蔡志軍， 韋 群， 周鷹豪， 陳 瑜

(1.廣東醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科， 廣東 湛江 524000 2.廣東省湛江市湛工安度斯生物有限公司， 廣東 湛江 524003)

血漿內(nèi)毒素檢測(cè)在快速診斷革蘭陰性菌引起全身性感染的應(yīng)用

蔡志軍1， 韋 群2， 周鷹豪1， 陳 瑜2

(1.廣東醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科， 廣東 湛江 524000 2.廣東省湛江市湛工安度斯生物有限公司， 廣東 湛江 524003)

目的:探討血漿內(nèi)毒素檢測(cè)與傳統(tǒng)血培養(yǎng)之間的關(guān)系，方法:應(yīng)用LKM－02－32動(dòng)態(tài)試管檢測(cè)儀檢測(cè)血漿中內(nèi)毒素的含量，并與血培養(yǎng)結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果:337例患者中內(nèi)毒素檢測(cè)陽(yáng)性35例，占10.39%，內(nèi)毒素檢測(cè)陰性302例，占89.61%;內(nèi)毒素檢測(cè)陽(yáng)性組血培養(yǎng)出革蘭陰性菌19例，占54.29%，內(nèi)毒素檢測(cè)陰性組血培養(yǎng)出革蘭陰性菌2例，占0.66%。內(nèi)毒素檢測(cè)陽(yáng)性組血培養(yǎng)出革蘭陰性菌顯著高于內(nèi)毒素檢測(cè)陰性組，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，在內(nèi)毒素檢測(cè)陽(yáng)性的35例患者中，19例血培養(yǎng)陽(yáng)性的內(nèi)毒素含量也顯著高于16例血培養(yǎng)陰性的內(nèi)毒素含量(P＞0.05)。以血培養(yǎng)為標(biāo)準(zhǔn)，內(nèi)毒素檢測(cè)的敏感度為90.48%，特異度為94.94%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為54.29%，陰性預(yù)測(cè)值為99.34%，結(jié)論:內(nèi)毒素檢測(cè)較傳統(tǒng)的血培養(yǎng)法快速，陽(yáng)性率高，可用于全身性感染的早期輔助診斷。

內(nèi)毒素; 革蘭陰性菌; 感 染

全身性感染主要見(jiàn)于敗血癥，革蘭陰性菌感染尤常并發(fā)內(nèi)毒素血癥，常見(jiàn)的致病菌如大腸埃希氏菌、克雷伯氏菌、腸桿菌屬、銅綠假單胞菌、變形桿菌等等，多通過(guò)泌尿道、腸道、膽道和呼吸道引起感染，亦可通過(guò)外傷、手術(shù)、導(dǎo)管以及器械操作等途徑而進(jìn)入血液，并大量繁殖引起敗血癥，從而造成內(nèi)毒素血癥［1］。通過(guò)血漿內(nèi)毒素的快速檢測(cè)，以判斷由革蘭陰性菌引起的全身性感染是近年來(lái)對(duì)感染性疾病病原學(xué)檢查的一種新的輔助診斷方法，本文就血漿內(nèi)毒素檢測(cè)對(duì)革蘭陰性菌引起的全身性感染的快速診斷進(jìn)行探討，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象:收集樣本標(biāo)準(zhǔn):根據(jù)廣東省2008年7月頒布的血培養(yǎng)指導(dǎo)原則以及《嚴(yán)重感染與感染性休克國(guó)際診治指南(2008)》診斷要求［2］:有以下體征之一均采血做血培養(yǎng)(需氧+厭氧)，同時(shí)抽取2mL靜脈置于肝素鋰抗凝管中進(jìn)行血漿內(nèi)毒素檢測(cè)，①體溫＞38℃或＜36℃;②心率＞90次/min;③呼吸頻率＞20次/ min或PCO2＜32mmHg;白細(xì)胞數(shù)＞12×109L－1或＜4× 109L－1。從2013年10月至2014年7月收集到符合上述條件的樣本337份，年齡21d至89歲，男192例，女145例，患者主要來(lái)自兒科、ICU、呼吸內(nèi)科、腎內(nèi)科、血液內(nèi)科及感染科。

1.2 方 法

1.2.1 儀器與試劑:血培養(yǎng)及細(xì)菌鑒定:血培養(yǎng)儀: BACTEC－9120;全自動(dòng)細(xì)菌分析儀:PhoenixTM－100，以及配套試劑均來(lái)自美國(guó)BD公司產(chǎn)品，每批次產(chǎn)品均嚴(yán)格按照常規(guī)做室內(nèi)質(zhì)控，質(zhì)控菌株采用大腸埃希氏菌ATCC25922以及金黃色葡萄球菌ATCC25923。血漿內(nèi)毒素檢測(cè):動(dòng)態(tài)試管檢測(cè)儀LKM－02－32、TAL－80試管恒溫儀及內(nèi)毒素檢測(cè)試劑盒、質(zhì)控品均由廣東湛江安度斯生物有限公司提供。

1.2.2 血漿內(nèi)毒素檢測(cè):①采集好的抗凝血進(jìn)行2000r/min離心10min，取上層富含血小板的血漿0.1mL加入裝有0.9mL樣品處理液中，混勻后75℃保溫10min取出后放置冷凍槽5min，為待測(cè)血漿樣品;②取0.25mL試劑復(fù)溶液加入反應(yīng)試劑中，輕輕搖勻靜置2min得試劑溶液;③取反應(yīng)管，每樣本平行2管分別加入0.1mL處理后的待測(cè)血漿樣品及50μg試劑溶液，混勻后插入 LKM－02－32動(dòng)態(tài)試管檢測(cè)儀中，75min反應(yīng)結(jié)束后自動(dòng)計(jì)算血漿中內(nèi)毒素的含量。大于0.109EU/mL為陽(yáng)性。

1.2.3 血培養(yǎng)陽(yáng)性樣本轉(zhuǎn)種血平板后使用PhoenixTM－100全自動(dòng)細(xì)菌分析儀進(jìn)行鑒定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:應(yīng)用SPSS17.0軟件統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料組間比較采用t檢驗(yàn)，以±s表示;計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P＞0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 內(nèi)毒素檢測(cè)與血培養(yǎng)結(jié)果:337例患者中內(nèi)毒素陽(yáng)性35例，占10.39%，內(nèi)毒素含量:0.272±0.246EU/mL，內(nèi)毒素陽(yáng)性組血培養(yǎng)出革蘭陰性菌19例，占54.09%，內(nèi)毒素陰性組302例，占89.61%，內(nèi)毒素正常組血培養(yǎng)出革蘭陰性菌2例，占0.66%;血培養(yǎng)陽(yáng)性21例組，內(nèi)毒素含量:0.298±0.314EU/mL，血培養(yǎng)陰性316例組，內(nèi)毒素含量:0.04±0.045EU/mL，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);在內(nèi)毒素陽(yáng)性35例中，19例血培養(yǎng)出革蘭陰性菌的內(nèi)毒素平均含量為 0.325EU/mL，16例血培養(yǎng)陰性的內(nèi)毒素平均含量為:0.208EU/mL，兩者比較P＞0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 內(nèi)毒素檢測(cè)的敏感度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值。以培養(yǎng)出革蘭陰性菌為標(biāo)準(zhǔn)，內(nèi)毒素檢測(cè)的敏感度為90.48%，特異度為94.94%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為54.29%，陰性預(yù)測(cè)值為99.34%，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 內(nèi)毒素檢測(cè)和血培養(yǎng)陽(yáng)性生結(jié)果比較

3 討 論

內(nèi)毒素的主要成分為脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)，是革蘭陰性菌細(xì)胞壁的主要成分，LPS是炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵遞質(zhì)，其化學(xué)成分主要是由O－特異性鏈、核心多糖、類(lèi)脂A三部分組成［3］，LPS一般在細(xì)菌死后細(xì)胞壁崩解時(shí)釋出，活菌亦可以發(fā)皰形式將內(nèi)毒素釋出。革蘭陰性菌感染是院內(nèi)感染的主要致病菌，尤其是其所致的敗血癥更為嚴(yán)重。董玉梅［4］、馮穎［5］、邵敏偉［6］等分別在血培養(yǎng)陽(yáng)性病原體分析中，革蘭陰性菌分別占:59.95%、52.3%、65.2%，本院2013年度統(tǒng)計(jì)158份血培養(yǎng)陽(yáng)性標(biāo)本中，革蘭陰性菌占61.4%，基本一致。因此，及時(shí)判斷革蘭陰性菌引起的全身性感染對(duì)治療及預(yù)后起到重要作用。

細(xì)菌培養(yǎng)是循征感染醫(yī)學(xué)中細(xì)菌性感染性疾病病原學(xué)檢查的“金標(biāo)準(zhǔn)”。細(xì)菌培養(yǎng)在臨床疾病診斷及使用抗生素治療的過(guò)程中具有重要的意義，具有一定的不可替代性，由于細(xì)菌種類(lèi)繁多，進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)不同的菌種所需要的條件(營(yíng)養(yǎng)、溫度、酸堿度、氣體等)各異，這就難以確保在普通培養(yǎng)時(shí)對(duì)菌種培養(yǎng)鑒定的全面性，還有受臨床用藥、標(biāo)本采集等因素影響了培養(yǎng)的準(zhǔn)確性，同時(shí)培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)也可能延誤臨床診斷病情，間接導(dǎo)致病人的病情加重，出現(xiàn)不良后果。

內(nèi)毒素檢測(cè)的方法有凝膠法、濁度法、比色法、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法、流式細(xì)胞術(shù)、化學(xué)化光測(cè)定法等。我們現(xiàn)在使用由湛江安度斯生物有限公司提供的配套儀器及試劑，根據(jù)內(nèi)毒素與鱟試劑的C因子發(fā)生反應(yīng)，由內(nèi)毒素引發(fā)激活的凝固酶，切斷凝固蛋白原中的精氨酸肽鏈，形成凝固蛋白從而產(chǎn)生凝膠過(guò)程中的濁度變化，是用濁度儀定量的方法，本方法廣泛應(yīng)用于藥物檢測(cè)及臨床。在本次研究中，血培養(yǎng)出革蘭陰性菌組內(nèi)毒素含量明顯高于血培養(yǎng)陰性組(P＞0.05)，說(shuō)明內(nèi)毒素測(cè)定與由革蘭陰性菌引起的全身性感染有良好的相關(guān)性，血漿內(nèi)毒素檢測(cè)的陽(yáng)性率高于血培養(yǎng)法且檢測(cè)時(shí)間僅僅為75min，其敏感度及特異度均達(dá)90%以上;在35例內(nèi)毒素陽(yáng)性標(biāo)本中僅有19例血培養(yǎng)出陰性菌，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為54.29%，這與部分患者患肝臟疾病、胰腺疾病、潰瘍性結(jié)腸炎并發(fā)內(nèi)毒素血癥有一定關(guān)系。其次假陽(yáng)性還可由于患者治療過(guò)程中使了脂肪乳、白蛋白、香茹多糖類(lèi)、黃芪注射液、雙黃連注射液等藥物;各種相關(guān)的反應(yīng)條件、操作環(huán)境、標(biāo)準(zhǔn)品等等也可干擾試驗(yàn)的準(zhǔn)確性。因些，在實(shí)際檢測(cè)過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，盡力排除各種干擾因素，使試驗(yàn)結(jié)果更加準(zhǔn)確、真實(shí)可信。在21例血培養(yǎng)出革蘭陰性菌的患者中有2例血漿內(nèi)毒素檢測(cè)陰性，假陰性結(jié)果與感染早期未經(jīng)抗生素治療，內(nèi)毒素尚未釋出有關(guān)。我們本次研究的陰性預(yù)測(cè)值達(dá)99.34%。

［1］馬金玲，劉揚(yáng)，李偉保，李忠信.內(nèi)毒素檢測(cè)與臨床應(yīng)用現(xiàn)狀［J］.國(guó)外醫(yī)學(xué)臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè)，2003，24 (2):64～65.

［2］Dellinger R P，Levy M M，Carlet J M，et al.Surviving Sepsis Campaign:International guidelines for management of severe sepsis and septic shock:2008［J］.Intensive Care Med，2008，34(1):17～60.

［3］焦炳華，余慶.內(nèi)毒素的結(jié)構(gòu)及其功能的關(guān)系［J］.國(guó)外醫(yī)學(xué)生分子生物學(xué)分冊(cè)，1987，9(4):168～170.

［4］董玉梅，靳桂明，劉海冰，等.從菌血癥病原體分析觀察醫(yī)院感染動(dòng)向［J］.華南國(guó)防醫(yī)學(xué)雜志，2002，16(2):55～56.

［5］馮穎，黃晶，姚興偉，等.3500份血培養(yǎng)陽(yáng)性結(jié)果分析和病原菌分布［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2009，13(10):1426～1247.

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10.3969/j.issn.1006－6233.2015.04.059

1006－6233(2015)04－0690－02