王悅芬　王樹則　趙文景　孟　元　蔡　朕　張勝容

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院腎病科，北京　100010)

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實(shí) 驗(yàn) 研 究

補(bǔ)腎活血方藥對(duì)糖尿病腎病大鼠腎臟中晚期糖基化終末產(chǎn)物的影響及可能機(jī)制※

王悅芬王樹則1趙文景孟元蔡朕張勝容△

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院腎病科，北京100010)

【摘要】目的探討補(bǔ)腎活血方藥對(duì)糖尿病腎病大鼠腎臟晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)的影響及可能機(jī)制。方法將48只雄性SD大鼠隨機(jī)分為4組，即正常對(duì)照組、模型組、氨基胍組及補(bǔ)腎活血方組，除正常對(duì)照組外，其余3組大鼠予鏈脲佐菌素腹腔注射建立糖尿病腎病大鼠模型。造模成功后，補(bǔ)腎活血方組大鼠予6.3 g生藥/kg補(bǔ)腎活血方水煎劑，氨基胍組大鼠予含鹽酸氨基胍的自來水50 mg/(kg·d)，模型組和正常對(duì)照組大鼠予等容積自來水灌胃，均每日1次，連續(xù)8周。測(cè)定各組大鼠空腹血糖(FBG)、腎質(zhì)量/體質(zhì)量、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)、24 h尿蛋白定量，檢測(cè)腎小球AGEs(GTE-AGEs)及血清和尿中抗-羧甲基賴氨酸(CML)-AGEs、熒光性-AGEs含量，生物化學(xué)法測(cè)定腎小球脂質(zhì)過氧化物(LPO)含量，觀察腎臟病理改變。結(jié)果與正常對(duì)照組相比，模型組大鼠FBG、BUN、Cr、腎質(zhì)量/體質(zhì)量、24 h尿蛋白定量、GTE-AGEs、血清熒光性-AGEs及CML-AGEs、腎小球LPO含量均顯著升高(P<0.05，P<0.01)；與模型組比較，補(bǔ)腎活血方組及氨基胍組FBG、BUN、Cr、腎質(zhì)量/體質(zhì)量、24 h尿蛋白定量、GTE-AGEs、腎小球LPO顯著降低，尿熒光性-AGEs、尿CML-AGEs含量顯著升高(P<0.05)。與正常對(duì)照組比較，模型組腎小球平均截面積(MGA)、腎小球平均體積(MGV)顯著增大(P<0.01)；與模型組比較，補(bǔ)腎活血方組及氨基胍組MGA、MGV顯著減小(P<0.05，P<0.01)，2組腎臟病理學(xué)改變顯著減輕，且2組組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論補(bǔ)腎活血方可通過增加尿液AGEs排泄減少AGEs在糖尿病腎病大鼠腎臟的蓄積，降低尿蛋白排泄，減少氧化應(yīng)激水平，從而發(fā)揮其對(duì)糖尿病腎病的防治作用。

【關(guān)鍵詞】糖尿病腎?。惶腔K產(chǎn)物，高級(jí)；補(bǔ)腎；活血；中藥療法；疾病模型，動(dòng)物；動(dòng)物，實(shí)驗(yàn)；大鼠；

對(duì)于糖尿病腎病的治療，先前的研究焦點(diǎn)主要集中在控制高血糖和高血壓。隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展，葡萄糖依賴性的信號(hào)通路是一個(gè)重要的研究方向，其中針對(duì)高血糖誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)和信號(hào)通路異?；罨闹委煟娠@著改善糖尿病腎病的病理狀態(tài)，關(guān)于分子治療的熱門靶點(diǎn)主要是血管相關(guān)的信號(hào)通路，包括晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)、蛋白激酶C以及腺苷酸活化蛋白激酶[1-2]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，糖尿病腎病多為本虛標(biāo)實(shí)之證，本虛多以氣陰兩虛、肝腎陰虛、陰陽兩虛為主，標(biāo)實(shí)多與濕濁、濕熱、血瘀有關(guān)。本研究通過實(shí)驗(yàn)觀察補(bǔ)腎活血方對(duì)糖尿病腎病大鼠腎臟AGEs的影響，探討其對(duì)糖尿病腎病大鼠腎臟的保護(hù)機(jī)制。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雄性SD大鼠，48只，體質(zhì)量150～200 g，由北京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK(北京)2007-0001。

1.1.2主要試劑及儀器鏈脲佐菌素(STZ)、鹽酸氨基胍(AG)、膠原蛋白酶Ⅳ、蛋白酶K、標(biāo)記堿性磷酸酶的抗兔IgG抗體為Sigma公司產(chǎn)品(Sigma Chemical Co.St.Louis，MO，USA)；羥脯氨酸，購自上?；瘜W(xué)試劑公司；脂質(zhì)過氧化物(LPO)測(cè)定試劑盒、血肌酐(Cr)及尿素氮(BUN)測(cè)定試劑盒、24 h尿蛋白定量試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。全自動(dòng)酶標(biāo)儀Austria Rainbow 340-700為奧地利Rainbow公司產(chǎn)品；F-4500熒光分光光度計(jì)為日本Hitachi產(chǎn)品；觀察病理所用顯微鏡為日本尼康產(chǎn)品，型號(hào)為NIKON ECLIPSE 80i；圖像分析系統(tǒng)由湖北徠克醫(yī)療儀器有限公司提供，型號(hào)Mias-2000。補(bǔ)腎活血方由熟地黃、肉蓯蓉、懷牛膝、山藥、川芎等組成，由石家莊樂仁堂醫(yī)藥集團(tuán)股份有限公司中藥飲片廠提供，經(jīng)河北醫(yī)科大學(xué)藥用植物教研室鑒定為純品，水煎取汁，藥物濃度為1 g生藥/mL。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1動(dòng)物分組將48只雄性SD大鼠隨機(jī)分為4組，即正常對(duì)照組、模型組、補(bǔ)腎活血方組及氨基胍組，每組各12只。

1.2.2模型制備除正常對(duì)照組外，其他3組大鼠予STZ 65 mg/kg腹腔注射(溶解于pH 4.5，0.1 mol/L檸檬酸緩沖液中)建立糖尿病腎病大鼠模型。注射后48 h連續(xù)監(jiān)測(cè)，若3次達(dá)到下述標(biāo)準(zhǔn)則認(rèn)為造模成功：FBG≥16.7 mmol/L，尿量大于原尿量的1.5倍，尿糖強(qiáng)陽性；尿微量白蛋白排泄率>30 mg/24 h。正常對(duì)照組大鼠予等量檸檬酸緩沖液。

1.2.3給藥方法造模成功后，補(bǔ)腎活血方組大鼠予6.3 g生藥/kg補(bǔ)腎活血方煎劑，氨基胍組大鼠予含鹽酸氨基胍自來水50 mg/(kg·d)(1 g鹽酸氨基胍溶解于1 L自來水中)，模型組和正常對(duì)照組大鼠予等容積自來水灌胃，均每日1次，連續(xù)8周。實(shí)驗(yàn)期間所有大鼠均喂養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)飲食，不用胰島素及其他降糖藥物。

1.3觀察指標(biāo)及方法

1.3.1標(biāo)本采集用代謝籠收集各組大鼠24 h尿標(biāo)本，計(jì)24 h尿量，-20 ℃保存，待查。然后麻醉各組大鼠，腹主動(dòng)脈取血，分離血清。接著處死各組大鼠，取雙腎，去掉包膜稱質(zhì)量，計(jì)算腎質(zhì)量/體質(zhì)量[雙側(cè)腎臟質(zhì)量之和/體質(zhì)量(g/g)]。然后分離腎皮質(zhì)、腎髓質(zhì)。右腎部分置于10%中性甲醛溶液浸泡固定，待光鏡觀察病理。其余腎皮質(zhì)剪碎后-70 ℃冷凍，待檢AGEs及LPO。

1.3.2檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.3.2.1取血清，采用生物化學(xué)方法檢測(cè)BUN、Cr、FBG。取尿采用考馬斯亮藍(lán)法檢測(cè)24 h尿蛋白定量[2]。

1.3.2.2腎小球-AGEs(GTE-AGEs)測(cè)定①腎小球提取物(GTE)制作：參照文獻(xiàn)[3-4]分離、制備腎小球及腎小球提取物。將腎皮質(zhì)剪碎、勻漿、離心、沉淀，在沉淀中加氯仿和甲醇(比例為2∶1，V/V)5 mL，去脂，4 ℃搖振過夜，經(jīng)水化沖洗，用0.5 mol/L醋酸和1 mg/L胃蛋白酶去除非膠原蛋白，再用0.1 g/LⅣ型膠原酶和0.1 g/L蛋白酶K消化處理24 h后，離心取上清液，即為腎小球提取物，用于AGEs含量檢測(cè)。采用Makita等[4]方法測(cè)定腎小球提取物中羥脯氨酸含量。②GTE -AGEs測(cè)定：參照Edwards等[5]方法體外孵育形成的核糖核酸酶-AGEs(RNase-AGEs)作為免疫原，免疫大白兔，制備抗AGEs多克隆抗血清，建立競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法?？寡迮cRNase-AGEs和牛血清白蛋白-AGEs(BSA-AGEs)結(jié)合，但不與BSA結(jié)合，其滴度為1∶2 000，55 mg/L BSA-AGEs競(jìng)爭(zhēng)抑制抗血清結(jié)合率50%。測(cè)定過程：100 mg/L BSA-AGEs[pH 9 .6碳酸緩沖液(PBS)]加于酶標(biāo)板上，每孔0.1 mL進(jìn)行包被。洗滌后用0.2 mL 0.2 mol/L PBS(含0.1%BSA，pH 7.4)進(jìn)行封閉，洗滌后每孔加入50 μL競(jìng)爭(zhēng)抗原(BSA-AGEs或待測(cè)GTE)，然后加入50 μL 1∶1 000抗血清，洗滌后加入標(biāo)記堿性磷酸酶的抗兔IgG抗體，最后每孔加入0.1 mL 1 g/L對(duì)硝基苯磷酸二鈉鹽(PNPP)進(jìn)行顯色反應(yīng)，30 min后測(cè)定波長(zhǎng)405 nm的吸光度(A值)，計(jì)算B/BO，B/BO=(實(shí)驗(yàn)A值-無抗血清的背景A值)/(無競(jìng)爭(zhēng)抗原的總A值-背景A值)。以BSA-AGEs為AGEs標(biāo)準(zhǔn)，在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。AGEs含量用AGE·IU表示，1AGE·IU等于0.1 mg BSA-AGEs所含的AGEs量。最終結(jié)果用AGE·IU/ mg膠原蛋白表示(簡(jiǎn)寫為IU/mg pr)。批內(nèi)變異指數(shù)為5.2%，批間變異指數(shù)為9.6%。

1.3.2.3血清、尿液-AGEs測(cè)定①血清、尿液熒光性-AGEs測(cè)定：參照蔣建平等[6]方法，取血清、尿液各0.2 mL，0.9%氯化鈉注射液稀釋至2 mL，用熒光分光光度計(jì)測(cè)上清液熒光強(qiáng)度(激發(fā)波長(zhǎng)370 nm，發(fā)射波長(zhǎng)440 nm，狹縫5 nm。Lowry法測(cè)定稀釋液中蛋白含量，AGEs含量以每mg蛋白中相對(duì)熒光強(qiáng)度(AIU/mg pr)表示。②血清、尿液N-羧甲基賴氨酸(CML)-AGEs測(cè)定：取血清、尿液各0.2 mL，0.9%氯化鈉注射液稀釋至2 mL，以下步驟同GTE -AGEs測(cè)定。

1.3.2.4腎小球LPO測(cè)定取腎小球提取物，參照試劑盒說明書測(cè)定腎小球LPO。

1.3.2.5腎臟病理腎組織經(jīng)10%甲醛固定后，用常規(guī)方法制備光鏡切片，行三色套染，應(yīng)用Mias-2000圖像分析儀測(cè)定腎小球平均體積及系膜體積。在高倍鏡下進(jìn)行病理分析，每個(gè)切片隨機(jī)選擇10個(gè)正切的腎小球，測(cè)定腎小球平均截面積(MGA)，取其平均值作為每個(gè)標(biāo)本的MGA，計(jì)算腎小球平均體積(MGV)。

2結(jié)果

2.1大鼠死亡情況治療結(jié)束后，模型組及氨基胍組各有2只大鼠死亡。

2.24組大鼠FBG 、腎質(zhì)量/體質(zhì)量及腎功能指標(biāo)比較見表1。

表1　4組大鼠FBG 、腎質(zhì)量/體質(zhì)量及腎功能指標(biāo)比較　±s

與正常對(duì)照組比較，**P<0.01；與模型組比較，△P<0.05

由表1可見，模型組大鼠FBG、BUN、Cr、腎質(zhì)量/體質(zhì)量、24 h尿蛋白定量均高于正常對(duì)照組(P<0.01)；補(bǔ)腎活血方組及氨基胍組FBG、BUN、Cr、腎質(zhì)量/體質(zhì)量及24 h尿蛋白定量均低于模型組(P<0.05)，而補(bǔ)腎活血方組與氨基胍組各項(xiàng)目組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.34組大鼠腎小球、血清及尿中AGEs比較見表2。

表2　 4組大鼠腎小球、血清及尿AGEs比較　±s

與正常對(duì)照組比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05

由表2可見，模型組大鼠GTE-AGEs及血清熒光性-AGEs、CML-AGEs含量顯著高于正常對(duì)照組(P<0.05)；與模型組比較，補(bǔ)腎活血方組及氨基胍組GTE-AGEs顯著降低(P<0.05)，尿熒光性-AGEs、尿CML-AGEs含量顯著升高，并高于正常對(duì)照組(P<0.05)；補(bǔ)腎活血方組與氨基胍組各項(xiàng)目組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.44組大鼠腎小球LPO、MGA、MGV比較見表3。

表3　4組大鼠腎小球LPO、MGA、MGV比較

與正常對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較，△P<0.05

由表3可見，模型組大鼠腎小球LPO含量高于正常對(duì)照組(P<0.05)，補(bǔ)腎活血方組及氨基胍組顯著低于模型組(P<0.05)，補(bǔ)腎活血方組與氨基胍組組間比較無顯著差異(P>0.05)。與正常對(duì)照組比較，模型組MGA、MGV顯著增大(P<0.01)；與模型組比較，補(bǔ)腎活血方組及氨基胍組MGA、MGV顯著減小(P<0.05)，補(bǔ)腎活血方組與氨基胍組2組組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.54組大鼠腎臟病理觀察結(jié)果電子光鏡下，正常對(duì)照組大鼠腎小球體積正常，腎小球PAS紅染區(qū)無擴(kuò)大，系膜區(qū)無增寬，毛細(xì)血管管腔開放良好(見封3，圖1)；模型組大鼠腎小球體積顯著增大，腎小球PAS紅染區(qū)擴(kuò)大，系膜區(qū)增寬，毛細(xì)血管管腔受壓(見封3，圖2)；補(bǔ)腎活血方組腎小球體積較模型組顯著減小，腎小球系膜區(qū)噬復(fù)紅蛋白含量減少，毛細(xì)血管管腔受壓改善(見封3，圖3)；氨基胍組腎小球體積較模型組減小，腎小球系膜區(qū)PAS紅染區(qū)縮小，系膜區(qū)無明顯增寬，毛細(xì)血管管腔受壓改善(見封3，圖4)。

3討論

AGEs的形成主要與體內(nèi)葡萄糖水平、氧化應(yīng)激有關(guān)，形成后AGEs主要被局部巨噬細(xì)胞通過清道夫受體內(nèi)吞并，并降解成可溶性多肽(LMN-AGEs)進(jìn)入血液循環(huán)，經(jīng)腎臟過濾，隨尿液排出。AGEs是一組化合物，目前明確結(jié)構(gòu)的有羧甲基賴氨酸(CML)、吡咯素、戊糖苷素等，其常用的檢測(cè)方法有：①抗CML結(jié)構(gòu)的免疫學(xué)檢測(cè)方法；②針對(duì)其熒光特性的熒光分光光度計(jì)法。有研究報(bào)道，熒光性-AGEs最容易在腎組織沉積，是重要的腎毒性物質(zhì)[7]。如腎功能受損，不能及時(shí)清除血液中未能排除的降解產(chǎn)物，可再次與蛋白結(jié)合形成AGEs[8]。在糖尿病患者和動(dòng)物的血管壁及腎臟中，AGEs含量明顯增加，在腎臟AGEs與晚期糖基化終產(chǎn)物受體(RAGE)結(jié)合后可通過氧化應(yīng)激誘導(dǎo)血小板衍化生長(zhǎng)因子及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生，增加血管通透性，使血液處于高凝狀態(tài)等機(jī)制參與腎臟纖維化的進(jìn)展。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，腎主水，主封藏，藏先天之精和后天之精，腎絡(luò)瘀阻可導(dǎo)致水液運(yùn)行及腎封藏功能異常，精津外泄，從而出現(xiàn)水腫及蛋白尿。我們結(jié)合AGEs在糖尿病腎病、透析相關(guān)心腦血管并發(fā)癥發(fā)病過程中的機(jī)制，提出糖尿病腎病腎絡(luò)瘀阻發(fā)病學(xué)說，并以補(bǔ)腎活血法治療，在臨床中取得了良好療效。前期研究顯示：①一定濃度的補(bǔ)腎中藥懷牛膝、淫羊藿、熟地黃對(duì)體外蛋白非酶糖化產(chǎn)物有直接抑制作用[8]；②補(bǔ)腎活血方通過增加腎臟對(duì)AGE-肽排泄，降低端腦AGEs的積累及端腦、海馬組織β-淀粉樣肽(AβP)含量，改善由雌激素缺乏、腎虛所致的學(xué)習(xí)記憶下降及心腦血管并發(fā)癥[9]。為進(jìn)一步探討補(bǔ)腎活血化瘀藥物對(duì)腎臟的保護(hù)作用及機(jī)制，本研究通過動(dòng)態(tài)分析腎組織、循環(huán)、尿液中AGEs三者的關(guān)系，觀察腎清除毒素的作用與腎的氣化、封藏功能的關(guān)系。

本研究顯示，模型組大鼠腎小球體積明顯增大，24 h尿蛋白定量增加，腎功能受損，腎小球及血清中AGEs和腎小球LPO含量均明顯增加，尿液中AGEs含量與正常對(duì)照組相比無明顯差異(P>0.05)；氨基胍組及補(bǔ)腎活血方組在大鼠FBG下降情況下，腎小球體積、24 h尿蛋白定量及腎功能受損程度均有明顯改善，且大鼠腎小球中AGEs和LPO含量均明顯減少，尿液對(duì)AGEs排泄量顯著增加，但血清中CML-AGEs較模型組和正常對(duì)照組有增加趨勢(shì)。提示模型組大鼠由于血糖增加，導(dǎo)致機(jī)體氧化應(yīng)激增強(qiáng)，體內(nèi)AGEs的生成增加，血中AGEs含量增加，但尿液對(duì)其排泄無明顯改變，從而加速組織中AGEs沉積。

補(bǔ)腎活血方由懷牛膝、生地黃、牡丹皮等組成，其對(duì)糖尿病腎病大鼠的防治作用與氨基胍治療作用類似，體現(xiàn)在減少AGEs在腎小球的沉積，降低腎小球LPO水平，減少組織的氧化應(yīng)激水平，保護(hù)腎小球結(jié)構(gòu)和功能。氨基胍為AGEs抑制劑，它能特異性抑制AGEs的形成，但對(duì)已經(jīng)交聯(lián)的AGEs無裂解作用。本研究提示，氨基胍減少AGEs在腎小球沉積的機(jī)制可能為：①阻斷從蛋白質(zhì)非酶糖化反應(yīng)中間產(chǎn)物Amadori產(chǎn)生到AGEs的轉(zhuǎn)化，抑制AGEs形成；②抑制可溶性多肽與蛋白再次交聯(lián)；③促進(jìn)可溶性多肽經(jīng)尿液排泄；④減少腎小球LPO水平，降低腎臟氧化應(yīng)激水平。補(bǔ)腎活血方減少AGEs在腎小球沉積的機(jī)制可能為：①懷牛膝、熟地黃能直接抑制AGEs形成[9]；②促進(jìn)可溶性多肽經(jīng)尿液排泄；③減少腎小球LPO水平，降低腎臟氧化應(yīng)激水平。

關(guān)于血液、尿液及腎臟中AGEs的關(guān)系，鄭凝等[10]認(rèn)為腎臟組織中AGEs含量與血清中熒光性-AGEs有較好的相關(guān)性，提出血清中AGEs能反映腎臟及全身組織中AGEs的含量，本實(shí)驗(yàn)與上述結(jié)果有不同之處。本實(shí)驗(yàn)選用2種檢測(cè)方法測(cè)定了血清和尿液中不同成分AGEs的含量，提示血液循環(huán)中物質(zhì)的增多不等同于組織中該物質(zhì)沉積增加，應(yīng)動(dòng)態(tài)看待血清、尿液、組織中物質(zhì)循環(huán)和轉(zhuǎn)移，在機(jī)體中增加有毒物質(zhì)清除也是保護(hù)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的重要因素。AGEs從組織到循環(huán)到尿液的轉(zhuǎn)移能體現(xiàn)中醫(yī)腎的氣化功能，可作為保護(hù)腎封藏功能的重要標(biāo)志物。

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(本文編輯：曹志娟)

※項(xiàng)目來源：“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)課題(編號(hào)：2009zx09502-014)；國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(編號(hào)：81072713)；首都醫(yī)學(xué)發(fā)展科研基金項(xiàng)目(編號(hào)：SF-2009-I-06)

1中央財(cái)經(jīng)大學(xué)2012級(jí)電子商務(wù)，北京100081

Effects and possible Mechanism of Bushen-huoxue formulas on AGEs in kidney of diabetic ratsWANGYuefen*,WANGShuze,ZHAOWenjing,etal.*DepartmentofNephrology,BeijingChinesemedicinehospitalaffiliatedtoCapitalMedicalUniversity，Beijing100010

【Abstract】Objective Explore the effects and possible mechanism of Bushen-huoxue formulas on advanced glycosylation end products (AGEs) in kidneys in diabetic rats. Methods 48 male SD rats were randomly divided into four groups: normal control group (group N), model group (group DM), positive control medicine group with aminoguanidine (group AG), and treatment group with Bushen-huoxue formulas (group BSHX). Diabetes models were induced by injection of streptozocin. After the treatment of aminoguanidine, Bushen-huoxue for 8 weeks, kidney weight/body weight, blood urea nitrogen (BUN), serum creatinine (Cr), total 24 h urine protein were measured for each group; glomerular AGEs (GTE-AGEs), serum and urine of CML-AGEs、fluorescent-AGEs were detected with enzyme-linked immunoassay and fluorescence; The content of glomerular lipid peroxide (LPO) was detected with biochemical method. The pathological changes of kidney were observed. ResultThe level of FBG, BUN, Cr, kidney weight/body weight, 24 h urine protein, GTE-AGEs, serum fluorescence-AGEs, the serum levels of CML-AGEs and GTE-LPO were all significantly higher in group DM than those in group N (P<0.05,P<0.01). The FBG, BUN, Cr, kidney weight/bodyweight, 24h urine protein, GTE-AGEs and GTE-LPO were significantly lower in group BSHX and group AG than those in group DM; the content of urine fluorescence-AGEs, urine CML-AGEs were significantly higher. MGA and MGV in group DM were all significantly increased as compared with those in group N (P<0.01). MGA and MGV in group BSHX and group AG were all significantly increased as compared with those in group DM (P<0.05,P<0.01). The pathological changes of kidney were reduced in the rats of group BSHX and group AG, there was no significant difference between group BSHX and group AG on renal pathology change (P>0.05). Conclusion Bushen-huoxue formulas can reduce accumulation of AGEs in the kidney of diabetic rats, reduce the excretion of urinary protein, and reduce oxidative stress levels by increasing the excretion of urine AGEs. Thus, it plays roles in prevention and treatment of diabetic nephropathy.

【Key words】Diabetic nephropathy; Glycosylation end products: Advanced; Tonifying kidney; Activating blood; Traditional Chinese medicine therapy; Disease models, animal; Animal experiment; Rat

(收稿日期：2014-12-31)

作者簡(jiǎn)介：王悅芬 (1967—)，女，主任醫(yī)師，教授，碩士研究生導(dǎo)師，博士。從事中醫(yī)內(nèi)科腎臟病及其并發(fā)癥臨床、教學(xué)及科研工作。

通訊作者：△首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院腎病科，北京100010

【中圖分類號(hào)】R587.24；R285.5

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1002-2619(2015)12-1827-05

doi:10.3969/j.issn.1002-2619.2015.12.021