★　關(guān)志宇　曾文雪　羅曉健　劉亞麗　朱繼孝　程虹毓　劉婧　黃瀟　(江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院　南昌 330004)

膽胃通顆粒劑提取工藝研究*

★關(guān)志宇*第一作者：關(guān)志宇，男，副教授。研究方向：藥物新制劑與生物藥劑學(xué)。E-mail：adlaiguan@126.com。曾文雪羅曉健*通信作者：羅曉健，男，教授，博士生導(dǎo)師。劉亞麗朱繼孝程虹毓劉婧黃瀟(江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院南昌 330004)

摘要：目的：優(yōu)化膽胃通顆粒提取工藝。方法：采用正交設(shè)計實驗，以柚皮苷提取量、得膏率為評價指標(biāo)，優(yōu)選膽胃通顆粒的提取工藝。結(jié)果：最佳提取工藝條件為：加水量為10倍量，提取時間60 min，提取次數(shù)為2次。結(jié)論：該工藝合理可行，適用于膽胃通顆粒有效成分的提取。

關(guān)鍵詞：膽胃通顆粒劑；提取工藝；柚皮苷

隨著人們飲食的不斷變化，膽囊炎、胃炎患者的人數(shù)不斷增加，已經(jīng)成為臨床常見病和多發(fā)病。并且該類疾病不易治愈，多復(fù)發(fā)，患者較痛苦。膽胃通方為臨床經(jīng)驗方，以枳實、醋柴胡、香附子等為主要成分，可用于治療胃炎、膽囊炎疾病，膽胃兼顧，臨床療效較好。為更好的推廣該復(fù)方，制備療效確切的藥物新制劑，滿足臨床需要，本文對其提取工藝進(jìn)行了探討，為其進(jìn)一步研究與生產(chǎn)提供實驗依據(jù)[1]。

1儀器與材料

1.1儀器高效液相色譜儀(安捷倫1260)；KQ5200-DA型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；RE-SZD旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海青浦滬西儀器廠)。

1.2藥材與試劑柴胡、枳實、香附子等(江西樟樹藥材公司，經(jīng)江西中醫(yī)學(xué)院諸小蘭教授鑒定為正品藥材)；柚皮苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，含量測定用，批號110722-200309)；乙腈為色譜純，純化水(自制)，其他試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1柚皮苷測定方法[2-3]

2.1.1色譜條件色譜柱：phenomenex C18(250mm × 4.60 mm，5 μm)，柱溫30 ℃；流動相為乙腈-0.5%磷酸溶液(21∶79)，檢測波長為283 nm，流速為1.0 mL/min，理論塔板數(shù)不低于3500，柚皮苷峰的拖尾因子為1.02。

2.1.2溶液的制備

2.1.2.1對照品溶液的制備精密稱取柚皮苷對照品適量，置50 mL容量瓶中，加入少量甲醇溶解后定容，搖勻，制得質(zhì)量濃度為0.20 mg/mL的對照品溶液，備用。

2.1.2.2樣品溶液的制備將各條件下膽胃通處方提取液進(jìn)行干燥，粉碎過60目篩，精密稱取粉末適量，置于具塞錐形瓶中，加入甲醇50 mL，精密稱定，超聲提取30 min，放冷，再稱重，用甲醇補(bǔ)足損失質(zhì)量，搖勻，過濾。

2.1.2.3陰性樣品溶液的制備除枳實外，將膽胃通處方中各藥材按照劑量稱量，提取，干燥，粉碎過60目篩，精密稱取粉末適量，置于具塞錐形瓶中，加入甲醇50 mL，精密稱定，超聲提取30 min，放冷，再稱重，用甲醇補(bǔ)足損失質(zhì)量，搖勻，過濾。

2.1.3專屬性實驗取對照品溶液、樣品溶液及陰性樣品溶液各10 μL，按照“2.1.1”項色譜條件，分別進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，結(jié)果表明其他成分對測定無干擾。

A.柚皮苷對照品；B.樣品溶液；C.陰性樣品溶液

2.1.4線性范圍實驗精密吸取“2.2.1”項下對照品溶液0.5，1.0，2.0，4.0，8.0 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制得系列濃度對照品溶液。分別進(jìn)樣10 μL，測定峰面積。以對照品進(jìn)樣質(zhì)量(X)為橫坐標(biāo)，峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，計算回歸方程為：Y=1016.2X+3.375，r=0.999 9，結(jié)果表明柚皮苷在1.0～1.6 μg范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系。

2.1.5精密度實驗分別精密吸取同一批柚皮苷對照品溶液10 μL，按“2.2.1”項下色譜條件進(jìn)樣，平行測定6次，測得平均峰面積RSD為0.45%。

2.1.6穩(wěn)定性實驗取同一供試品溶液(批號：20141101)，分別于0，3，6，12，18 h進(jìn)樣10 μL，測定峰面積RSD為0.91%，表明供試品溶液在18 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.7重復(fù)性實驗取同一批供試品(批號：20141101)，精密稱定6份，按“2.2.2”項制備供試品溶液，分別進(jìn)樣10 μL，測定峰面積并計算樣品中柚皮苷的質(zhì)量濃度RSD為1.10%，表明樣品處理方法重復(fù)性良好。

2.1.8加樣回收率實驗精密稱定已知含量的供試品(批號：20141101)9份，分別精密加入柚皮苷對照品溶液適量，照“2.2.2”項方法制備供試品溶液，并分別按照50%,100%,150%比例加入對照品溶液，進(jìn)樣10 μL測定峰面積，計算柚皮苷的回收率，結(jié)果平均回收率分別為101.2%,101.7%,99.5%，RSD分別為1.26%,1.32%,0.97%。

2.2浸膏得率測定

將正交設(shè)計實驗每次實驗提取液合并，過濾，濃縮至300 mL，精密量取30 mL，置于已干燥恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干，而后于105℃ 干燥3 h，置干燥器中冷卻30min至室溫，稱定質(zhì)量，計算浸膏得率。計算公式如下：

表1　膽胃通方水提因素水平表

表2　正交設(shè)計實驗安排與結(jié)果

2.3提取工藝研究

2.3.2正交設(shè)計實驗按照L9(34) 正交設(shè)計表設(shè)定加水量(A)、提取時間(B)、提取次數(shù)(C)3因素及其各水平劃分，詳見表1，正交設(shè)計實驗安排與結(jié)果見表2。

表3　柚皮苷提取量方差分析表

表4　浸膏得率方差分析表

2.3.3正交設(shè)計結(jié)果分析對指標(biāo)柚皮苷提取量分別進(jìn)行直觀分析、極差分析和方差分析(SPSS)，各因素影響大小為C>A>B。根據(jù)方差分析結(jié)果可知，見表3，各因素水平間均具有顯著性差異，其中因素A和因素C各水平間具有極顯著性差異。但是直觀分析表明，因素B的2水平和3水平間差異不大，因此確定最佳提取工藝為A3B2C3，即加水12倍量，提取3次，每次提取60 min。對指標(biāo)浸膏得率進(jìn)行分析，各因素影響大小為C>A>B。根據(jù)方差分析結(jié)果可知，見表4，因素C水平間具有極顯著性差異，因素A水平間具有顯著性差異，而B因素水平間無顯著性差異。根據(jù)直觀分析結(jié)果，因素A的2水平和3水平間差異很小，因素C的2水平和3水平間差異也很小，因此確定最佳提取工藝為A2B3C2，即加水10倍量，提取2次，每次提取75 min。

結(jié)合生產(chǎn)實際對能耗、效率和成分、藥效的綜合考慮確定最佳提取工藝為A2B2C2，即加水10倍量，提取2次，每次提取60 min。

2.3.4驗證試驗按照最佳提取工藝進(jìn)行3批驗證試驗，結(jié)果3次試驗柚皮苷提取量分別為79.87，80.77，79.26 mg，RSD為0.95%，浸膏得率分別為23.56%，22.91%，23.16%，RSD為1.41%，表明該提取工藝穩(wěn)定可靠。

3討論

枳實為膽胃通方中君藥，以其所含柚皮苷的提取效果，結(jié)合復(fù)方浸膏得率作為提取工藝考察指標(biāo)，能夠較為全面地反應(yīng)有效成分的提取效果，保證藥效成分的轉(zhuǎn)移。

本實驗在結(jié)果分析和水平選用過程中，充分考慮了工藝參數(shù)選擇對生產(chǎn)成本的影響。溶劑用量、提取次數(shù)增加會顯著延長濃縮、干燥時間，增加能耗，影響生產(chǎn)效率，因此在水平間無顯著性差異時，可選擇較低水平。

參考文獻(xiàn)

[1]關(guān)志宇，羅曉健，黃瀟，等. 膽胃通顆粒劑制備工藝研究[J].中成藥，2014，36(1)：185-188.

[2]梁遠(yuǎn)園，馮彪，祝晨蔯，等. HPLC法測定枳實藥材中橙皮苷與柚皮苷的含量[J].中藥新藥與臨床藥理，2006，17(9)：359-361.

[3]劉巖. HPLC法測定參蘇片中柚皮苷的含量[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2014，30(3)：417-419.

Extraction Process of Dan Weitong Granules

GUAN Zhi-yu，ZENG Wen-xue，LUO Xiao-jian，LIU Ya-li，ZHU Ji-xiao，CHENG Hong-yu，LIU Jing，HUANG Xiao

JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Nanchang33000,China.

Abstract:Objective: To optimize extraction process of DanWeiTong granules. Methods： With the naringin and extract yield were carried out to achieve the best extraction technology of DanWeiTong Granules. Results : The best extraction technology was extract for 2 times, and every time for 60 min with 10 fold water. Conclusion: The optimized process is practicable and stable, applicable to extract for the effective constituent of DanWeiTong granules.

Key words:Dan weitong Granules；Extraction Process；Naringin

收稿日期：(2014-12-01)編輯：曾文雪

中圖分類號：TQ461

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

基金項目：*江西省衛(wèi)生廳中醫(yī)藥科研計劃項目(2012A024)。