彭曉暉，梁培育，歐善際，祖雄兵

（1.海南醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院泌尿外科，?？?70102；2.中南大學(xué)湘雅醫(yī)院泌尿外科，長沙410008）

膀胱癌是我國泌尿外科最常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率及病死率在泌尿系統(tǒng)腫瘤中居首位［1］。膀胱癌的主要診斷方法為膀胱鏡檢查和尿細(xì)胞學(xué)檢查。其中膀胱鏡檢查是有創(chuàng)檢查，患者不易接受。而尿細(xì)胞學(xué)檢查的特異度較高，但靈敏度略低。熒光膀胱鏡檢查可以發(fā)現(xiàn)普通膀胱鏡不易發(fā)現(xiàn)的小腫瘤及原位癌，熒光膀胱鏡的缺點(diǎn)是其診斷膀胱癌的特異度不高，膀胱炎癥、膀胱癌電切術(shù)和膀胱灌注治療均會導(dǎo)致假陽性結(jié)果的發(fā)生［2］。而趨化因子配體10（CXCL10）及趨化因子受體3（CXCR3）可能會成為膀胱癌檢查及治療的靶目標(biāo)之一。CXCL10與CXCR3結(jié)合產(chǎn)生相應(yīng)的效應(yīng)，通過激活免疫系統(tǒng)或抑制腫瘤血管的形成抑制腫瘤生長；通過促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖，分泌產(chǎn)生蛋白水解酶，誘導(dǎo)血管生成從而促進(jìn)腫瘤發(fā)展與轉(zhuǎn)移。本文通過對檢測膀胱癌患者血中CXCL10和外周血單一核細(xì)胞中CXCR3的表達(dá)，探討CXCL10/CXCR3反應(yīng)軸與膀胱癌發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移的關(guān)系及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年6月至2013年6月于海南醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院泌尿外科收治的80例首次診斷原發(fā)性膀胱癌住院患者為試驗(yàn)組。試驗(yàn)組患者入選4周內(nèi)未使用過任何藥物，未接受化學(xué)治療和放射治療，肝、腎功能正常。排除并發(fā)感染性疾病、系統(tǒng)性慢性疾病、肝腎功能不全患者，以及近1個月使用過糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑等藥物的患者。試驗(yàn)組中男50例，女30例；年齡35～75歲，平均（51.20±8.78）歲；中高分化46例，低分化34例；Ta期22例，T1期14例，T2期15例，T3＋4期29例；腫瘤直徑小于2cm者45例，≥2cm者35例；其中有19例發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。取33例健康體檢者為對照組，男20例，女13例；平均年齡（49.52±9.15）歲。對照組均無既往病史，無使用糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑等藥物的記錄。試驗(yàn)組及對照組間年齡及性別構(gòu)成差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 標(biāo)本收集 膀胱癌患者確診后未給予任何治療，于次日凌晨空腹抽取肘靜脈血5mL，即刻進(jìn)行高速離心，吸取上清液，于－70℃低溫冰箱冷凍保存；采用相同方法收集對照組血清。

1.3 主要試驗(yàn)方法 ELISA法檢測血清中CXCL10的水平，CXCL10鼠抗人單克隆抗體ELISA檢測試劑盒，購自R＆D公司。詳細(xì)方法參照試劑盒及實(shí)驗(yàn)設(shè)備說明書進(jìn)行。逆轉(zhuǎn)錄－聚合酶鏈反應(yīng)（RT－PCR）測定外周血單一核細(xì)胞中CXCR3mRNA的表達(dá)量：外周血用乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝，采用等體積Hanks液稀釋，梯度離心，分離出外周血單一核細(xì)胞。采用RNA試劑盒（上海生工生物工程有限公司）嚴(yán)格按照說明書提取總RNA。RT－PCR采用一步法 RT－PCR試劑盒（Bio Basic公司提供）。引物序列：CXCR3上游引物為5′－CCA ACC ACA AGT GCC AAA GG－3′，下游引物為5′－CCA TAA TCG TAG GGA GAT GTG－3′，擴(kuò)增片段172bp，內(nèi)參β－actin引物序列：上游引物5′－GTG GAC ATC CGC AAA GAC－3′，下游引物5′－AAA GGG TGT AAC GCA ATC AA－3′，擴(kuò)增片段為305bp?；蛞镉缮虾Ｉど锕こ碳夹g(shù)有限公司合成。PCR反應(yīng)步驟、反應(yīng)體系等參照文獻(xiàn)進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理，計量數(shù)據(jù)以±s表示，采用t檢驗(yàn)，方差不齊則用t′檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組中CXCL10的表達(dá)及對比研究 CXCL10在試驗(yàn)組及對照組中的表達(dá)水平分別是（872.46±121.22）pg/L和（481.95±105.97）pg/L，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t＝13.75，P＜0.01）。

2.2 兩組中CXCR3的表達(dá)及對比研究 以β－action mRNA為內(nèi)參計算CXCR3mRNA的相對表達(dá)量，試驗(yàn)組及對照組外周血單一核細(xì)胞中CXCR3mRNA的拷貝數(shù)量分別為0.236±0.098、0.098±0.046，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t＝7.187，P＜0.01）。

2.3 試驗(yàn)組CXCL10與CXCR3的表達(dá)和膀胱癌臨床各病理特征的關(guān)系 膀胱癌患者血清CXCL10及CXCR3mRNA的表達(dá)與年齡、病理分期、分化程度、腫瘤大小等均不存在相關(guān)性（P＞0.05），其中，CXCL10及CXCR3mRNA的表達(dá)雖然與病理分期無明顯相關(guān)性，但檢測數(shù)據(jù)顯示，隨著病理分期的加重，CXCL10及CXCR3mRNA的表達(dá)有逐漸升高的趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；膀胱癌患者血清CXCL10及CXCR3mRNA的表達(dá)均與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（P＜0.05），見表1。

表1 膀胱癌中CXCL10與CXCR3的表達(dá)和臨床各病理特征的關(guān)系（±s）

表1 膀胱癌中CXCL10與CXCR3的表達(dá)和臨床各病理特征的關(guān)系（±s）

P1：CXCL10統(tǒng)計學(xué)處理P值；P2：CXCR3統(tǒng)計學(xué)處理P值。

臨床病理特征 n CXCL10（pg/L） P1 CXCR3mRNA P2年齡＜50 28 854.52±119.51 0.522 0.257±0.098 0.744≥50 52 891.49±129.45 0.245±0.109病理分期Ta 22 836.46±101.52 0.258 0.237±0.090 0.341 T1 14 855.37±114.43 0.245±0.096 T2 15 892.21±105.65 0.261±0.109 T3＋4 29 901.67±101.17 0.264±0.086分化程度中高分化 46 833.66±114.85 0.236 0.242±0.102 0.604低分化 34 889.53±125.47 0.261±0.107腫瘤大?。?cm 45 865.14±120.05 0.702 0.231±0.100 0.240≥2cm 35 880.57±122.35 0.272±0.108淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有19 956.31±134.28 0.004 0.285±0.115 0.000無61 858.56±120.75 0.202±0.102

3 討 論

趨化因子是一類擁有誘導(dǎo)屬性的促炎細(xì)胞因子，其受體是一組G耦聯(lián)蛋白。根據(jù)其末端半胱氨酸序列的位置可分為4大類：C、CC、CXC和CXXXC。趨化因子作用廣泛，在感染性疾病、炎癥性疾病、自身免疫系統(tǒng)疾病、腫瘤、變態(tài)反應(yīng)、移植排斥、新生血管形成、AIDS及淋巴細(xì)胞歸巢等眾多疾病過程及生理過程中均有趨化因子的參與［3］。趨化因子與靶細(xì)胞表面特異性受體相結(jié)合才能發(fā)揮其眾多的病理生理效應(yīng)［4］。在參與腫瘤的生物學(xué)效應(yīng)中，一方面，趨化因子通過激活免疫活性細(xì)胞或抑制血管形成來抑制腫瘤的生長；而另一方面，趨化因子也可通過促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖，大量分泌蛋白水解酶，以及誘導(dǎo)血管生成從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)展和轉(zhuǎn)移［5］。CXC趨化因子亞家族是一組與腫瘤的發(fā)展及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的細(xì)胞因子。CXCR3及CXCL10在腫瘤發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用［6］。

本研究對80例膀胱癌患者及33例健康體檢者進(jìn)行了CXCL10及CXCR3的檢測，膀胱癌患者外周血清中CXCL10及外周血單一核細(xì)胞中CXCR3mRNA的表達(dá)量均顯著高于對照者，提示CXCL10及CXCR3在膀胱癌的發(fā)生過程中可能起到一定的作用。通過與臨床各參數(shù)之間的檢驗(yàn)分析得出CXCL10及CXCR3的表達(dá)與臨床因素如膀胱癌患者年齡、分化程度、腫瘤大小、病理分期等因素沒有明顯的相關(guān)性，但數(shù)據(jù)顯示，隨著臨床病理分期的加重，CXCL10及CXCR3的表達(dá)水平有升高的趨勢，提示CXCL10與CXCR3的表達(dá)與膀胱癌的發(fā)展可能存在相關(guān)性，這有待于大樣本臨床資料的驗(yàn)證。CXCL10及CXCR3的高表達(dá)與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)。Bedognetti等［7］研究顯示，惡性黑色素瘤中CXCR3的表達(dá)與黑色素瘤大小、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)。Hilborn等［8］研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌組織中CXCR3和CXCL10表達(dá)越高，轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)也越多。Chaturvedi等［9］指出，CXCR3與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)的機(jī)制可能是由于CXCR3高表達(dá)的惡性腫瘤細(xì)胞更容易遷徙至表達(dá)CXCR3配體的特異性靶器官。Kawada等［10］報道結(jié)腸癌中CXCR3的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在密切的關(guān)系，同時著重提示，在結(jié)腸癌常見的一些轉(zhuǎn)移部位如肺、肝、淋巴結(jié)中可檢測到CXCR3的配體CXCL10。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組CXCL10和CXCR3的表達(dá)明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，這表明CXCL10和CXCR3可能在膀胱癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程中起作用。因此推斷，對CXCL10/CXCR3與膀胱發(fā)病機(jī)制的深入研究有望為膀胱癌發(fā)病機(jī)制的研究及預(yù)后療效判斷等打下分子生物學(xué)理論基礎(chǔ)；利用分子生物學(xué)手段，阻斷CXCL10/CXCR3反應(yīng)軸，可能會成為膀胱癌治療的一個新靶點(diǎn)。本次實(shí)驗(yàn)因條件限制，未進(jìn)行阻斷CXCL10/CXCR3反應(yīng)軸對膀胱癌治療影響的相關(guān)研究，將在今后的研究中進(jìn)一步探索。

［1］彭曉暉，梁培育，歐善際，等.GRIM－19的表達(dá)與膀胱癌組織臨床特征的相關(guān)性研究［J］.海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2013，19（10）：1372－1374.

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