李保利，王 芳，彭宏艷

（安陽(yáng)工學(xué)院，河南安陽(yáng)455000）

白藜蘆醇是多酚類物質(zhì)[1]，具有抗菌消炎，降血脂，預(yù)防心血管疾病，抗腫瘤，對(duì)治療心腦血管疾病有很好的效果[2-4]，并且毒副作用很小，有利于長(zhǎng)期作為治療藥物應(yīng)用于臨床治療，尤其是在心血管類疾病和癌癥的防治上具有良好的應(yīng)用前景[5]。紫杉醇曾被認(rèn)為是一種抗癌藥和新型保健品的藥用成分，而白藜蘆醇的出現(xiàn)則被認(rèn)為是繼紫杉醇之后又一極具潛力的抗癌防癌新藥。

近年來(lái)，隨著人們?cè)趯?duì)白藜蘆醇的研究，發(fā)現(xiàn)中藥虎杖中含有豐富的白藜蘆醇。盡人皆知，中藥是中華民族傳統(tǒng)文化特色的一部分，我們對(duì)中藥的研究博大精深，集中力量研究虎杖中白藜蘆醇提取方法，找出合理有效的分離純化技術(shù)，必將產(chǎn)生顯著的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。目前對(duì)虎杖的提取大多采用溶劑提取法，如乙醇法、超聲波提取法等[6]，本實(shí)驗(yàn)對(duì)虎杖中白藜蘆醇的提取采用堿提取法，該方法簡(jiǎn)單易行、經(jīng)濟(jì)，減少了化學(xué)試劑的污染。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

虎杖（Polygonum Cuspidatum），安陽(yáng)天大藥房，產(chǎn)地山西；氫氧化鉀，分析純，天津市北方化玻購(gòu)銷中心；氫氧化鈉，分析純，天津市進(jìn)豐化工有限公司；碳酸氫鈉，分析純，天津市進(jìn)豐化工有限公司；無(wú)水碳酸鈉，分析純，天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠；鹽酸，分析純，洛陽(yáng)市化學(xué)試劑廠；甲醇，分析純，天津市富宇精細(xì)化工有限公司。

CP214電子分析天平，上海奧豪斯儀器有限公司；T6新世紀(jì)紫外分光光度，北京普析通用儀器有限公司；Spectrum RX-1 紅外光譜儀，美國(guó)Perkin Elmer 公司；SHZ-D(Ⅲ)水循環(huán)真空泵，鄭州鞏義予華儀器公司；電熱鼓風(fēng)干燥箱，天津華北試驗(yàn)儀器公司；FW135中藥粉碎機(jī)，天津市泰斯特儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)原理

白藜蘆醇和茶多酚結(jié)構(gòu)式如下：

白藜蘆醇和茶多酚都屬于多元酚類物質(zhì)，并且具有弱酸性。應(yīng)用堿提取酸沉淀的方法提取茶多酚的研究多見于報(bào)道，據(jù)此，白藜蘆醇的提取采用該法應(yīng)該可行。利用白藜蘆醇在堿性水溶液中成鹽而溶解能力增大的性質(zhì)，用堿水為溶劑煮沸提取，然后在堿水提取液加酸酸化后，白藜蘆醇的酚鹽重新轉(zhuǎn)化成低水溶性的白藜蘆醇，從而使白藜蘆醇以沉淀形式從溶液中分離出來(lái)[7-9]。

2 結(jié)果與討論

2.1 pH值對(duì)提取物的影響

通過(guò)用KOH 調(diào)節(jié)蒸餾水不同pH 值所得到的提取物產(chǎn)量以及相應(yīng)的紫外吸收數(shù)據(jù)的整理，得到pH 值對(duì)提取物產(chǎn)量和吸光度影響的曲線圖，如圖1和圖2。

由圖1 和圖2 可知，pH 值為10 時(shí)提取物吸光度最大，提取物的產(chǎn)量也比較大，說(shuō)明該條件下白藜蘆醇的提取效果比較好；雖然pH 值為14 時(shí)，所得產(chǎn)量很大，但是吸光度卻很小，說(shuō)明提取物中所含雜質(zhì)非常多，白藜蘆醇的含量就會(huì)相對(duì)很少，并且不利于進(jìn)一步的純化工作；當(dāng)pH值為8和pH值為12時(shí)，雖然吸光度不是特別低，但是所得到的提取物產(chǎn)量過(guò)少，所以選擇pH=10 為堿提的最佳pH值。

2.2 不同無(wú)機(jī)堿對(duì)提取物產(chǎn)量的影響

用不同無(wú)機(jī)堿對(duì)提取物產(chǎn)量的影響實(shí)驗(yàn)所記錄的數(shù)據(jù)結(jié)果，得到如圖3所示的曲線關(guān)系圖。

由圖3 可知，4 種不同無(wú)機(jī)堿調(diào)節(jié)實(shí)驗(yàn)所用的蒸餾水的pH 值，采用氫氧化鉀時(shí)，所得提取物產(chǎn)量最大。而用碳酸氫鈉和碳酸鈉調(diào)節(jié)pH 值時(shí)，所得提取物產(chǎn)量較低，其原因可能是：碳酸氫鈉和碳酸鈉是強(qiáng)堿弱酸鹽，在相同pH 值下酚羥基轉(zhuǎn)化為游離酚鈉基團(tuán)的數(shù)量和程度不夠。

2.3 原料粒度對(duì)提取物產(chǎn)量和真空抽濾時(shí)間的影響

原料粒度對(duì)提取物產(chǎn)量和真空抽濾時(shí)間的影響如圖4和表1。

表1 原料粒度對(duì)真空抽濾時(shí)間的影響

由圖4 可以看出，當(dāng)原料粒度為20 目時(shí)的提取物產(chǎn)量要低于過(guò)40目和60目時(shí)提取物的產(chǎn)量，原因可能是：雖然所用抽濾時(shí)間很短，但是由于過(guò)20 目篩子時(shí)得到的虎杖粉末粒度較大，在浸泡時(shí)不利于白藜蘆醇的浸出。當(dāng)篩子目數(shù)為80 和100時(shí)，所得提取物產(chǎn)量很低，原因可能是：1）虎杖粉末粒度太小，浸泡過(guò)程中水溶性糖增多，煮沸之后，成為黏稠糊狀物，很難抽濾，得到的濾液很少，致使產(chǎn)量很少；2）白藜蘆醇是光解性物質(zhì)，原料粒度在80～100 目時(shí)，所用抽濾時(shí)間特別長(zhǎng)，白藜蘆醇光解較多。當(dāng)篩子目數(shù)為40目和60目時(shí)，所得提取物產(chǎn)量相差不大，但是如表1 所示，原料粒度為40目時(shí)所用抽濾時(shí)間比60目時(shí)節(jié)省將近2個(gè)小時(shí)。綜上所述，堿提取時(shí)虎杖粒度以40目為最佳。

2.4 浸泡時(shí)間對(duì)提取物產(chǎn)量的影響

通過(guò)對(duì)浸泡時(shí)間因素影響實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果的整理，得到如圖5的曲線關(guān)系圖。

由圖5可以看出，浸泡時(shí)間為8 h時(shí)，得到的提取物產(chǎn)量較低，可能是虎杖粉末不能充分潤(rùn)漲，在恒速、均勻攪拌，加熱煮沸時(shí)，不利于產(chǎn)物的分離；由圖可以看出，浸泡時(shí)間為20 h時(shí)，得到的提取物產(chǎn)量反而減小，可能原因是：一部分白藜蘆醇受光分解；浸泡時(shí)間為12 h和16 h時(shí)，得到的產(chǎn)物分別為0.3698 g 和0.3780 g，雖然浸泡時(shí)間為16 h 時(shí)的產(chǎn)量稍高，但是所用時(shí)間較長(zhǎng)，考慮到綜合效益，浸泡時(shí)間選擇12 h為好。

2.5 用1 mol/L 的鹽酸調(diào)節(jié)不同pH 值對(duì)提取物產(chǎn)量的影響

通過(guò)對(duì)1 mol/L 的鹽酸調(diào)節(jié)不同pH 值對(duì)提取物產(chǎn)量和吸光度影響的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果整理，得到如圖6和圖7的曲線關(guān)系圖。

綜合圖6 和圖7 分析可知，當(dāng)pH=4 和pH=5 時(shí)提取物的產(chǎn)量低并且吸光度小，可能原因是此時(shí)白藜蘆醇沉淀不完全；當(dāng)pH=2 和pH=3 時(shí)的產(chǎn)量差別很小，分別為0.2487 g 和0.2483 g，由圖7 可知，pH=2時(shí)提取物的吸光度較小，所以此時(shí)白藜蘆醇含量較小；綜合兩者可以得出，選擇pH=3 為酸沉淀的條件較好。

2.6 紫外分光光度法對(duì)白藜蘆醇的檢測(cè)

白藜蘆醇是一種含有芪類結(jié)構(gòu)的非黃酮類多酚化合物，自然界存在有順式(cis-)和反式(trans-)兩種構(gòu)型異構(gòu)體，白藜蘆醇的結(jié)構(gòu)式為[7]：

白藜蘆醇反式異構(gòu)體的生物活性強(qiáng)于順式異構(gòu)體，在紫外光照射下反式白藜蘆醇能夠轉(zhuǎn)化為其順式異構(gòu)體。反式與順式白藜蘆醇在紫外光(UV)210 nm 處有強(qiáng)吸收，其第二吸收峰在分別在305～330 nm和280～295 nm[10]。

稱量最佳條件下得到的白藜蘆醇提取物0.1000 g，溶解于適量甲醇溶液，配制白藜蘆醇粗提物濃度為0.04g/L，即為做紫外分光光度實(shí)驗(yàn)所用溶液。

用甲醇做空白，測(cè)得上述溶液的紫外圖如圖8所示。

由圖8可以看出，產(chǎn)物在紫外光200 nm與300 nm 之間有兩個(gè)吸收峰，峰的位置是212 nm 處和282 nm 處，結(jié)果與文獻(xiàn)[10]的出峰波長(zhǎng)范圍相一致，說(shuō)明提取物中的確含有白藜蘆醇。

2.7 紅外分光光度法對(duì)白藜蘆醇的檢測(cè)

白藜蘆醇紅外掃描圖譜的特征吸收峰：3250cm-1處的為酚羥基吸收峰；1620、1540、1500 cm-1處的為苯環(huán)吸收峰；965 cm-1處的為反式碳碳雙鍵的特征吸收峰，700 cm-1處的為順式碳碳雙鍵的特征吸收峰[11]。

如圖9所示為得到的粗提物的紅外光譜曲線，通過(guò)對(duì)記錄數(shù)據(jù)分析：在3448 cm-1處的為酚羥基吸收峰，1616 cm-1、1560 cm-1、1500 cm-1處的為苯環(huán)吸收峰，960 cm-1處的為反式碳碳雙鍵的特征吸收峰，712 cm-1處的為順式碳碳雙鍵的特征吸收峰，由此可確定粗提物中含有白藜蘆醇。

3 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)采用單因素實(shí)驗(yàn)，考察了原料粒度、無(wú)機(jī)堿的種類及用量、pH值、浸泡時(shí)間等因素對(duì)白藜蘆醇提取的影響，得出白藜蘆醇?jí)A提酸沉的最佳條件：原料粒度為過(guò)40 目篩，提取溶劑用氫氧化鉀，調(diào)節(jié)蒸餾水pH 值為10，浸泡12 h 加熱煮沸1 h，濾液用1 mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH值為3，放置沉淀。

所得到的粗提物經(jīng)過(guò)紫外光譜檢測(cè)分析，得到圖譜與文獻(xiàn)所記錄的白藜蘆醇出峰位置一致，據(jù)此判斷粗提物中確實(shí)含有白藜蘆醇。由紅外圖譜分析亦可確定粗提物中含有白藜蘆醇。下一步努力的方向是得到虎杖粗提物中白藜蘆醇的精確含量，再探索比如土茯苓，葡萄籽，花生紅衣等富含白藜蘆醇的原料中白藜蘆醇的精確含量。為新藥的開發(fā)提供一定的基礎(chǔ)。

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