顧文龍 郝書林 王 靜 張 權(quán) 端禮欽

（徐州市農(nóng)水畜禽產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)中心,江蘇徐州 221006）

石墨爐原子吸收光譜法快速測(cè)定小白鼠全血中鉛殘留量

顧文龍 郝書林 王 靜 張 權(quán) 端禮欽*

（徐州市農(nóng)水畜禽產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)中心,江蘇徐州 221006）

為了對(duì)小白鼠全血中鉛殘留量進(jìn)行快速測(cè)定，建立了全血經(jīng)酸消化后直接用于石墨爐原子吸收光譜測(cè)定的實(shí)驗(yàn)方法。確定了消化用酸的種類、體積以及消化時(shí)間，并與國(guó)標(biāo)前處理方法進(jìn)行了比較。方法線性范圍0～32.0 μg/L，加標(biāo)回收率為87.58%～103.94%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.45%～6.02%，檢出限為3.5 μg/L。本方法簡(jiǎn)單、快速、節(jié)省試劑，適合全血中鉛殘留量的快速檢測(cè)。

石墨爐原子吸收法 鉛 全血

鉛是一種能嚴(yán)重危害人類健康的重金屬元素，在我國(guó)衛(wèi)生、環(huán)境、食品、農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全等標(biāo)準(zhǔn)中是一項(xiàng)重要檢測(cè)指標(biāo)。檢測(cè)血鉛的方法有石墨爐原子吸收法、氫化物原子熒光法、微分電位溶出法等[1～3]。石墨爐原子吸收法具有操作簡(jiǎn)便，靈敏度高，重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，是最常用的方法之一。

為了防止小白鼠血液靜置時(shí)間過長(zhǎng)發(fā)生凝結(jié)給檢測(cè)帶來(lái)困難，本文建了一種快速測(cè)定小白鼠全血中鉛殘留量的石墨爐原子吸收光譜法，與常規(guī)前處理方法相比，本方法操作簡(jiǎn)單，處理速度快，節(jié)約大量試劑，為全血中鉛殘留量分析工作提供了可靠分析依據(jù)。

1 檢測(cè)方法

1.1 儀器與試劑

Spectr AA220原子吸收光譜儀（配石墨爐、鉛空心陰極燈、美國(guó)瓦里安公司）；BSA323S電子天平（感量1 mg、賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）；DB不銹鋼可調(diào)電熱板（金壇市科興儀器廠）；Milli～Q Advantage A10 超純水系統(tǒng)（默克化工技術(shù)有限公司）。

硝酸、高氯酸、鹽酸、磷酸二氫銨（優(yōu)級(jí)純，國(guó)藥集團(tuán)）；0.5%硝酸（取5 ml硝酸定容到1000 ml）；混合強(qiáng)酸（V/V；硝酸：高氯酸=9：1）；王水（V/V；鹽酸：硝酸=3：1）；基體改進(jìn)劑磷酸二氫銨溶液（稱取0.500 g磷酸二氫銨，定容到100 ml）；鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液（購(gòu)自國(guó)家環(huán)境標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心，濃度為500 mg/ L）；鉛標(biāo)準(zhǔn)使用液（用0.5%硝酸逐級(jí)稀釋到500 μg/L）；實(shí)驗(yàn)用水為Milli～Q Advantage A10 超純水系統(tǒng)所制一級(jí)水。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 儀器工作條件

波長(zhǎng)283.3 nm，狹縫0.5 nm，燈電流8.0 mA，干燥溫度120℃，20 s；灰化溫度500℃，15 s；原子化溫度2100℃，5 s；背景校正為氚燈，測(cè)量方式為峰高，進(jìn)樣體積15 μl。

1.2.2 全血前處理

吸取0.3 ml全血樣品于試管中，加入消化液，待消化完成后用實(shí)驗(yàn)用水定容至10 ml，同時(shí)加入5 μl基體改進(jìn)劑磷酸二氫銨溶液，搖勻，靜置30 min上機(jī)待測(cè)，同時(shí)做試劑空白。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

分別吸取0、0.16、0.24、0.32、0.48、0.64 ml鉛標(biāo)準(zhǔn)使用液于10 ml容量瓶，0.5%硝酸定容，同時(shí)加入5 μl基體改進(jìn)劑磷酸二氫銨溶液，配置成濃度分別為0.0、8.0、12.0、16.0、24.0、32.0 μg/ L的鉛標(biāo)準(zhǔn)使用液，按儀器工作條件進(jìn)行測(cè)定。斜率，得出方法檢出限為3.5 μg/L。

2.2 消化液的選擇

取同一全血樣品分別用1 ml硝酸、混合強(qiáng)酸、王水進(jìn)行消化后，按儀器工作條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，硝酸消化后所測(cè)鉛殘留量為0.347 mg/L；混合酸消化后所測(cè)鉛殘留量為0.358 mg/L；王水消化后所測(cè)鉛殘留量為0.339 mg/L。三種消化液消化后的鉛殘留量檢測(cè)結(jié)果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.74%，檢測(cè)結(jié)果并無(wú)明顯偏差，表明三種消化液消化全血樣品的效果相當(dāng)?？紤]到實(shí)驗(yàn)的便捷性和經(jīng)濟(jì)性，因此直接使用硝酸做消化液。

2.3 消化時(shí)間對(duì)消化結(jié)果的影響

對(duì)消化時(shí)間進(jìn)行了考察，取同一全血樣品0.3 ml于試管中，加入硝酸1 ml，分別消化5、10、15、20、30、40、50、60 min后去離子水定容至10 ml，搖勻，靜置后按儀器工作條件進(jìn)行測(cè)定。

圖1 消化時(shí)間對(duì)消化效果的影響

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線與檢出限

以標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)吸光度值為縱坐標(biāo)，經(jīng)最小二乘法線性擬合，得出在0.0～32.0 μg/L濃度范圍內(nèi)，線性回歸方程為y=0.0085x+0.0045，相關(guān)系數(shù)r=0.9991。連續(xù)測(cè)定試劑空白吸光值12次，用3倍空白溶液的吸光值的標(biāo)準(zhǔn)偏差除以方法曲線

結(jié)果如圖1所示，全血樣品在0～10 min內(nèi)，被快速消化，10 min鉛殘留量基本釋放完全，20 min之后，所測(cè)鉛殘留量有所下降。可能是因?yàn)檠撼煞謴?fù)雜，消化時(shí)間越長(zhǎng)，后期產(chǎn)生的副反應(yīng)增多，分散在消化液中鉛隨之減少。為了保證消化效果，同時(shí)防止消化時(shí)間過長(zhǎng)導(dǎo)致副反應(yīng)，因此選擇的消化時(shí)間為20 min。

2.4 消化液體積對(duì)消化結(jié)果的影響

取同一全血樣品、分別加入1、2、3、4、5倍于全血樣品體積的硝酸消化20 min，然后按照儀器工作條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果如圖2所示，在同等時(shí)間下，消化液體積增加，消化效果隨之增加，當(dāng)達(dá)到血樣3倍左右體積酸用量后，鉛殘留量檢測(cè)值達(dá)到最大值。過量的酸不僅會(huì)造成不必要的浪費(fèi)，而且會(huì)污染環(huán)境，減少石墨管的使用壽命，降低檢測(cè)精密度，還有可能進(jìn)一步發(fā)生其他副反應(yīng)，降低實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性，所以選擇了1 ml的硝酸，即3.3倍于全血樣品體積的硝酸進(jìn)行消化。

2.5 精密度與準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)

取三份不同濃度水平的全血樣品，按照實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行處理，重復(fù)測(cè)定6次，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD，考察方法精密度，結(jié)果見表1。RSD在3.45%～6.02%之間，符合檢測(cè)要求。

圖2 消化液體積對(duì)消化結(jié)果的影響

表1 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

取3份不同濃度水平的全血樣品，加入三種不同濃度水平鉛標(biāo)準(zhǔn)使用液，按照實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行處理、測(cè)定、計(jì)算加標(biāo)回收率，考察方法準(zhǔn)確度，結(jié)果見表2。加標(biāo)回收率在87.58～103.94%之間，符合檢測(cè)要求。

表2 準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.6 與濕式消解法的比較

取不同濃度水平的全血樣品6份，分別用本實(shí)驗(yàn)方法和《GB 5009.12～2010 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中鉛的測(cè)定》第一法石墨爐原子吸收光譜法試樣預(yù)處理濕式消解法進(jìn)行前處理和測(cè)定鉛殘留量。結(jié)果如下：

表3 本實(shí)驗(yàn)方法與濕式消解法處理后樣品檢測(cè)結(jié)果

對(duì)兩種前處理方法的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行t檢驗(yàn)，t=0.122〈t0.05/2，5=2.015，P〉0.05，兩種方法檢測(cè)結(jié)果在0.05水平上差異不明顯，即本實(shí)驗(yàn)方法測(cè)量結(jié)果與《GB 5009.12～2010 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中鉛的測(cè)定》第一法石墨爐原子吸收光譜法試樣預(yù)處理濕式消解法檢測(cè)結(jié)果差異不明顯。濕式消解雖然能較好地去除基體的有機(jī)干擾，但前處理時(shí)間較長(zhǎng)，操作步驟多，稀釋倍數(shù)大，易受污染；而本實(shí)驗(yàn)方法采用強(qiáng)酸脫蛋白，能夠?qū)⒀褐械慕^大部分有機(jī)物沉淀分離，能較好地去除基質(zhì)干擾，同時(shí)前處理時(shí)間短，操作簡(jiǎn)便。

2.7 全血中鉛殘留量與腎臟中鉛殘留量的相關(guān)性

取同體小白鼠全血與腎臟，全血使用本實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行處理和測(cè)定，腎臟采用《GB 5009.12～2010 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中鉛的測(cè)定》第一法石墨爐原子吸收光譜法進(jìn)行處理和檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果如圖3所示，鉛在腎臟中的殘留量較高，在血液中殘留量較低，兩者之間有較好的對(duì)應(yīng)關(guān)系。

圖3 血鉛含量與腎鉛含量對(duì)照?qǐng)D

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)采用硝酸作為消化液來(lái)處理血液中的蛋白和分離其他有機(jī)物，選擇了合適的消化液體積和消化時(shí)間，能較好地去除基質(zhì)干擾，檢測(cè)精密度、準(zhǔn)確度均較好。與國(guó)標(biāo)前處理方法進(jìn)行了對(duì)比，效果相當(dāng)，同時(shí)具有使用試劑少、處理時(shí)間短、實(shí)驗(yàn)效率高等優(yōu)點(diǎn)，適合全血中鉛殘留量的檢測(cè)。

[1] 肖潔，蔡曉斌，張春和，等.石墨爐原子吸收光譜法測(cè)定全血中鉛[J].理化檢驗(yàn)——化學(xué)分冊(cè)，2008，44（7）：666-667.

[2] 麥潔梅，成曉玲，張琪.氫化物發(fā)生～原子熒光光譜法測(cè)定全血中鉛的研究[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2007，17（8）：1416-1418.

[3] 金米聰，王立，陳曉紅.微分電位溶出法快速測(cè)定全血中鉛[J].理化檢驗(yàn)——化學(xué)分冊(cè)，2002，38（6）：293-294.