李　杰，邢　輝

(1.鐘祥市人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，湖北 鐘祥431902；2.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院 檢驗(yàn)科，湖北 武漢430022)

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高白細(xì)胞標(biāo)本對(duì)儀器法網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的干擾

李杰1*，邢輝2

(1.鐘祥市人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，湖北 鐘祥431902；2.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院 檢驗(yàn)科，湖北 武漢430022)

摘要：目的觀察高白細(xì)胞標(biāo)本對(duì)儀器法網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(%)及未成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞組份計(jì)數(shù)(IRF%)測(cè)定的干擾。方法使用血液分析儀對(duì)30例高白細(xì)胞標(biāo)本(>300×109/L)進(jìn)行網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，然后以稀釋液對(duì)標(biāo)本進(jìn)行不同濃度的稀釋后再進(jìn)行網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，同時(shí)將不同濃度標(biāo)本進(jìn)行手工法網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)。結(jié)果30例標(biāo)本中有11例標(biāo)本儀器網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果及未成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞組份計(jì)數(shù)結(jié)果與手工法結(jié)果相比偏高，在稀釋到一定濃度(100×109/L左右或更低)后網(wǎng)織紅細(xì)胞濃度與未成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞組份比例明顯下降，計(jì)數(shù)結(jié)果與手工法結(jié)果相符。結(jié)論高白細(xì)胞血樣進(jìn)行網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)會(huì)受到白細(xì)胞的干擾，通過(guò)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行稀釋后再進(jìn)行測(cè)定可得到正確的網(wǎng)織紅細(xì)胞結(jié)果及未成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞組份比例。

(ChinJLabDiagn,2015,19:1114)

網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)是臨床檢驗(yàn)的常規(guī)項(xiàng)目之一，其濃度測(cè)定對(duì)疾病的診斷及治療效果判斷有重要意義，故結(jié)果的準(zhǔn)確性十分重要。目前網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)多使用自動(dòng)化的血液分析儀進(jìn)行測(cè)定，儀器使用熒光染料對(duì)標(biāo)本進(jìn)行處理后自動(dòng)分析，除提供網(wǎng)織紅細(xì)胞的濃度外還提供其分級(jí)參數(shù)如高熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞、中熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞、低熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞、未成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞組份等，這些參數(shù)已被廣泛的應(yīng)用到各種疾病的診斷和治療之中[1-4]。但我們?cè)诠ぷ髦邪l(fā)現(xiàn)高白細(xì)胞濃度血樣在進(jìn)行網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)結(jié)果會(huì)受到白細(xì)胞的干擾，通過(guò)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行稀釋后再測(cè)定可得到正確的網(wǎng)織紅細(xì)胞及組份結(jié)果。

1材料與方法

1.1　儀器與試劑

日本SYSMEX公司XE-5000型全自動(dòng)血液分析儀及配套試劑。網(wǎng)織紅細(xì)胞染液(貝索公司)，雙目顯微鏡(奧林巴斯公司)。

1.2　標(biāo)本來(lái)源

鐘祥市人民醫(yī)院血液科2013年9月-12月血常規(guī)檢驗(yàn)高白細(xì)胞標(biāo)本共30例，其白細(xì)胞濃度均大于>100×109/L。

1.3　測(cè)試方法

儀器每日開(kāi)機(jī)后均使用高、中、低配套質(zhì)控物進(jìn)行測(cè)試，測(cè)試結(jié)果合格后再進(jìn)行標(biāo)本測(cè)試。首先進(jìn)行原倍標(biāo)本CBC+DIFF+RET測(cè)試，然后用配套稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行不同濃度稀釋后再進(jìn)行CBC+DIFF+RET測(cè)試，觀察其結(jié)果中網(wǎng)織紅細(xì)胞濃度(%)變化及各組份的變化。同時(shí)將各濃度標(biāo)本按全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程進(jìn)行手工法網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)[5]。

1.4　統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2結(jié)果

2.1　實(shí)驗(yàn)結(jié)果

儀器測(cè)定30例標(biāo)本中有11例標(biāo)本在稀釋到一定濃度(100×109/L左右或更低)時(shí)網(wǎng)織紅細(xì)胞濃度明顯下降。受干擾的病例稀釋前后測(cè)試結(jié)果見(jiàn)下表1。

從上表可以看出，11例標(biāo)本網(wǎng)織紅細(xì)胞及未成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞組份測(cè)試結(jié)果隨標(biāo)本稀釋到一定濃度時(shí)(100×109/L左右或更低)明顯下降,與稀釋前相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

±SD)

2.2　儀器法散點(diǎn)圖分析

從儀器散點(diǎn)圖可見(jiàn)，X軸側(cè)向熒光(FSC)紅細(xì)胞區(qū)與血小板區(qū)可明顯區(qū)分，但Y軸前向散射光(SFL)散點(diǎn)與正常圖形相比，末端出現(xiàn)許多白色散點(diǎn)與網(wǎng)織紅細(xì)胞散點(diǎn)混淆。在提示信息中均提示“RET Abn Scg”，提示散點(diǎn)圖異常(圖1)。異常的散點(diǎn)圖及提示信息在標(biāo)本稀釋后測(cè)定時(shí)不再出現(xiàn)(圖2)。

圖1白細(xì)胞偏高異常網(wǎng)織紅細(xì)胞散點(diǎn)圖圖2白細(xì)胞偏高標(biāo)本稀釋后正常網(wǎng)織紅細(xì)胞散點(diǎn)圖

2.3　儀器法與手工方法結(jié)果相比

除11例標(biāo)本外，各標(biāo)本原倍及稀釋后標(biāo)本網(wǎng)織紅計(jì)數(shù)結(jié)果兩種方法相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。11例標(biāo)本計(jì)數(shù)結(jié)果偏高，兩者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(儀器：9.22±5.57%，手工2.13±1.59%，P<0.001)。但當(dāng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行稀釋后(100×109/L左右或更低)兩種結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(儀器：1.91±0.97%，手工2.13±1.59%，P>0.05)。

3討論

XE-5000血液分析儀測(cè)定網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)采用熒光染色和激光測(cè)量的原理，使用聚次甲基染料對(duì)細(xì)胞RNA進(jìn)行染色，同時(shí)使用噁嗪對(duì)細(xì)胞DNA進(jìn)行染色。由于白細(xì)胞所含DNA量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于網(wǎng)織紅細(xì)胞所含RNA量，故白細(xì)胞熒光強(qiáng)度遠(yuǎn)大于網(wǎng)織紅細(xì)胞的熒光范圍而網(wǎng)織紅細(xì)胞的熒光強(qiáng)度又遠(yuǎn)大于成熟紅細(xì)胞，儀器可對(duì)白細(xì)胞，網(wǎng)織紅細(xì)胞，成熟紅細(xì)胞進(jìn)行準(zhǔn)確的區(qū)分計(jì)數(shù)。儀器除了能客觀地計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞外，還能根椐其RNA含量計(jì)算網(wǎng)織紅細(xì)胞的成熟程度并對(duì)網(wǎng)織紅細(xì)胞分群，客觀地將網(wǎng)織紅細(xì)胞分成高熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅(HFR)、中熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅(MFR)、低熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅(LFR)等組份，同時(shí)還能提供網(wǎng)織紅細(xì)胞中血紅蛋白含量(Ret-He)等參數(shù)。與手工顯微鏡法網(wǎng)織紅細(xì)胞測(cè)定相比，儀器法具有分析速度快，分析精度高，報(bào)告參數(shù)多等優(yōu)點(diǎn)[6，7]，目前得到了廣泛的應(yīng)用。

一般情況下從儀器散點(diǎn)圖可以看出，網(wǎng)織紅細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞由于熒光強(qiáng)度不同，散點(diǎn)圖可以明顯區(qū)分，無(wú)異常干擾。但在11例受干擾標(biāo)本的散點(diǎn)圖中可以看到X軸側(cè)向熒光(FSC)紅細(xì)胞區(qū)與血小板區(qū)可以區(qū)分，但Y軸前向散射光(SFL)散點(diǎn)與正常圖形相比，末端出現(xiàn)許多白色散點(diǎn)與網(wǎng)織紅細(xì)胞散點(diǎn)混淆，網(wǎng)織紅細(xì)胞散點(diǎn)圖末端為高熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞，出現(xiàn)這些異常散點(diǎn)導(dǎo)致網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果偏高且對(duì)網(wǎng)織紅細(xì)胞分群產(chǎn)生影響，導(dǎo)致高熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞及網(wǎng)織紅細(xì)胞總數(shù)結(jié)果異常偏高。這些異常散點(diǎn)在白細(xì)胞數(shù)量正常標(biāo)本及高白細(xì)胞標(biāo)本稀釋后測(cè)定散點(diǎn)圖中未見(jiàn)出現(xiàn)，故異常散點(diǎn)的出現(xiàn)應(yīng)為標(biāo)本中高白細(xì)胞干擾所致。

從本研究結(jié)果中可以發(fā)現(xiàn)，部分高白細(xì)胞血樣儀器法網(wǎng)織紅細(xì)胞測(cè)試結(jié)果偏高。由于此類(lèi)標(biāo)本均為血液病患者標(biāo)本，而網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)對(duì)血液系統(tǒng)疾病患者的診斷及治療均具有重要意義，保證結(jié)果的準(zhǔn)確性尤為重要。目前對(duì)網(wǎng)織紅細(xì)胞結(jié)果復(fù)核一般是當(dāng)數(shù)量大于預(yù)定程度或散點(diǎn)圖異常時(shí)進(jìn)行鏡檢[8-10]，本研究中11例標(biāo)本網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果均達(dá)到鏡檢標(biāo)準(zhǔn)需人工鏡檢，但人工鏡檢耗時(shí)較長(zhǎng)，分析精度低。因此在臨床工作中對(duì)白細(xì)胞高值標(biāo)本可使用稀釋液對(duì)標(biāo)本進(jìn)行稀釋，在白細(xì)胞含量<100×109/L時(shí)再進(jìn)行儀器法網(wǎng)織紅細(xì)胞測(cè)試也可以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性且較手工法測(cè)試方便快捷，值得推廣。

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關(guān)鍵詞：白細(xì)胞；血液分析儀；網(wǎng)織紅細(xì)胞；未成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞組份

The interference of high leukocyte samples on the reticulocyte count with hematology analyzerLIJie1，XINGHui2.(1.DepartmentofClinicalLaboratory，ThePeople'sHospitalofZhongxiang,Zhongxiang431902,China;2.DepartmentofClinicallaboratory，theUnionHospital,HuazhongUniversityofScienceandTechnology,Wuhan430022,China)

Abstract:ObjectiveTo observe the interference of high leukocyte samples on the reticulocyte count (%) and immature reticulocyte fraction (IRF%) count with hematology analyzer.Methods30 cases of high leukocyte samples (>300×109/L) were analyzed with hematology analyzer of reticulocyte count,and then to be reanalyzed after these samples were diluted with dilution to different concentrations,and reticulocyte count of different concentrations samples were analyzed by manual methods at the same time.ResultsReticulocyte count (%) and immature reticulocyte count (IRF%) of 11 cases in the 30 cases specimens with hematology analyzer were high than manual method results,when these samples were diluted to different concentrations(100×109/L or lower),the results of the hematology analyzer decreased significantly,and the results were closed to the results of manual method.ConclusionThe reticulocyte count with hematology analyzer can be interfered by white blood cells in high leukocyte samples,and the interference can be get corrected by the dilution of the samples.

Key words:Leukocyte；Blood analyzer；Reticulocyte；Immature reticulocyte fraction

(收稿日期：2014-06-11)

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

中圖分類(lèi)號(hào)：R446.11+3

文章編號(hào)：1007-4287(2015)07-1114-03

*通訊作者