xì)胞內(nèi)的蛋白酶，當(dāng)心肌細(xì)胞損傷或壞死時(shí)，CK便可通過(guò)受損的細(xì)胞膜釋放到血液中，因此CK可以作為反映心肌壞死程度的指標(biāo)。在生理情況下，NO可舒張血管，抑制ET-1收縮血管作用，且相對(duì)維持動(dòng)態(tài)平衡，保證了血管正常的舒縮功能。內(nèi)皮細(xì)胞釋放的NO對(duì)血管內(nèi)皮本身具有重要的保護(hù)作用，在缺血再灌注時(shí)血管內(nèi)皮合成和釋放NO不足，使其拮抗ET-1作用減弱，此時(shí)循環(huán)血中ET-1含量增加，對(duì)血管保護(hù)作用減弱而造成缺血再灌注損傷。

表3 造模2周后大鼠心肌缺血情況

注：①與模型組比較，P<0.05。

近年來(lái)心肌缺血再灌注損傷的防治已取得了明確的成果, 大量中草藥被應(yīng)用到臨床防治缺血再灌注損傷，其中參麥注射液在臨床上大量應(yīng)用并取得可靠療效。參麥注射液不僅能促進(jìn)Ca2+-ATP酶活性恢復(fù),增強(qiáng)鈉鉀ATP酶活力,減少細(xì)胞內(nèi)鈣超載,還通過(guò)Na+，K+-ATP酶調(diào)節(jié)鈉氫交換來(lái)抑制鈉鈣交換,阻止Ca2+內(nèi)流,改善心肌組織能量代謝[9]；其還具有活血化瘀、改善微循環(huán)、增加冠脈灌注和心肌供氧作用[10]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組大鼠造模后MDA、CK及ET-1含量均明顯增高，T-SOD及NO含量明顯下降。在應(yīng)用參麥注射液后，MDA、CK及ET-1含量均有不同程度的降低，T-SOD及NO含量均增高，且心肌缺血面積低于模型組，說(shuō)明參麥注射液可有效抑制缺血再灌注大鼠MDA、CK的釋放產(chǎn)生，并使NO及ET-1達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡，縮小心肌缺血梗死范圍，減輕心肌缺血程度。但缺血再灌注組織損傷的機(jī)制是一個(gè)多因素參與的復(fù)雜過(guò)程，參麥注射液如何在各個(gè)環(huán)節(jié)發(fā)揮調(diào)節(jié)和干預(yù)并阻斷其發(fā)生，還有待于深入研究。

[1] 付櫻，何娟，盧露，等.參麥注射液對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物抗凝抑栓作用的研究[J].世界中醫(yī)藥，2007，2(6)：367-369

[2] 王育珊,張爽,張東,等.聯(lián)合應(yīng)用參麥和丹參注射液對(duì)急性心肌梗死缺血/再灌注心肌梗死缺血/再灌注心肌的保護(hù)作用[J].中國(guó)急救醫(yī)學(xué),2003,12(23):834

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Protective effects of Shenmai Injection on myocardial ischemia reperfusion injury in rats

LI Yun1, ZOU Peixia1, YAO Yuan1, ZHU Kegang2, QI Tao3

(1.Taihe Hospital of Shiyan City, Shiyan 442000, Hubei, China; 2.Hubei University of Medicine, Shiyan 442000, Hubei, China; 3.General Hospital of China Pingmei Shenma Medical Group, Pingdingshan 467099, Henan, China)

Objective It is to observe the protective effect of Shenmai Injection on myocardial ischemia reperfusion injury in rats.Methods 8 healthy rats were used as control group, the other 20 rats by ligation of left anterior descending coronary artery for 30 min release buckles reperfusion 60 min to make the model of myocardial ischemia-reperfusion injury, and randomly divided into model group and Shenmai group.Three groups of rats were treated by tail intravenous injection with NS or Shenmai Injection.before and after treatment for 1, 2 weeks, the levels of serum creatine kinase (CK), serum malondialdehyde (MDA), total superoxide dismutase (T-SOD), endothelin-1 (ET-1) and nitric oxide (NO) content were detected, and the myocardial ischemic area was measured in after 2 weeks of treatment.Results After the model of myocardial ischemia-reperfusion injury were established in model group, the levels of serum MDA, CK, ET-1 were markedly increased (allP<0.05), and the T-SOD activity and NO content were markedly decreased (allP<0.05).After treated by Shenmai Injection in Shenmai group, the levels of serum MDA, CK, ET-1 were markedly decreased (allP<0.05), and the T-SOD activity and NO content were markedly increased (allP<0.05), the myocardial ischemic area were reduce significantly compared with model group (P<0.05).Conclusion Shenmai injection has protective effects on myocardial ischemia of rats, and its mechanism may be it can improve the free radical scavenging enzyme activity, promote production of NO to remove oxygen free radical, reduce lipid peroxidation, vascular endothelial dysfunction to improve reperfusion injury.

Shenmai Injection; myocardial ischemia reperfusion; malondialdehyde; serum creatine kinase; superoxide dismutase; nitric oxide

李云，女，主管技師，研究方向?yàn)榕R床藥理與兒科診療。

祁濤，E-mail：cdscds1226@126.com

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.09.007

R-332

A

1008-8849(2015)09-0933-03

2014-08-10