李耀中 孟祥斌

荷葉中總黃酮總生物堿及葉重變化規(guī)律的研究

李耀中 孟祥斌

本文對(duì)蘇南所產(chǎn)不同生長(zhǎng)時(shí)期的荷葉中總黃酮﹑總生物堿及平均葉重的變化規(guī)律進(jìn)行研究, 結(jié)果顯示8～9月間的荷葉的總黃酮含量﹑總生物堿含量及平均葉重最高, 分別達(dá)到72.93 mg/g﹑46.32 mg/g及20.07 g/片。此結(jié)果對(duì)指導(dǎo)區(qū)域荷葉藥材的采摘具有一定意義。

荷葉；提取工藝；優(yōu)化

中國(guó)藥典(2010版 一部)記載, 荷葉(lotus leaf)具有清暑化濕﹑升發(fā)清陽(yáng)﹑涼血止血的功效, 用于暑熱煩渴﹑暑濕泄瀉﹑血熱吐衄﹑便血崩漏等癥的治療。荷葉炭收澀化瘀止血, 用于治療出血癥和產(chǎn)后血暈等［1］。荷葉作為食用和藥用資源自古即有廣泛應(yīng)用, 近年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者加大了對(duì)荷葉的系統(tǒng)研究, 發(fā)現(xiàn)其主要含有生物堿﹑黃酮﹑揮發(fā)油﹑多糖等成分［2］,其中黃酮和生物堿類化合物的生物活性較高。藥理研究表明,荷葉主要具有調(diào)脂減肥﹑抗氧化﹑抗衰老﹑抑菌作用［3］。本文主要對(duì)蘇南所產(chǎn)荷葉在不同生長(zhǎng)時(shí)間的總黃酮和總生物堿及葉重變化的規(guī)律進(jìn)行了初步研究?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備 HZT-A200電子天平(福州華志科學(xué)儀器), UV-7504紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海欣茂儀器), RE-201D旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海聚昆儀器), FW135中草藥粉碎機(jī)(天津市泰斯特儀器), 101-1A數(shù)顯式電熱恒溫干燥箱(滬越科學(xué)實(shí)驗(yàn)儀器廠)。

1.2 材料與試劑

1.2.1 試驗(yàn)材料 荷葉原材料, 采于常州市新北區(qū)荷園。

1.2.2 試驗(yàn)試劑 荷葉堿標(biāo)準(zhǔn)品和蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(北京盛世康普化工技術(shù)研究院)；分析純?cè)噭阂掖缉p氯仿﹑鹽酸﹑氫氧化鈉﹑亞硝酸鈉﹑硝酸鋁﹑溴甲酚綠。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 荷葉的采集 5～10月期間, 在每月15日前后［4］, 選取采集產(chǎn)于常州市新北區(qū)荷園完整的荷葉葉片50片。

1.3.2 荷葉的處理 荷葉洗凈后, 65℃干燥, 稱總?cè)~片重量并計(jì)算平均葉重。荷葉經(jīng)粉碎過(guò)篩后進(jìn)行有關(guān)活性成分檢測(cè)。

1.3.3 荷葉總黃酮的測(cè)定

1.3.3.1 繪制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線 稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品10 mg, 用30%乙醇溶解, 定容至50 ml, 制備成濃度為0.2 mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別吸取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液0﹑0.5﹑1.0﹑1.5﹑2.0﹑2.5﹑3.0 ml于10 ml比色管中, 加入一定量的30%乙醇使最終體積為5 ml；加入0.3ml濃度為5%亞硝酸鈉溶液, 混合均勻；靜置5 min,加入0.3 ml濃度為10%硝酸鋁溶液混勻；靜置6 min, 加入4 ml濃度1 mol/L的NaOH溶液, 混合均勻；用30%乙醇標(biāo)定至刻度, 靜置10 min, 于510 nm處分別測(cè)定其吸光度值［6］。以吸光度(A)為縱坐標(biāo), 標(biāo)準(zhǔn)液濃度(C)為橫坐標(biāo), 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線, 得回歸方程：A=4.4027C+0.0105(R2=0.9986)。

1.3.3.2 荷葉中總黃酮的測(cè)定 稱取5 g荷葉粉碎物, 平行6份, 加入20倍量的70%乙醇溶液, 80℃提取2 h, 抽濾得提取液, 重復(fù)提取2次, 合并提取液, 減壓濃縮［6］, 濃縮液65℃干燥, 得荷葉總黃酮提取物, 取適量干燥提取物按2.3.1中的方法配制成待測(cè)液并測(cè)定其吸光值。根據(jù)回歸方程計(jì)算荷葉中總黃酮的含量。

1.3.4 荷葉總生物堿的測(cè)定

1.3.4.1 繪制荷葉堿標(biāo)準(zhǔn)曲線 稱取荷葉堿對(duì)照品10 mg,以適量氯仿溶解, 定容至50 ml, 制備成濃度為0.2 mg/ml 的對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別取0﹑1.0﹑2.0﹑3.0﹑4.0﹑5.0﹑6.0 ml對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液于10 ml比色管中, 加入0.2 mol/L的NaOH溶液1 ml﹑0.1%的溴甲酚綠溶液1ml, 加氯仿定容至刻度, 轉(zhuǎn)移至分液漏斗并振搖均勻, 靜置30 min, 取氯仿層, 415 nm測(cè)定其吸光值［7］。以吸光度(A)為縱坐標(biāo), 待測(cè)液濃度(C)為橫坐標(biāo), 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線, 得回歸方程：A=8.3457C+0.0044(R2=0.9978)。

1.3.4.2 荷葉中總生物堿的測(cè)定 稱取5 g荷葉粉碎物, 平行6份, 加入20倍量70%的乙醇溶液, 80℃提取2 h［8］, 過(guò)濾提取液, 重復(fù)提取2次, 合并提取液, 經(jīng)減壓濃縮, 濃縮液65℃干燥, 得荷葉總生物堿提取物, 取適量干燥提取物按2.4.1中的方法配制成待測(cè)液并測(cè)定其吸光值, 根據(jù)回歸方程計(jì)算荷葉中總生物堿的含量。

2 結(jié)果

按試驗(yàn)方法進(jìn)行, 荷葉葉片重量在8～9月成熟期達(dá)到最高, 均重為20.07g/片, 5～8月荷葉由營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)至成熟期間葉片逐漸增重, 9月后由于進(jìn)入衰老期, 因營(yíng)養(yǎng)消耗﹑物質(zhì)流失葉重有所減少。5～7月荷葉中的黃酮和生物堿類成分含量逐漸增加, 8～9月達(dá)到較高水平, 最高含量分別為：荷葉總黃酮72.93 mg/g﹑荷葉總生物堿46.32 mg/g, 之后進(jìn)入衰老期,隨著物質(zhì)流失, 兩種有效成分含量都有不程度的下降。見(jiàn)表1,圖1。另取8月15日前后所采集的荷葉粉碎物, 按2.2荷葉總黃酮的測(cè)定和2.3荷葉總生物堿的測(cè)定方法檢測(cè), 荷葉總黃酮含量為73.15 mg/g﹑荷葉總生物堿含量為45.85 mg/g, 重現(xiàn)性較好。

表1 不同時(shí)間荷葉中總黃酮含量﹑總生物堿含量及片重比較

圖1 不同時(shí)間荷葉總黃酮含量﹑總生物堿含量和片重曲線圖

3 小結(jié)

由研究結(jié)果可以發(fā)現(xiàn), 荷葉生長(zhǎng)到8～9月其片重和有效成分黃酮﹑生物堿的含量均達(dá)到較高水平, 適宜在此期間采摘荷葉作為藥材資源。本草記載的荷葉夏秋二季采摘夏季宜遲, 如此既可以保證荷葉新鮮, 又能獲得最大的資源量；秋季宜早, 這樣荷葉重量和有效成分含量還處于較高水平, 而且荷葉葉質(zhì)較好。

由于本試驗(yàn)所用荷葉為蘇南地區(qū)所產(chǎn), 其生長(zhǎng)情況和黃酮﹑生物堿含量及變化情況與其他區(qū)域存在一定差異, 但總體趨勢(shì)應(yīng)該差異不大, 仍具有一定的參考價(jià)值。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典(2010版 一部).中國(guó)醫(yī)藥科技出版社, 2010:258-259.

［2］張國(guó)慶, 馮習(xí)坤, 曾為馳, 等. 荷葉的化學(xué)和藥理研究進(jìn)展. 藥學(xué)實(shí)踐雜志, 2010, 28(5):328-330.

［3］王福剛, 曹娟, 劉斌, 等. 荷葉的化學(xué)成分及其藥理作用研究進(jìn)展. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥, 2010, 21(9):2339-2340.

Research of varying pattern of total flavones, total alkaloid and leaf weight in lotus leaf

LI Yaozhong, MENG Xiang-bin. School of Pharmaceutical and Environmental Engineering, Changzhou Engineering Professional Technology Institute, Changzhou 213164, China

This paper provided research of varying pattern of total flavones, total alkaloid and average leaf weight in lotus leaf during different growth period in southern Jiangsu. Its results showed highest levels of total flavones, total alkaloid and average leaf weight during August～September, as 72.93 mg/g, 46.32 mg/g, and 20.07 g/ leaf. This result contained certain significance for guidance of collecting regional lotus leaf as medicinal material.

Lotus leaf; Extraction process; Optimization

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.22.214

2015-07-24］

常州市科技計(jì)劃資助(項(xiàng)目編號(hào)：CE20132016)

213164 常州工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院 制藥與環(huán)境工程學(xué)院