劉曉丹周小林劉 洋

（1.南充市動物疫病預(yù)防控制中心，四川南充 637000；2.南充市農(nóng)牧業(yè)局，四川南充 637000）

雞肌肉瘤病理形態(tài)學(xué)觀察

劉曉丹1周小林1劉 洋2

（1.南充市動物疫病預(yù)防控制中心，四川南充 637000；2.南充市農(nóng)牧業(yè)局，四川南充 637000）

禽腫瘤性疾病作為世界范圍發(fā)生的疾病，嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展。其中，危害最嚴(yán)重的主要包括馬立克氏?。∕arek′s disease，MD）、禽白血?。ˋvian leukaemia，AL）和網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥（Reticuloendotheliosis，RE）三種。禽群中腫瘤的發(fā)生率和重要性只能進(jìn)行大概估計，腫瘤的發(fā)生率各異，從3%到19%不等。肌肉瘤是以肌肉組織形成腫瘤實質(zhì)的成熟型腫瘤。其中，由平滑肌組織構(gòu)成的肌肉瘤稱為平滑肌瘤；由橫紋肌發(fā)生的肌肉瘤稱為橫紋肌瘤。平滑肌瘤屬于膨脹性生長，且生長緩慢的一種成熟型腫瘤；橫紋肌瘤是由未成熟的橫紋肌構(gòu)成的惡性腫瘤。本病例經(jīng)實驗室病理學(xué)診斷為平滑肌瘤，是于2014年5月發(fā)生于南充一蛋雞場，其發(fā)病率為40%，死亡率高達(dá)60%，對生產(chǎn)上造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，對當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重的影響，且本病易誤診為馬立克。

1 材料和方法

1.1 材料及用具

南充某養(yǎng)殖場100日齡病雞；酒精，純凈水，甲醛，二甲苯，石蠟，蛋白膠，蘇木紫，1%鹽酸酒精；切片刀，熔蠟箱，真空泵。

1.2 實驗方法

1.2.1 實驗材料的獲取

首先對發(fā)病雞進(jìn)行詳細(xì)的臨床癥狀觀察，然后選擇病變明顯，有典型腫瘤性病變的病雞作為取材對象，對其進(jìn)行系統(tǒng)剖解，觀察其大體病變情況。接著選取病雞的腎、胃、肝、脾、肌肉、肺、卵巢等主要病變部位作為制作組織切片的材料。

1.2.2 實驗材料的固定

打開病雞的腹腔取出其內(nèi)臟器官肝、脾、肺、腎、卵巢、肌肉、肌肉和卵巢上的腫塊等，粗略選取大小約為2cm×2cm×1cm的病理組織材料用刀片切下來，立即投入盛有固定液體的標(biāo)本瓶中，貼上標(biāo)簽，注明固定日期、固定液名稱。固定4～12 h。

1.2.3 制作切片

固定后的材料，先用流水緩慢沖洗1～2 h，采用逐漸提高酒精濃度來減少材料中水分的含量的辦法，這樣可避免組織過度的收縮。只需最后再脫去酒精，則可直接使用病料。本次試驗所采用的濃度和作用時間依次是：75%（6～12 h），85%（6～12 h），95%（過夜），100%Ⅰ（1～2 h），100%Ⅱ（1～2）之后吸干酒精。然后將組織置于透明劑（為二甲苯，需二次更換）中，二甲苯Ⅰ（1～2），二甲苯Ⅱ（1～2）小時，使組織變得透明。在恒溫箱中溫度保持高于石蠟熔點1℃左右（一般為62℃）。甲苯石蠟（甲苯：石蠟為1∶1）30 min→第一純石蠟1 h→第二純石蠟1 h。最后，進(jìn)行包埋時應(yīng)切面向下，且多塊組織間每塊間距為1 cm左右。將切好的蠟片貼附至玻片后，入烘箱烤12 h左右，溫度以低于包埋蠟熔點為佳。

1.2.4 切片的染色

采用蘇木紫染色得到的結(jié)果為胞核藍(lán)色，胞漿淺紅色；結(jié)締組織鮮紅色，肌纖維深紅色。最后進(jìn)行切片的固定：滴一滴樹膠在組織上，加蓋蓋玻片。

1.2.5 切片觀察

將制作好的病雞各病理組織切片置于光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行細(xì)致的觀察，并與正常禽類組織切片進(jìn)行比較，了解并掌握雞腫瘤性疾病鏡下的主要典型病理變化。

2 實驗結(jié)果

2.1 病雞的解剖眼觀病變

腿部肌肉、胸部肌肉等全身多處肌肉均見到塊狀、結(jié)節(jié)狀和少量境界不明顯的腫塊，切面呈魚肉狀，灰白色和灰紅色。卵巢外也有大小不一的腫塊，質(zhì)地變實。其他組織器官無明顯異常。

2.2 切片觀察結(jié)果

2.2.1 肝

肝細(xì)胞胞體較大，界限清楚，肝小葉間結(jié)締組織較少，肝小葉分界不明顯，中央靜脈、小葉間膽管、小葉間靜脈、小葉間動脈、清晰可見。有的炎癥細(xì)胞浸潤。

2.2.2 腎

切片觀察到大量紅細(xì)胞存在于皮質(zhì)和髓質(zhì)中，皮質(zhì)和髓質(zhì)血管擴(kuò)張、出血、瘀血。腎小管上皮腫脹，部分出現(xiàn)空泡變性。腎小球腫大、瘀血，間質(zhì)靜脈擴(kuò)張。另有細(xì)胞浸潤。

2.2.3 卵巢

大量腫瘤細(xì)胞存在于組織中，散布性的細(xì)胞浸潤現(xiàn)象出現(xiàn)，正常組織被大量腫瘤細(xì)胞替代。

2.2.4 肺

組織出血嚴(yán)重，毛細(xì)血管壁增厚，靜脈瘀血，腫瘤細(xì)胞浸潤。

2.2.5 肌肉

全身多處肌肉切片觀察，均可見大量不同于正常肌細(xì)胞的細(xì)胞浸潤。肌纖維中的橫紋不均勻，有的甚至沒有。瘤細(xì)胞則應(yīng)以梭形細(xì)胞為主，呈明顯的多形性，伴有多角形和圓形或者帶狀瘤細(xì)胞。瘤細(xì)胞胞漿內(nèi)，有縱行肌原纖維。橫紋只見于纖維和細(xì)胞的邊緣于尖端。中央部由均質(zhì)的肌漿構(gòu)成，也見少量縱紋。胞核大小不一。詳見圖1和圖2。

圖1 部分肌肉組織被腫瘤細(xì)胞替代（×400）（some muscle tissue replaced by tumor cells）

圖2 病變灶區(qū)（×400）

2.2.6 腫瘤

分為實質(zhì)和間質(zhì)兩部分。實質(zhì)差異為大量腫瘤細(xì)胞，其特點是胞核和胞體的比例和正常組織有顯著的差異。胞核于胞漿相比，核和核仁較大，核染色質(zhì)豐富，且在高倍鏡下能看到較多的核分裂現(xiàn)象。間質(zhì)由結(jié)締組織和血管構(gòu)成，血管數(shù)量較多，結(jié)締組織較少，腫瘤細(xì)胞貼近血管，實質(zhì)于間質(zhì)分界不是很明顯。詳見圖3和圖4。

圖3 肌組織完全被腫瘤細(xì)胞替代（×400）（in the malignant lesion the muscle tissue completely replaced by tumor cells）

圖4 肌組織完全被腫瘤細(xì)胞替代（×400）（in the malignant lesion the muscle tissue completely replaced by tumor cells）

2.2.7 脾

被膜、小梁、白髓、紅髓等結(jié)構(gòu)均清晰可見。脾小結(jié)的數(shù)量略有增加，有少量的細(xì)胞浸潤。

3 討論和結(jié)論

3.1 討論

3.1.1 肌瘤與纖維瘤的區(qū)別

肌細(xì)胞邊界清楚，胞漿豐富、色深粉紅，有肌原纖維；胞核兩端較鈍，常有柵欄狀排列。在Van Gieson染色下，纖維呈紅色，肌肉呈黃色。纖維肉瘤無完整包膜，質(zhì)地比較柔軟，色澤淡紅，富有光澤。已分化的纖維肉瘤瘤細(xì)胞胞漿很少，胞核呈棗核狀，核染色質(zhì)為粗顆粒狀，分布不均勻，核仁大小不一，核膜清晰，膠原纖維多。

3.1.2 肌瘤與馬立克的區(qū)別

馬立克病是由皰疹病毒引起的一種傳染性的淋巴組織增生疾病?；捡R立克的病雞其外周神經(jīng)由大量的增生的成淋巴細(xì)胞組成或炎癥反應(yīng)，特別以小淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞的彌散，以及輕微至中度的細(xì)胞浸潤為顯著特征，通常還伴有部分水腫。病雞另外一個最常見的變化眼部的虹膜單核細(xì)胞浸潤，在眼肌，特別是外直肌和睫狀肌中也常見浸潤，前房常伴有顆?；驘o定型物的存在。

而內(nèi)臟器官的淋巴瘤性病變性質(zhì)則表現(xiàn)很一致，都是增生性的。細(xì)胞成分很像神經(jīng)的增生性病變，由彌散性小到中等增生的淋巴細(xì)胞、成淋巴細(xì)胞和活化了的及原始的網(wǎng)狀細(xì)胞所組成，很少見漿細(xì)胞。

3.1.3 腫瘤和炎癥、增生性病變的區(qū)別

腫瘤和周圍組織有分界、無過渡、無組織上的連接，而增生、慢性炎癥的增生則常和周圍組織無界限、有過渡、有組織上的連接。腫瘤的細(xì)胞種類、形態(tài)、排列、生長方式等，有它們的相對一致性，而炎癥、增生，細(xì)胞類型較多，主要為各種炎細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、纖維細(xì)胞和脈管內(nèi)皮細(xì)胞。炎癥、增生常不持續(xù)增長，可自然消退，腫瘤呈持續(xù)性增長，一般不會自然消退。

3.1.4 肌瘤與禽白血病的區(qū)別

禽白血病是指由反轉(zhuǎn)錄病毒科中的禽反轉(zhuǎn)錄病毒屬的成員引起的雞的各種可傳播的良性和惡性腫瘤。其特征是瘤細(xì)胞體積較大，細(xì)胞核大，核中央呈空泡狀，胞質(zhì)中含有大量的核糖核酸。肝、脾、骨髓等組織中有大量的成紅細(xì)胞堆積。成紅細(xì)胞的主要形態(tài)特征為胞體較大，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，表面有突起。

3.2 結(jié)論

根據(jù)對病雞的病史調(diào)查、剖解觀察、切片觀察后診斷結(jié)論為肌肉瘤。

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