孫文早，王　亮，黃　晶，鄒　毅

(湖北省仙桃市第一人民醫(yī)院，湖北 仙桃　433000)

血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子VEGF和轉(zhuǎn)錄因子YY1在垂體瘤中表達(dá)的意義

孫文早，王亮，黃晶，鄒毅

(湖北省仙桃市第一人民醫(yī)院，湖北 仙桃433000)

摘要：目的探討血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)和轉(zhuǎn)錄因子(Yin Yang-1,YY1)在垂體瘤中表達(dá)的意義。方法采用免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry-SP法)對(duì)臨床垂體瘤組織標(biāo)本進(jìn)行VEGF和YY-1蛋白表達(dá)的檢測(cè)，應(yīng)用RNAi(RNA interference)的方法對(duì)大鼠垂體瘤細(xì)胞系做傳代培養(yǎng)，培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行VEGF和YY1干擾，干擾后提取蛋白，用western blot測(cè)兩者蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果VEGF和YY1蛋白在侵襲性垂體瘤中的表達(dá)明顯高于非侵襲性垂體瘤(P<0.05)。RNAi的結(jié)果分析顯示，當(dāng)干擾VEGF后，YY1的蛋白表達(dá)也降低(P<0.05)，反過(guò)來(lái)干擾了YY1因子后VEGF蛋白的表達(dá)也降低(P<0.05)。同時(shí)在垂體瘤中VEGF和YY1蛋白共陽(yáng)性表達(dá)率為80.77%(21/26)，VEGF和YY1蛋白共陰性表達(dá)率為78.72%(37/47)，兩組表達(dá)表達(dá)存在正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論VEGF和YY1蛋白在侵襲性垂體瘤中的表達(dá)明顯高于非侵襲性垂體瘤，且VEGF和YY1蛋白的表達(dá)與患者的年齡、性別、腫瘤的大小沒(méi)有明顯相關(guān)，而與腫瘤的分化程度、浸潤(rùn)程度以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等存在一定的關(guān)系，且在垂體瘤中VEGF和YY1蛋白表達(dá)存在正相關(guān)。

關(guān)鍵詞:垂體瘤；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；轉(zhuǎn)錄因子

垂體瘤是顱內(nèi)常見(jiàn)的良性腫瘤，多發(fā)于成年人，由異常分泌的激素導(dǎo)致臟器損害，垂體瘤中侵襲性垂體瘤易表現(xiàn)為惡性腫瘤的一些特性。垂體瘤的發(fā)生、發(fā)展與新生血管的形成密切相關(guān)，隨著血管的形成，垂體瘤的侵襲潛能表現(xiàn)出來(lái)。而新生血管的形成依賴(lài)于血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)，龔曉燕等[1]總結(jié)VEGF的作用為促進(jìn)血管內(nèi)皮的增殖以及增加血管的通透性等，且VEGF的表達(dá)水平與腫瘤的微血管密度以及惡性程度成正相關(guān)[2]。所以VEGF能特異的作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，對(duì)細(xì)胞的有絲分裂起促進(jìn)作用，從而有助于腫瘤的生長(zhǎng)，趙達(dá)等[3]的研究稱(chēng)VEGF對(duì)直腸癌的侵襲轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系。而轉(zhuǎn)錄因子YY1的作用非常廣泛，對(duì)在細(xì)胞的分化增殖以及凋亡以及胚胎發(fā)育等方面起作用[4]，除此之外，轉(zhuǎn)錄因子YY1(Yin Yang-1,YY1)在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中的作用也被廣泛研究，Zaravinos等[5]對(duì)36個(gè)公共基因表達(dá)數(shù)據(jù)庫(kù)中多種類(lèi)型腫瘤的YY1的轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行分析統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)它的基因轉(zhuǎn)錄水平在大部分腫瘤中都顯著增高。本文就血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)和轉(zhuǎn)錄因子(YY1)在垂體瘤中的表達(dá)情況做分析，并探討兩者表達(dá)情況對(duì)垂體瘤發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性。

1資料與方法

1.1一般資料收集2012年1月到2014年1月在我院神經(jīng)外科收治的73例垂體瘤患者，包括男35例，女38例，平均年齡在45.3歲。所有患者行視力、視野檢查，并做頭顱CT、MRI檢查，并對(duì)患者根據(jù)Hardy分級(jí)分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分組[6]。符合下列三項(xiàng)中任意一項(xiàng)者我們認(rèn)為是侵襲性垂體瘤：(1)輔助檢查顯示腫瘤包繞雙側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈；(2)Hardy-Knosp分級(jí)分期：Ⅲ級(jí)或以上以及 C-E期；(3)病理證實(shí)鞍底硬膜和鄰近骨質(zhì)有瘤細(xì)胞。除侵襲性垂體瘤其余都?xì)w為非侵襲性垂體瘤。

1.2實(shí)驗(yàn)方法本實(shí)驗(yàn)研究采用免疫組化SP法檢測(cè)垂體瘤組織中VEGF以及YY1蛋白的表達(dá)。對(duì)標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)固定、包埋、切片(4 μm)。用已知陽(yáng)性表達(dá)的垂體瘤組織切片作陽(yáng)性對(duì)照，PBS緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照，所有實(shí)驗(yàn)操作步驟按照SP試劑盒說(shuō)明書(shū)嚴(yán)格進(jìn)行。購(gòu)買(mǎi)大鼠垂體瘤細(xì)胞系，做傳代培養(yǎng)，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行RNA干擾，提取相應(yīng)蛋白做western blot，檢測(cè)相應(yīng)蛋白的表達(dá)情況。細(xì)胞培養(yǎng)及RNA干擾技術(shù)都按照相應(yīng)操作說(shuō)明嚴(yán)格執(zhí)行。

1.3結(jié)果判斷對(duì)所有組織切片進(jìn)行鏡下觀察，在腫瘤細(xì)胞的胞核、胞漿中可見(jiàn)黃染的顆粒為VEGF陽(yáng)性染色，在腫瘤細(xì)胞的胞核中可見(jiàn)黃染的顆粒為YY1陽(yáng)性染色。我們根據(jù)黃染的深淺程度(0分：未見(jiàn)黃染，1分：有輕微黃染，2分：中度黃染，3分：重度黃染)以及黃染細(xì)胞所占的百分?jǐn)?shù)(0分：未見(jiàn)黃染，1分：黃染細(xì)胞<25%，2分：黃染細(xì)胞25%～50%，3分：黃染細(xì)胞>50%)綜合評(píng)定得分作為判定標(biāo)準(zhǔn)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料的組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料則采用卡方檢驗(yàn)。顯著性水準(zhǔn)α=0.05。

2結(jié)果

2.1VEGF和YY1蛋白在垂體瘤中的表達(dá)情況免疫組織化學(xué)分析顯示，侵襲性垂體瘤和非侵襲性垂體瘤性別以及年齡相比較沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)，但是VEGF和YY1蛋白在侵襲性垂體瘤中的表達(dá)明顯高于非侵襲性垂體瘤，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1　VEGF和YY1蛋白在垂體瘤中的表達(dá)情況

2.2VEGF和YY1蛋白的表達(dá)對(duì)大鼠垂體瘤細(xì)胞系GH3進(jìn)行傳代培養(yǎng)，并分別做VEGF和YY1的RNA干擾，干擾24 h后，提取相應(yīng)蛋白做western blot。對(duì)VEGF因子進(jìn)行RNA干擾后，YY1的蛋白表達(dá)量較未干擾前降低(P<0.05)，對(duì)YY1因子進(jìn)行RNA干擾后，VEGF的蛋白表達(dá)量較未干擾前降低(P>0.05)。

2.3VEGF和YY1蛋白表達(dá)的相關(guān)性在73例我們選取的垂體瘤組織中，當(dāng)VEGF蛋白陽(yáng)性表達(dá)(26例)時(shí)，YY1蛋白陽(yáng)性表達(dá)為21例，所以共陽(yáng)性表達(dá)率為80.77%(21/26)。而當(dāng)VEGF蛋白陰性表達(dá)(47例)時(shí)，而同時(shí)有YY1蛋白陰性表達(dá)為37例，所以共陰性表達(dá)率為78.72%(37/47)。通過(guò)分類(lèi)變量關(guān)聯(lián)性分析，我們可以認(rèn)為VEGF和YY1蛋白表達(dá)存在正相關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2　VEGF和YY1蛋白表達(dá)的相關(guān)性

3討論

垂體瘤是常見(jiàn)的顱內(nèi)良性腫瘤，雖然是良性腫瘤，它的生物學(xué)行為卻差異很大，僅用輔助影像學(xué)檢查我們很難客觀的評(píng)價(jià)其生物學(xué)行為。而目前國(guó)內(nèi)外的研究主要對(duì)垂體瘤相關(guān)的多種細(xì)胞因子進(jìn)行研究，從而對(duì)它的生物學(xué)特性有個(gè)更好的理解，從而對(duì)臨床工作具有更好的指導(dǎo)意義。垂體瘤的發(fā)生發(fā)展與新生血管的形成密切相關(guān)。VEGF能與血管內(nèi)皮細(xì)胞受體相結(jié)合，從而促進(jìn)新生血管的形成，在惡性腫瘤中，VEGF的表達(dá)與腫瘤的惡性程度呈正相關(guān)[7]。而核轉(zhuǎn)錄因子(YY1)是一種對(duì)細(xì)胞的增殖分化以及凋亡起重要作用的因子，其通過(guò)下調(diào)Notch配體從而對(duì)增殖起負(fù)調(diào)控作用[8]。劉光輝等[9]的研究稱(chēng)其在腫瘤的侵襲遷移過(guò)程中發(fā)揮作用，同時(shí)段海峰等[10]的研究稱(chēng)其對(duì)垂體瘤的侵襲作用有關(guān)，YY1通過(guò)上調(diào)MM-2、MM-9的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)它的侵襲性作用。所以本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)垂體瘤患者的VEGF和YY1的表達(dá)情況進(jìn)行探討，以期闡明兩者在垂體瘤中表達(dá)的意義。

VEGF和YY1廣泛表達(dá)與人體各種組織細(xì)胞中，VEGF是已知的促血管生長(zhǎng)的重要因子，而YY1參與眾多的生物學(xué)過(guò)程。本實(shí)驗(yàn)研究中，73例患者分為侵襲性垂體瘤和非侵襲性垂體瘤，他們?cè)谛詣e以及年齡上相比較沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)，但是VEGF和YY1蛋白在侵襲性垂體瘤中的表達(dá)明顯高于非侵襲性垂體瘤，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。這與多項(xiàng)研究認(rèn)為的VEGF與腫瘤的血管形成及發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起作用相一致。腫瘤的發(fā)生發(fā)展需要血管的支持，在侵襲性垂體瘤中VEGF的表達(dá)高于非侵襲性垂體瘤，這與它的生物學(xué)特性相吻合，說(shuō)明VEGF的確參與垂體瘤的生長(zhǎng)過(guò)程。YY1在侵襲性垂體瘤中的高表達(dá)，也與Nigris等[11-12]認(rèn)為的YY1的高表達(dá)與預(yù)后不良有關(guān)相一致。有研究稱(chēng)YY1的活性抑制后，腫瘤細(xì)胞的凋亡會(huì)增加[13]。通過(guò)我們的RNA干擾研究分析VEGF和YY1蛋白的在垂體瘤中的表達(dá)，當(dāng)VEGF因子被干擾后，YY1蛋白的表達(dá)降低(P<0.05)，當(dāng)YY1因子被干擾后， VEGF蛋白的表達(dá)降低(P<0.05)。最后我們的研究分析了VEGF和YY1蛋白的表達(dá)的相關(guān)性，在73例我們選取的垂體瘤組織中，當(dāng)VEGF蛋白陽(yáng)性表達(dá)(26例)時(shí)，YY1蛋白陽(yáng)性表達(dá)為21例，所以陽(yáng)性表達(dá)率為80.77%(21/26)。而當(dāng)VEGF蛋白陰性表達(dá)(47例)時(shí)，而同時(shí)有YY1蛋白陰性表達(dá)為37例，所以陽(yáng)性表達(dá)率為78.72%(37/47)。通過(guò)分類(lèi)變量關(guān)聯(lián)性分析，我們可以認(rèn)為VEGF和YY1蛋白表達(dá)存在正相關(guān)(P<0.05)，目前關(guān)于VEGF和YY1蛋白在垂體瘤中的共表達(dá)問(wèn)題還未見(jiàn)報(bào)道。

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(收稿日期：2015-01-22，修回日期：2015-03-26)

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2015.09.045