劉華高占梅劉泊宋揚(yáng)盧滿存

·研究報(bào)告·

分泌性中耳炎患兒腺樣體組織中IL-5的表達(dá)

劉華1高占梅1劉泊2宋揚(yáng)1盧滿存1

目的 探討白細(xì)胞介素-5（interleukin-5，IL-5）在分泌性中耳炎（otitis media with effusion，OME）發(fā)生發(fā)展過程中的可能作用。方法 選擇2011年3月～2012年3月確診的腺樣體肥大患兒48例，其中腺樣體肥大伴OME 26例（腺樣體肥大伴OME組），單純腺樣體肥大22例（單純腺樣體肥大組）；另選取單純分泌性中耳炎患兒（單純OME組）及健康兒童正常組各26例作為對照組，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測所有兒童血清及腺樣體肥大患兒腺樣體組織中IL-5的表達(dá)水平。結(jié)果 腺樣體肥大伴分泌性中耳炎組患兒腺樣體組織中IL-5濃度（11.84±4.74 pg／ml）顯著高于單純腺樣體肥大組（8.65±3.67 pg／ml）；單純腺樣體肥大組和分泌性中耳炎伴腺樣體肥大組患兒血清中IL-5含量分別為3.68±0.88 pg／ml和4.32±1.47 pg／ml，均顯著低于同組腺樣體組織中IL-5含量（P＜0.01）；四組兒童間血清中IL-5含量無顯著差異。結(jié)論 IL-5在伴分泌性中耳炎的腺樣體肥大患兒的腺樣體組織中高表達(dá)，提示其可能在分泌性中耳炎的慢性病程中發(fā)揮重要作用。

分泌性中耳炎； 腺樣體； 變態(tài)反應(yīng)； 白細(xì)胞介素-5

分泌性中耳炎（otitis media with effusion，OME）的發(fā)病機(jī)制與免疫功能紊亂有關(guān)，從免疫調(diào)節(jié)角度探索OME發(fā)病機(jī)制為OME研究的重要內(nèi)容之一。白細(xì)胞介素5（interleukin-5，IL-5）是重要的免疫調(diào)節(jié)因子，具有嗜酸性粒細(xì)胞的增殖、分化、趨化和活化作用。研究證實(shí)［1］OME患者中耳局部IL-5表達(dá)明顯上調(diào)，觸發(fā)嗜酸性粒細(xì)胞陽離子蛋白（eosinophil cationic protein，ECP）和主要堿性蛋白（major basic protein，MBP）等細(xì)胞活性物質(zhì)大量釋放，是OME患者中耳炎癥遷延不愈的機(jī)制之一。腺樣體為咽淋巴環(huán)的一部分，能產(chǎn)生多種免疫細(xì)胞分泌細(xì)胞因子及轉(zhuǎn)錄因子參與OME的發(fā)病，在局部免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用。本研究通過檢測伴或不伴OME的腺樣體肥大患兒血清及腺樣體組織中IL-5的表達(dá)，探討IL-5在OME發(fā)生發(fā)展過程中的作用機(jī)制，為進(jìn)一步闡明OME的免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制提供參考。

1 資料與方法

1.1 研究對象及分組 選擇2011年3月～2012年3月河北唐山市工人醫(yī)院耳鼻咽喉科確診的腺樣體肥大患兒48例，其中單純腺樣體肥大患兒22例（單純腺樣體肥大組），男10例，女12例，年齡3～11歲，平均5.67±4.65歲；伴分泌性中耳炎的腺樣體肥大患兒26例（腺樣體肥大伴OME組），男14例，女12例，年齡3.5～12歲，平均6.59±3.74歲；另選取單純分泌性中耳炎患兒26例，其中男10例，女16例，年齡3～13歲，平均6.75±3.8歲；健康兒童（正常組）26例，男10例，女12例，年齡3～12歲，平均6.26±4.15歲，以上各組兒童年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。所有腺樣體肥大患兒均經(jīng)鼻咽側(cè)位片證實(shí)［A／N比值（腺樣體／鼻咽腔比值）＞0.6］，并通過鼻內(nèi)鏡檢查排除腺樣體機(jī)械性阻塞咽鼓管咽口的因素，均無鼻炎及鼻竇炎。OME患兒經(jīng)純音聽閾檢測多為低頻傳導(dǎo)性聽力損失，部分為混合性聽力下降；聲導(dǎo)抗檢測示鼓室導(dǎo)抗圖呈B型（40例）或C型（12例），聲反射消失。所有對象均排除變應(yīng)性鼻炎、支氣管哮喘、蕁麻疹、濕疹等過敏性疾病史；行血清變應(yīng)原檢測，排除變應(yīng)體質(zhì)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾；近2周內(nèi)無激素類藥物使用史。

1.2 IL-5檢測方法

1.2.1 標(biāo)本收集 腺樣體肥大伴OME組及單純腺樣體肥大組患兒均在行腺樣體切除時(shí)常規(guī)留取腺樣體組織，勻漿后留待行雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。所有受試兒童均留取肘靜脈血2 ml，置含EDTA抗凝劑的采血管中，2 000 r／min離心10分鐘，留取血清標(biāo)本，置于-80℃保存待檢。

1.2.2 ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定 按照人IL-5ELISA試劑盒（購自RD公司）提供的檢測方法，取2 000 ng／L的標(biāo)準(zhǔn)品，根據(jù)需要依次稀釋為1 000、

500、250、125、62.5、31.25、0 ng／L，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.3 IL-5檢測 將不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品及激活后的標(biāo)本分別加入平衡至室溫的抗體包被條孔中，用封板膠紙封住反應(yīng)孔，孵育90分鐘，洗板4次，除空白孔外，加入生物素化抗體工作液。封板膠紙封住反應(yīng)孔，孵育60分鐘，洗板4次，除空白孔外，加入酶結(jié)合物工作液。再次用封板膠紙封住反應(yīng)孔，孵育30分鐘，洗板4次，加入顯色劑，避光孵育10分鐘，加入終止液，混勻后即刻檢測A450值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，各項(xiàng)數(shù)據(jù)計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組數(shù)據(jù)間比較采用單因素方差分析，兩組數(shù)據(jù)間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或配對樣本t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

四組兒童血清及腺樣體肥大患兒組織中IL-5的檢出率均為100%，IL-5含量見表1，可見，四組兒童間血清中IL-5的含量無顯著差異（F＝2.205，P＝0.92）。分泌性中耳炎伴腺樣體肥大患兒腺樣體組織中IL-5的含量高于單純腺樣體肥大組患兒腺樣體組織中IL-5的含量（t＝2.701，P＜0.01），這兩組患兒腺樣體組織中IL-5的含量均顯著高于同組患兒血清中IL-5的含量（t1＝-10.263，P＜0.05；t2＝-6.915，P＜0.05）。

表1 四組兒童血清及腺樣體組織中IL-5的含量（pg／ml，±s）

表1 四組兒童血清及腺樣體組織中IL-5的含量（pg／ml，±s）

注：△與單純腺樣體肥大組比較，P＜0.05；*與同組血清中IL-5含量比較，P＜0.05

?

3 討論

近年來，有關(guān)變態(tài)反應(yīng)與分泌性中耳炎相關(guān)性研究日趨增多。已有研究［2，3］證實(shí)中耳的黏膜系統(tǒng)存在與其他呼吸道黏膜相似的免疫應(yīng)答模式，在變應(yīng)原的作用下中耳局部微環(huán)境中多種細(xì)胞激活、細(xì)胞因子大量分泌，局部免疫穩(wěn)態(tài)失衡，將啟動機(jī)體免疫病理反應(yīng)，產(chǎn)生Th2免疫偏極化反應(yīng)，造成黏膜上皮損傷，粘液分泌增加，中耳氣體調(diào)節(jié)能力及粘液清除能力下降，最終導(dǎo)致中耳滲液持久不愈。因此，分泌性中耳炎可能是一種Th2優(yōu)勢的變應(yīng)性疾病。

IL-5又稱嗜酸性粒細(xì)胞分化因子，由CD4+T細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生，作為B細(xì)胞分化的晚期調(diào)節(jié)因子，IL-5對嗜酸性粒細(xì)胞和生物學(xué)活性具有極為重要的促進(jìn)作用，能夠?qū)κ人嵝粤＜?xì)胞前體細(xì)胞的增殖和分化進(jìn)行誘導(dǎo)，有效趨化和激活成熟的嗜酸性粒細(xì)胞，同時(shí)還能夠使嗜酸性粒細(xì)胞的存活時(shí)間極大程度地延長，抑制其凋亡。IL-5還能夠上調(diào)粘附分子的表達(dá)水平，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞發(fā)生粘附反應(yīng)。有研究發(fā)現(xiàn)IL-5作為Th2反應(yīng)的重要效應(yīng)因子參與了過敏性鼻炎、哮喘等變態(tài)反應(yīng)性疾病的發(fā)生發(fā)展［4～6］。

本研究顯示，兩組腺樣體肥大患兒腺樣體組織中IL-5的含量均顯著高于同組患兒血清中含量，提示腺樣體組織局部高表達(dá)IL-5，推測由于IL-5水平升高，促使腺樣體局部嗜酸性粒細(xì)胞的分化、增殖及趨化，進(jìn)而使ECP等炎性介質(zhì)增加，導(dǎo)致毛細(xì)血管滲漏，腺體分泌亢進(jìn)，產(chǎn)生上呼吸道變應(yīng)性炎癥，同時(shí)活化的嗜酸性粒細(xì)胞又能分泌IL-5，如此反復(fù)循環(huán)，使變應(yīng)性炎癥遷延不愈。而伴有分泌性中耳炎的腺樣體肥大患兒腺樣體組織液中IL-5的含量較單純腺樣體肥大患兒進(jìn)一步增高，提示腺樣體局部遷延不愈的變應(yīng)性炎癥加劇可累及中耳粘膜，引起中耳局部的變應(yīng)性炎癥，產(chǎn)生中耳滲液。涂澄宇等［7］研究發(fā)現(xiàn)IL-5在分泌性中耳炎患者中耳積液中高表達(dá)，提示中耳局部亦可能產(chǎn)生局限性的變應(yīng)性炎性反應(yīng)。

伴分泌性中耳炎的腺樣體肥大患兒的腺樣體組織中IL-5高表達(dá)，提示IL-5可能作為重要的免疫介質(zhì)參與了OME的發(fā)生發(fā)展，免疫調(diào)節(jié)是由免疫細(xì)胞及細(xì)胞因子組成的免疫網(wǎng)絡(luò)來實(shí)現(xiàn)的，改善該細(xì)胞因子的水平能否作為一種預(yù)防和治療OME的新思路，有待進(jìn)一步探討。

1 Tewfik TL，Mazer B.The links between allergy and otitis media with effusion［J］.Curr Opin Otolaryngol Head Neck Surg，2006，14：187.

2 劉華，趙守琴，佟靜，等.大鼠分泌性中耳炎中耳Th2／Th1細(xì)胞失衡模式的研究［J］.中華臨床醫(yī)師雜志（電子版），2011，5：7282.

3 Zhao SQ，Li J，Liu H，et al.Role of interleukin-10 and transforming growth factor beta 1 in otitis media with effusion［J］.Chin Med J（Engl），2009，122：2149.

4 Nonaka M，F(xiàn)ukumoto A，Ozu C，et al.IL-5 and eotaxin levels in middle ear effusion and blood from asthmatics with otitis media with effusion［J］.Acta Otolaryngol，2003，123：383.

5 邵莉，郭胤仕，朱麗君，等.支氣管哮喘患者血清嗜酸粒細(xì)胞陽離子蛋白和IL-5測定的意義［J］.診斷學(xué)理論與實(shí)踐，2006，5：354.

6 冷弘，馬超美，胡軍.IL-9和IL-5在支氣管哮喘中的表達(dá)及意義［J］.河南科技大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2009，27：4.

7 涂澄宇，何德金，彭佳，等.IL-5在分泌性中耳炎及中耳積液患者中的作用機(jī)制探討［J］.臨床合理用藥雜志，2013，6：128.

（2015-02-11收稿）

（本文編輯 李翠娥）

10.3969／j.issn.1006-7299.2015.04.022

時(shí)間：2015-6-17 9：54

R764.21

A

1006-7299（2015）04-0417-02

1 河北醫(yī)科大附屬唐山市工人醫(yī)院耳鼻咽喉科（唐山 063000）；

2 河北聯(lián)合大學(xué)附屬開灤總醫(yī)院耳鼻咽喉科

劉華（Email：fhlshan@163.com）

網(wǎng)絡(luò)出版地址：http：／／www.cnki.net／kcms／detail／42.1391.R.20150617.0954.005.html