劉彬果，任 濤，張 楠

(解放軍第二五四醫(yī)院，天津 300142)

1.連翹苷

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HPLC法測定副鼻竇顆粒中連翹苷的含量

劉彬果，任 濤，張 楠

(解放軍第二五四醫(yī)院，天津 300142)

目的:建立高效液相色譜法測定副鼻竇顆粒中連翹苷的含量。方法:用ZORBAX SB-C18(150 mm×4．6 mm，5 μm)色譜柱；以乙腈-水(23∶77)為流動(dòng)相，檢測波長為278 nm測定連翹苷的含量。結(jié)果:連翹苷在7.35～235.2 μg/ml 范圍內(nèi)線性良好，平均回收率為98.4%，RSD為1.23%(n=9)。結(jié)論:該法快速、簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，結(jié)果可靠，可用于副鼻竇顆粒中連翹苷的含量測定，為全面控制副鼻竇顆粒的質(zhì)量提供可靠方法。

副鼻竇顆粒,連翹苷,高效液相色譜法

副鼻竇顆粒為解放軍第二五四醫(yī)院多年的臨床經(jīng)驗(yàn)方，由金銀藤、連翹、蒲公英等10味中藥組成，具有清熱解毒的功效，臨床適用于急、慢性鼻竇炎，鼻炎，副鼻竇炎，過敏性鼻炎等癥狀。連翹具有清熱解毒、消腫散結(jié)的功效，為方中臣藥。現(xiàn)有的標(biāo)準(zhǔn)只有中藥定性鑒別的方法，沒有主要藥味的含量測定方法，為了更好地控制副鼻竇顆粒的質(zhì)量，采用HPLC法以連翹苷作為指標(biāo)成分進(jìn)行含量測定，經(jīng)方法學(xué)考查，認(rèn)為本法簡便、準(zhǔn)確、無干擾，可用于本品質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

Agilent 1260高效液相色譜儀，OpenLAB CDS色譜工作站，ZORBAX SB-C18(150 mm×4．6 mm，5 μm)色譜柱；連翹苷對照品(批號(hào)120821-201212，購自中國藥品生物制品檢定所)；甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。副鼻竇顆粒由本院制劑室提供(批號(hào)14210137,14320115,15070137)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為ZORBAX SB-C18(150 mm×4．6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-水(23∶77)；流速：1.0 ml/min；柱溫：室溫；檢測波長：278 nm，進(jìn)樣量：10 μl。理論塔板數(shù)按連翹苷峰計(jì)算不低于3 000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取連翹苷對照品5.88 mg，置于25 ml量瓶中，加甲醇制成連翹苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(0.235 2 mg/ml)。

2.2.2 供試品溶液的制備 取副鼻竇顆粒研細(xì)，取約5.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)40 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液20 ml，蒸干，殘?jiān)?0%乙醇10 ml使溶解，加在中性氧化鋁柱(100～120目，6.0 g，內(nèi)徑1 cm)上，用70%乙醇50 ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，殘?jiān)舆m量50%甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得連翹苷供試品溶液[1,2]。

2.2.3 陰性對照液的制備 按照處方組成比例，制備不含連翹藥材的陰性樣品。并按供試品溶液制備方法制備不含連翹的陰性對照液。

2.3 專屬性試驗(yàn) 分別吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照液，注入液相色譜儀，按上述色譜條件分別進(jìn)行測定，記錄色譜圖。結(jié)果顯示在與對照品相同保留時(shí)間處無色譜峰，說明本品中的其他成分對測定無干擾。見圖1。

1.連翹苷

圖1 對照品(A)

供試品(B)陰性對照(C)HPLC色譜圖

2.4 線性關(guān)系的考查 精密稱取連翹苷對照品儲(chǔ)備液制成濃度為7.35、14.7、29.4、 58.8、117.6和235.2 μg/ml的溶液。按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測定，記錄色譜圖，以進(jìn)樣量(C)為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積(A)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?；貧w方程為：A=771.2C-1.248 7(r=0.999 7)。結(jié)果表明，連翹苷在7.35～235.2 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取連翹苷的同一對照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積的RSD值為 0.78%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 分別取連翹苷的供試品溶液在室溫下放置0、1、4、8、10、12和24 h，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別測定，其峰面積RSD值為1.92%，結(jié)果表明樣品液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法平行制備樣品溶液6份, 按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測定其含量，連翹苷平均含量為1.56 mg/袋。RSD值為1.72%，表明分析方法重復(fù)性較好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的同一批號(hào)的樣品9份,研細(xì)，精密稱取，精密加入定量的連翹苷對照品溶液,按供試品溶液制備方法制備連翹苷的樣品溶液,并按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別測定。結(jié)果平均回收率為98.4%,RSD為1.23%。見表1。

表1 連翹苷加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.9 樣品測定 取樣品3批，按“2.2.2”項(xiàng)下方法分別制備供試品溶液，照上述色譜條件測定，外標(biāo)法定量。計(jì)算樣品中連翹苷的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品測定結(jié)果(n=3)

3 討論

副鼻竇顆粒為臨床應(yīng)用多年、療效確切的顆粒劑，藥材品種較多，化學(xué)成分復(fù)雜，其方中君藥為金銀藤，連翹為臣藥。筆者考查了HPLC法測定方中金銀藤活性成分綠原酸的含量，發(fā)現(xiàn)陰性干擾嚴(yán)重，專屬性差，難以作為定量指標(biāo)，而采用連翹中連翹苷的含量作為指標(biāo)成分進(jìn)行測定，專屬性強(qiáng)，可達(dá)到質(zhì)量控制的目的。本研究對副鼻竇顆粒中連翹苷的含量測定色譜條件進(jìn)行了考查，經(jīng)過對連翹苷對照品溶液的紫外吸收光譜測定,樣品和對照品溶液均在278 nm處有最大吸收，故選擇278 nm為檢測波長。流動(dòng)相的選擇，采用《中國藥典》方法，乙腈-水體系為流動(dòng)相時(shí)，可達(dá)到很好分離效果。經(jīng)考查本文確定色譜條件為乙腈-水(23∶77)為流動(dòng)相，流速為1 ml/min，檢測波長為278 nm。方法學(xué)考查結(jié)果表明，本方法操作簡單,結(jié)果準(zhǔn)確,重復(fù)性好,空白無干擾,可作為副鼻竇顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測定的方法。

1 中國藥典[].一部.2010：159-160

2 覃薛文,李志懷. RP-HPLC測定雙黃連顆粒中連翹苷的含量[J].中國藥師，2008，11(5)： 550-551

Determination of forsythin in Fubidou granules by HPLC

Liu Binguo, Ren Tao，Zhang Nan

(No 254 Hospital of PLA , Tianjin 300142)

Objective：To establish an HPLC method to determine the contets of forsythin in Fubidou granules. Methods：Forsythin was determined by HPLC with a ZORBAX SB-C18column(4.6 mm×150 mm,5 μm)at 25 ℃. The mobile phase was composed of acetonitrile and water at a ratio of 23 to 77, and detection wavelength was set at 278 nm. Results：The method was linear for the concentrations of forsythin over the range of 7.35～235.2 μg/ml with the average recovery of 98.4%(n=9). Conclusion：This methods is simple and reliable. It is suitable for the content control of forsythin in Fubidou granules.

Fubidou granules，forsythin，HPLC

2015-07-06

R927.2

A

1006-5687(2015)05-0022-02