李邇娜，張文萍，滕再進(jìn)

南京圣和藥業(yè)股份有限公司，南京 210038

HPLC-ELSD法測(cè)定消癌平注射液中牛奶菜醇和果糖含量*

李邇娜，張文萍，滕再進(jìn)**

南京圣和藥業(yè)股份有限公司，南京 210038

目的：建立HPLC-ELSD法測(cè)定消癌平注射液中牛奶菜醇和果糖的含量。方法：采用COSMOSIL Sugar-D糖分析專(zhuān)用柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），乙腈-水（80∶20）為流動(dòng)相，ELSD漂移管溫度：100℃，氮?dú)饬髁浚?.5 L·min-1。結(jié)果與結(jié)論：牛奶菜醇和果糖在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系（r＞0.9994）。本法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，為消癌平注射液中大極性成分的質(zhì)量控制提供了依據(jù)。

HPLC-ELSD法；消癌平；牛奶菜醇；果糖

通關(guān)藤系蘿藦科（Asclep iadaceae）牛奶菜屬植物通關(guān)藤[Marsdenia tenacissima（Roxb.）Wight et Arn]的干燥藤莖，始載于《滇南本草》，收載于1974年版《云南省藥品標(biāo)準(zhǔn)》、1977年版《中國(guó)藥典》以及2010年版《中國(guó)藥典》。以通關(guān)藤為主要原料制備的中藥消癌平注射液，臨床上用于治療肝癌、胃癌等各種惡性腫瘤，療效良好。

消癌平注射液中化學(xué)成分種類(lèi)較多，主要為C21甾體皂苷類(lèi)、有機(jī)酸及糖類(lèi)等[1-2]。目前，國(guó)內(nèi)外報(bào)道的通關(guān)藤或者消癌平注射液的含量測(cè)定主要是以綠原酸以及酚酸類(lèi)成分為指標(biāo)[3]，未見(jiàn)注射液中大極性成分HPLC法測(cè)定含量的報(bào)道。為了更好地控制消癌平注射液的質(zhì)量，為消癌平注射液再評(píng)價(jià)提供一定的依據(jù)，本文測(cè)定了消癌平注射液中含量較高的牛奶菜醇以及果糖的含量。由于常規(guī)C18柱不適用于測(cè)定糖類(lèi)成分含量，故選用半井公司生產(chǎn)的適合于分析單糖及低聚糖的COSMOSIL Sugar-D糖分析色譜柱，用HPLC-ELSD測(cè)定了消癌平注射液中牛奶菜醇和果糖的含量。

1 材 料

1.1 儀器

Agilent 1200 Series高效液相色譜儀 （含G1312A二元梯度泵、G1322A在線真空脫氣機(jī)、G1329A自動(dòng)進(jìn)樣器、G1315D DAD檢測(cè)器、HP Chem Station化學(xué)工作站）；Alltech ELSD 2000ES蒸發(fā)光散射檢測(cè)器；Mettler Toledo電子天平（XS105DU）。

1.2 試藥

果糖對(duì)照品 （批號(hào)：100231-200904，純度99.6%），牛奶菜醇對(duì)照品 （批號(hào)：NC-0403，純度：99.9%），均購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所；消癌平注射液 （規(guī)格：20 mL，24批，2012年、2013年各12批，注射液總酚酸含量為9.0～11.0 mg·mL-1，綠原酸含量為40～80 μg·mL-1）南京圣和藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；乙腈為色譜純；水為純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：COSMOSIL Sugar-D糖分析專(zhuān)用柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（80∶20）；柱溫：25℃；流速：1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量：20 μL；ELSD漂移管溫度：100℃；氮?dú)饬髁浚?.5 L·mL-1。牛奶菜醇、果糖對(duì)照品和消癌平注射液 （批號(hào)：201306081）色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 對(duì)照品（A）和消癌平注射液（B）液相色譜圖

2.2 溶液配制

2.2.1 對(duì)照品溶液 精密稱(chēng)取牛奶菜醇5.80 mg、果糖8.12 mg，分別置20 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液 精密移取消癌平注射液5 mL，置100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

分別量取 “2.2.1”中對(duì)照品溶液2.5（Ⅰ）、4（Ⅱ）、5（Ⅲ）、7.5（Ⅳ）mL置10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，分別取上述溶液以及“2.2.1”中對(duì)照品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，進(jìn)樣濃度的對(duì)數(shù)logC為橫坐標(biāo)，以峰面積的對(duì)數(shù)logA為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程分別為：牛奶菜醇logA=1.4084logC+8.2044（r=0.9994），線性范圍0.073～0.290 mg·mL-1；果糖 logA=1.6593logC+ 7.8800（r=0.9998），線性范圍0.102～0.406 mg·mL-1。

2.4 進(jìn)樣精密度試驗(yàn)

取“2.3”項(xiàng)下Ⅲ號(hào)溶液20 μL，注入液相色譜儀，連續(xù)測(cè)定6次，以峰面積計(jì)算，進(jìn)樣精密度較好，牛奶菜醇和果糖的RSD分別為1.89%、1.67%。

2.5 穩(wěn)定性與重復(fù)性試驗(yàn)

分別取供試品溶液（批號(hào)：201306081）20 μL于0、2、4、6、8 h進(jìn)樣，考察穩(wěn)定性，樣品在8 h內(nèi)穩(wěn)定性較好，牛奶菜醇和果糖的RSD分別為1.85%、2.30%。

分別取供試品溶液 （批號(hào)：201306081）20 μL，連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，樣品含量結(jié)果重復(fù)性較好，牛奶菜醇和果糖的RSD分別為1.95%、0.85%。

2.6 加樣回收率試驗(yàn)

取消癌平注射液（批號(hào)：201306081）1mL，置20mL量瓶中，加入精密稱(chēng)取的牛奶菜醇對(duì)照品2.52 mg、果糖對(duì)照品2.30 mg，用水溶解稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液A；取消癌平注射液（批號(hào)：201306081）1 mL，置20 mL量瓶中，加入精密稱(chēng)取的牛奶菜醇對(duì)照品3.29 mg、果糖對(duì)照品2.86 mg，用水溶解稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液B；取消癌平注射液（批號(hào)：201306081）1 mL，置20 mL量瓶中，加入精密稱(chēng)取的牛奶菜醇對(duì)照品3.82mg、果糖對(duì)照品3.45mg，用水溶解稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液C。分別取供試品溶液A、B、C各20 μL，連續(xù)進(jìn)樣3次，計(jì)算加樣回收率，牛奶菜醇和果糖的平均回收率分別為：96.8%、97.4%，RSD分別為2.78%、1.82%。

2.7 樣品含量測(cè)定

取消癌平注射液，依法測(cè)定其中牛奶菜醇和果糖含量，由表1可見(jiàn)，2012年與2013年消癌平注射液中牛奶菜醇及果糖含量均值較為接近。

表1 消癌平注射液牛奶菜醇和果糖含量測(cè)定結(jié)果（mg·mL-1）

3 討 論

消癌平注射液中牛奶菜醇及果糖含量較高，本實(shí)驗(yàn)以COSMOSIL Sugar-D糖柱-HPLC-ELSD法測(cè)定其含量，兩者與其余成分分離較好，為消癌平注射液的質(zhì)量控制、安全性再評(píng)價(jià)及通關(guān)藤中糖類(lèi)成分研究提供進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[1] 成冠藍(lán)，孔令義，張 倉(cāng).通關(guān)藤化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展[J].藥學(xué)與臨床研究，2009，17（2）：135-8.

[2] 楊 梅，王文蘭，吳 昊，等.通關(guān)藤中的孕甾醇苷類(lèi)成分[J].中草藥，2011，42（8）：1473-6.

[3] 賴(lài)玉菡，王 曙.HPLC測(cè)定通關(guān)藤中綠原酸含量[J].華西藥學(xué)雜志，2006，21（1）：79-81.

Determination of Condiritul and Fructose in Xiaoaiping Injection by HPLC-ELSD*

LI Er-na,ZHANG Wen-ping,TENG Zai-jin**
Nanjing Sanhome Pharmaceutical Co.,Ltd.,Nanjing 210038,China

Objective:To establish a quantitative HPLC-ELSD method for the determination of condiritul and fructose in Xiaoaiping Injection.Methods:A column of Cosmosil Sugar-D(4.6mm×250mm,5μm)was used with the mobile phase of water and acetonitrile(20∶80),the temperature of drift tube was set at 100℃and the nitrogen fIow rate at 2.5 L·min-1.Results and Conclusion:Calibration curves presented good linear regression(r＞0.9994). The established HPLC-ELSD method is simple and suitable for the quality control of Xiaoaiping Injection.

HPLC-ELSD;Xiaoaiping injection;Condiritul;Fructose

R927.2

A

1673-7806（2015）02-135-02

國(guó)家“重大新藥創(chuàng)新”科技重大專(zhuān)項(xiàng)資助項(xiàng)目（NO.2011ZX09201-201-02）

李邇娜，女，工程師 E-mail:lien@sanhome.com

* *通訊作者滕再進(jìn)，男，高級(jí)工程師 E-mail:tengzj@sanhome.com

2014-09-09

2014-10-21