曹 靜，呂志排，黨秋紅，郝志偉，李道明

1)鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院病理科 鄭州 450052 2)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科 鄭州 450052

宮頸腺癌組織中C-erbB-2與E-cadherin蛋白的表達(dá)*

曹 靜1)，呂志排1)，黨秋紅1)，郝志偉1)，李道明2)#

1)鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院病理科 鄭州 450052 2)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科 鄭州 450052

#通信作者，男，1963年10月生，博士，主任醫(yī)師，研究方向：腫瘤病理，E-mail：lidaoming@zzu.edu.cn

C-erbB-2；E-cadherin；宮頸腺癌

目的：探討宮頸腺癌組織中C-erbB-2和E-cadherin蛋白的表達(dá)與宮頸腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系。方法：應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)72例宮頸腺癌組織中C-erbB-2和E-cadherin蛋白的表達(dá)情況，分析二者與宮頸腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果：72例宮頸腺癌組織中，C-erbB-2高表達(dá)31例(43.1%)，E-cadherin低表達(dá)34例(47.2%)。C-erbB-2高表達(dá)和E-cadherin低表達(dá)與宮頸腺癌的分化程度、FIGO分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。宮頸腺癌組織中C-erbB-2與E-cadherin的表達(dá)呈負(fù)關(guān)聯(lián)(rP=0.600，P<0.001)。結(jié)論：C-erbB-2高表達(dá)和E-cadherin低表達(dá)與宮頸腺癌的發(fā)展有關(guān)，可作為判斷宮頸腺癌生物學(xué)行為的重要參考指標(biāo)。

宮頸腺癌占宮頸腫瘤的10%～15%，近些年其發(fā)病率有增長(zhǎng)趨勢(shì)；宮頸腺癌的治療反應(yīng)及生物學(xué)行為不同于宮頸鱗狀細(xì)胞癌，且預(yù)后較差[1]。C-erbB-2屬于酪氨酸激酶受體(receptor tyrosine kinase，RTK)家族，參與腫瘤的發(fā)生，并與腫瘤細(xì)胞增殖、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[2]。上皮細(xì)胞鈣黏蛋白E-cadherin是一類介導(dǎo)同質(zhì)細(xì)胞黏附的鈣依賴性黏附分子，對(duì)維持正常細(xì)胞間的黏附力、抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲有重要作用。有數(shù)據(jù)[3]顯示E-cadherin是腫瘤進(jìn)展的關(guān)鍵蛋白，E-cadherin低表達(dá)常伴隨腫瘤細(xì)胞的去分化、極性消失，亦與腫瘤發(fā)生和浸潤(rùn)有關(guān)。有學(xué)者[4]認(rèn)為C-erbB-2過(guò)表達(dá)可以通過(guò)抑制E-cadherin的表達(dá)介導(dǎo)腫瘤演進(jìn)和轉(zhuǎn)移。作者采用免疫組化法檢測(cè)宮頸腺癌組織中C-erbB-2和E-cadherin蛋白的表達(dá)情況，探討二者在宮頸腺癌的發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用及臨床價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 材料 收集2009年1月至2013年12月鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科手術(shù)切除的宮頸腺癌組織標(biāo)本72例，均經(jīng)病理證實(shí)?；颊吣挲g35～76(58.1±9.3)歲，有完整的臨床資料且術(shù)前均未行放、化療。依據(jù)2009年版FIGO分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ期42例(ⅠA期7例、ⅠB期35例)，Ⅱ期16例(ⅡA期10例、ⅡB期6例)，Ⅲ期8例(ⅢA期2例、ⅢB期6例)，Ⅳ期6例(ⅣA期4例、ⅣB期2例)；組織學(xué)分級(jí)：低分化12例，中分化45例，高分化15例；術(shù)后病理證實(shí)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者12例。

1.2 宮頸腺癌組織中C-erbB-2及E-cadherin蛋白表達(dá)的檢測(cè) 兔抗人C-erbB-2單克隆抗體及鼠抗人E-cadherin單克隆抗體購(gòu)自上?；蚩萍加邢薰?，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的En Vision試劑盒購(gòu)自丹麥DaKo公司。采用En Vision法行免疫組化標(biāo)記，操作步驟按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行：3 μm厚石蠟切片經(jīng)脫蠟、水化及預(yù)處理，阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，一抗孵育，En Vision孵育，蘇木素復(fù)染并封片。采用PBS代替一抗作陰性對(duì)照，已知陽(yáng)性片作陽(yáng)性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定 C-erbB-2及E-cadherin陽(yáng)性染色呈棕黃色顆粒，均定位于胞膜。取10個(gè)高倍鏡視野，分別記錄陽(yáng)性細(xì)胞的染色強(qiáng)度及所占百分比。C-erbB-2判定標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)著色且陽(yáng)性細(xì)胞百分比≤10%或陽(yáng)性細(xì)胞百分比>10%且胞膜呈淺黃色、染色間斷，判定為低表達(dá)；陽(yáng)性細(xì)胞百分比>10%且胞膜呈棕黃色或棕褐色、染色連續(xù)、環(huán)繞整個(gè)胞膜，判定為高表達(dá)。E-cadherin判定標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)0分；陽(yáng)性細(xì)胞百分比<25%計(jì)1分，25%～計(jì)2分，51%～75%計(jì)3分，>75%計(jì)4分；無(wú)色計(jì)0分，淺黃色計(jì)1分，棕黃色計(jì)2分，棕褐色計(jì)3分。兩項(xiàng)指標(biāo)評(píng)分相乘，0～2分為陰性，3～5分為(+)，6～8分為()，9～12分為()；陰性或(+)判定為低表達(dá)，()及()判定為高表達(dá)[5]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 19.0處理數(shù)據(jù)。采用χ2檢驗(yàn)比較不同臨床病理特征人群C-erbB-2及E-cadherin高(低)表達(dá)率的差異，采用Pearson列聯(lián)系數(shù)分析宮頸腺癌組織中2種蛋白表達(dá)的關(guān)系。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 C-erbB-2及E-cadherin的表達(dá)與宮頸腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系 見(jiàn)圖1。72例宮頸腺癌中，C-erbB-2高表達(dá)31例(43.1%)，E-cadherin低表達(dá)34例(47.2%)。宮頸腺癌分化越差、FIGO分期越高或出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，C-erbB-2高表達(dá)率越高，而E-cadherin低表達(dá)率越高(表1)。

圖1 宮頸腺癌組織中C-erbB-2蛋白高表達(dá)(A)、E-cadherin蛋白低表達(dá)(B)(En Vision,×200)表1 C-erbB-2及E-cadherin的表達(dá)與宮頸腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系 例(%)

2.2 宮頸腺癌組織中C-erbB-2及E-cadherin表達(dá)的關(guān)系 宮頸腺癌組織中C-erbB-2及E-cadherin的表達(dá)呈負(fù)關(guān)聯(lián)(rP=0.600,P<0.001)(表2)。

表2 宮頸腺癌組織中C-erbB-2及E-cadherin表達(dá)的關(guān)系 例

3 討論

近些年來(lái)，宮頸腺性病變的發(fā)病率不斷升高，嚴(yán)重危害婦女的生命健康。C-erbB-2基因定位于染色體17q21，蛋白產(chǎn)物是一種相對(duì)分子質(zhì)量為185 000的酪氨酸激酶跨膜蛋白[6]。C-erbB-2是一種原癌基因，其蛋白產(chǎn)物是EGFR家族中的重要成員；C-erbB-2在正常宮頸組織中幾乎不表達(dá)[7]，C-erbB-2的高表達(dá)被認(rèn)為與多種惡性腫瘤如胃癌、乳癌、結(jié)直腸癌等的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[8]。有學(xué)者[9]認(rèn)為C-erbB-2與erbB受體相互作用，參與配體調(diào)節(jié)EGF家族并促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展。在人類腫瘤中，C-erbB-2的分子改變使激酶極度活躍，從而賦予癌細(xì)胞異常的、配體獨(dú)立的、失控的生長(zhǎng)動(dòng)力。該研究結(jié)果顯示，宮頸腺癌分化越差，F(xiàn)IGO分期越高或出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，C-erbB-2的高表達(dá)率越高，與上述研究相符，提示C-erbB-2的高表達(dá)與宮頸腺癌的發(fā)展有關(guān)。

E-cadherin是位于染色體16q22的鈣黏蛋白基因編碼的鈣依賴性跨膜糖蛋白。 E-cadherin的C末端必須與α、β、γ-catenin結(jié)合形成復(fù)合物，才能與肌動(dòng)蛋白、細(xì)胞骨架相連，并形成偽足，使E-cadherin穩(wěn)定地錨于細(xì)胞膜上，發(fā)揮細(xì)胞黏附功能[10]。E-cadherin參與鈣離子依賴性的細(xì)胞間黏附能力的調(diào)節(jié)，對(duì)于維持正常組織結(jié)構(gòu)的完整性及極性、抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲起關(guān)鍵作用。E-cadherin在正常宮頸組織中100%表達(dá)[11]，E-cadherin表達(dá)失調(diào)或缺失時(shí)，腫瘤細(xì)胞間的相互黏附力下降，彼此松動(dòng)、分離，從原發(fā)灶脫落而發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移[12]。有學(xué)者[13]對(duì)宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中E-cadherin的表達(dá)情況進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)E-cadherin表達(dá)缺失是宮頸鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生的重要分子事件。 此外，E-cadherin在胃癌、前列腺癌等腫瘤中均表現(xiàn)為表達(dá)下調(diào)[14-15]。該研究結(jié)果顯示，宮頸腺癌分化越差，F(xiàn)IGO分期越高或出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，E-cadherin的低表達(dá)率越高，與上述研究相符，提示E-cadherin的低表達(dá)與宮頸腺癌的發(fā)展有關(guān)。

Cheng等[16]的研究顯示，在人類卵巢癌細(xì)胞中，C-erbB-2在EGF誘導(dǎo)的E-cadherin下調(diào)中發(fā)揮潛在作用并增加腫瘤細(xì)胞的侵襲能力，EGF誘導(dǎo)EGFR和C-erbB-2相互作用，并活化C-erbB-2的表達(dá)。該研究結(jié)果顯示，宮頸腺癌組織中C-erbB-2與E-cadherin蛋白的表達(dá)呈負(fù)關(guān)聯(lián)，與上述研究相符，提示二者共同參與了宮頸腺癌的發(fā)展。

綜上所述，C-erbB-2高表達(dá)和E-cadherin低表達(dá)與宮頸腺癌的發(fā)展有關(guān)。探索C-erbB-2與E-cadherin在宮頸腺癌中的表達(dá)及作用，對(duì)于尋找藥物治療的新靶點(diǎn)及預(yù)后評(píng)估具有重要意義。

[1]郭超楠,任力.子宮頸癌早期診斷的研究進(jìn)展[J].空軍醫(yī)學(xué)雜志,2011,27(4):222

[2]Fitzgibbons PL,Hicks DG.Progress in implementing HER2 testing guidelines[J].Arch Pathol Lab Med,2014,138(7):863

[3]Mehendiratta M,Solomon MC,Boaz K,et al.Clinico-pathological correlation of E-cadherin expression at the invasive tumor front of Indian oral squamous cell carcinomas:an immunohistochemical study[J].J Oral Maxillofac Pathol,2014,18(2):217

[4]Hirohashi S.Molecular aspects of adhesion-epigenetic mechanisms for inactivation of the E-Cadherin-mediated cell adhesion system in cancers[J].Verh Dtsch Ges Pathol,2000，84:28

[5]劉漢勇,王曉玫,單軍,等.E-cadherin和C-erbB2在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其臨床病理意義[J].中國(guó)誤診學(xué)雜志,2008,8(13):3025

[6]Khurshid R, Saleem M, Gul-e-Raana, et al. Phosphorylation sites of HER2/c-erbB-2: role in cell growth and in disease[J].Acta Biochim Pol, 2014,61(4):699

[7]周正平,劉世梅,肖慶邦.c-erbB-2、bcl-2蛋白在宮頸鱗癌細(xì)胞中的表達(dá)及其意義[J].遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2004,27(1):19

[8]Ellina MI,Bouris P,Aletras AJ,et al.EGFR and HER2 exert distinct roles on colon cancer cell functional properties and expression of matrix macromolecules[J].Biochim Biophys Acta,2014,1840(8):2651

[9]Docea AO, Mitrut P, Cernea D, et al.Immunohistochemical expression of EGF, c-erbB-2 and EGFR in intestinal variant of gastric adenocarcinomas[J].Rom J Morphol Embryol,2013,54(3):545

[10]Seo KJ, Kim M, Kim J. Prognostic implications of adhesion molecule expression in colorectal cancer[J].Int J Clin Exp Pathol, 2015,8(4):4148

[11]周行,奉澤錦,韓亮,等. E-鈣黏素和骨橋蛋白在子宮頸癌患者中的表達(dá)及意義[J].中國(guó)婦產(chǎn)科臨床雜志,2013,14(4):357

[12]鄭宇,杜彬,鐘雪云.賁門癌中c-erbB-2、MTA1及E-cadherin的表達(dá)[J].腫瘤防治研究,2006,33(1):17

[13]Huang X, Qian Y, Wu H, et al. Aberrant expression of osteopontin and E-cadherin indicates radiation resistance and poor prognosis for patients with cervical carcinoma[J].J Histochem Cytochem,2015,63(2):88

[14]Park JW,Park DM,Choi BK,et al.Establishment and characterization of metastatic gastric cancer cell lines from murine gastric adenocarcinoma lacking Smad4,p53,and E-cadherin[J].Mol Carcinog,2014,Oct 12[Epub ahead of print]

[15]Liu Y,Chen XG,Liang CZ.Expressions of E-cadherin and N-cadherin in prostate cancer and their implications[J].Zhonghua Nan Ke Xue,2014,20(9):781

[16]Cheng JC,Qiu X,Chang HM,et al.HER2 mediates epidermal growth factor-induced down-regulation of E-cadherin in human ovarian cancer cells[J].Biochem Biophys Res Commun,2013,434(1):81

Expressions of C-erbB-2 and E-cadherin in cervical adenocarcinoma tissue

CAOJing1),LVZhipai1),DANGQiuhong1),HAOZhiwei1),LIDaoming2)

1)DepartmentofPathology,theThirdAffiliatedHospital，ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052 2)DepartmentofPathology,theFirstAffiliatedHospital，ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052

C-erbB-2；E-cadherin；cervical adenocarcinoma

Aim: To explore the expressions and clinicopathology significance of E-cadherin and C-erbB-2 in cervical adenocarcinoma tissue. Methods: The expressions of E-cadherin and C-erbB-2 protein in 72 cases diagnosed as cervical adenocarcinoma were detected by immunohistochemical method, and their relations with clinicopathological parameters were analyzed. Results: Out of 72 cervical adenocarcinoma samples, the high level expression of C-erbB-2 was found in 31 cases(43.1%), while the low level expression of E-cadherin was found in 34 cases(47.2%). C-erbB-2 overexpression and E-cadherin reduced expression were related with differentiation degree, FIGO staging and lymph node metastasis of cervical adenocarcinoma(P<0.05). There was negative association between C-erbB-2 and E-cadherin protein expressions in cervical adenocarcinoma tissue(rP=0.600，P<0.001).Conclusion: C-erbB-2 overexpression and E-cadherin reduced expression may play important roles in the development of cervical adenocarcinoma, and could be used for judging its biological behavior.

10.13705/j.issn.1671-6825.2015.04.014

*河南省基礎(chǔ)與前沿技術(shù)項(xiàng)目 112300410155

R737.33