黃蓮芬，劉海英，謝永強(qiáng)，鐘華敏，周珍文

（廣州市婦女兒童醫(yī)療中心/廣州市兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東廣州 510120）

2011～2012年廣州地區(qū)兒童腹瀉病原菌分布及耐藥性分析＊

黃蓮芬，劉海英，謝永強(qiáng)，鐘華敏，周珍文

（廣州市婦女兒童醫(yī)療中心/廣州市兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東廣州 510120）

目的了解廣州地區(qū)兒童細(xì)菌性腹瀉主要病原菌分布及其耐藥性。方法對(duì)2011～2012年疑似細(xì)菌性腹瀉患兒大便標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，分析病原菌分布特征及耐藥性。結(jié)果2011～2012年共檢出兒童腹瀉病原菌416株，其中沙門(mén)菌屬、致病性大腸埃希菌、空腸彎曲菌、白色念珠菌分別占53.61%、37.98%、5.29%、1.68%。主要病原菌對(duì)抗菌藥物的耐藥率分別為氨芐西林85.25%、復(fù)方磺胺甲噁唑54.28%、頭孢噻肟44.70%、頭孢曲松42.53%、氯霉素40.66%、頭孢他啶23.55%、氨曲南23.36%、環(huán)丙沙星14.88%、頭孢吡肟8.07%、頭孢哌酮/舒巴坦7.99%、哌拉西林/他唑巴坦7.42%、亞胺培南0.00%。結(jié)論廣州地區(qū)兒童腹瀉病原菌以沙門(mén)菌屬、致病性大腸埃希菌、空腸彎曲菌為主；敏感性排名前5位的抗菌藥物為亞胺培南、哌拉西林/他唑巴坦、頭孢哌酮/舒巴坦、頭孢吡肟、環(huán)丙沙星。

腹瀉； 病原菌； 耐藥性； 兒童

腹瀉是由一組多病原、多因素引起的，以腹瀉、嘔吐為主要癥狀的胃腸道功能紊亂綜合征。在國(guó)內(nèi)，腹瀉是小兒常見(jiàn)病，發(fā)病率僅次于呼吸道感染［1－2］。根據(jù)病因，腹瀉分為感染性與非感染性?xún)深?lèi)；按病原學(xué)特點(diǎn)，又可分為病毒性、細(xì)菌性、寄生蟲(chóng)性、真菌性。本研究分析了兒童大便細(xì)菌培養(yǎng)和藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果，旨在了解兒童細(xì)菌性腹瀉主要病原菌及其藥敏特征。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本院兒童院區(qū)2011～2012年分離的腹瀉病原菌416株。

1.2 儀器與試劑 致病性大腸埃希菌診斷血清試劑盒、志賀菌診斷血清試劑盒、沙門(mén)菌分型血清試劑盒購(gòu)自寧波天潤(rùn)生物藥業(yè)有限公司；中國(guó)藍(lán)平板、麥康凱平板、SS平板、CV平板購(gòu)自廣州市迪景微生物科技有限公司；MH平板、藥敏紙片購(gòu)自英國(guó)Oxoid公司；空腸彎曲菌選擇培養(yǎng)基購(gòu)自英國(guó)Oxoid公司，按說(shuō)明書(shū)要求自行配置CCDA平板；轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基采用Cary－Blair運(yùn)送培養(yǎng)基；微需氧產(chǎn)氣袋、比濁儀和藥敏實(shí)驗(yàn)用生理鹽水購(gòu)自法國(guó)生物梅里埃公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)菌培養(yǎng)和鑒定 對(duì)所有送檢大便標(biāo)本按《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》進(jìn)行腸道病原菌分離培養(yǎng)和鑒定［3］。大便采集至Cary－Blair運(yùn)送培養(yǎng)基，在生物安全柜中接種至中國(guó)藍(lán)平板、麥康凱平板、SS平板和CCDA平板。CCDA平板置微需氧產(chǎn)氣袋中，42℃培養(yǎng)48～72 h，其他平板37℃培養(yǎng)過(guò)夜。根據(jù)平板上的菌落特征初步判斷是否為病原菌，再利用生化實(shí)驗(yàn)鑒別到屬。采用大腸埃希菌、志賀菌、沙門(mén)菌分型血清進(jìn)行致病性大腸埃希菌、志賀菌、沙門(mén)菌血清學(xué)分型?？漳c彎曲菌采用42℃生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)及氧化酶實(shí)驗(yàn)、觸酶實(shí)驗(yàn)、生化反應(yīng)鑒定。

1.2.2 藥敏實(shí)驗(yàn) 分離獲得的致病性大腸埃希菌、沙門(mén)菌、志賀菌按《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，根據(jù)美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（CLSI）M100－S20文件判斷藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果?？漳c彎曲菌和真菌未做藥敏實(shí)驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 病原菌病原學(xué)分布及血清學(xué)分型 416株小兒細(xì)菌性腹瀉病原菌病原學(xué)分布見(jiàn)表1，其中致病性大腸埃希菌和沙門(mén)菌屬血清型分布見(jiàn)表2～3。2株志賀菌血清學(xué)分型分別為宋內(nèi)和福氏志賀菌。

2.2 病原菌病區(qū)分布 致病性大腸埃希菌158株，其中門(mén)診50株、病房108株。沙門(mén)菌屬223株，其中門(mén)診103株、病房120株。空腸彎曲菌22株，其中門(mén)診6株、病房16株。檢出白色念珠菌7株，其中門(mén)診1株、病房6株。金黃色葡萄球菌1株，分離自皮膚科門(mén)診患兒。嗜水氣單胞菌3株，1株來(lái)自急診科門(mén)診患兒，2株來(lái)自消化科住院患兒。志賀菌2株，分別來(lái)自急診科門(mén)診和危重綜合病區(qū)患兒。門(mén)診患兒主要來(lái)自?xún)?nèi)科、消化科、新生兒科及急診科門(mén)診，住院患兒主要來(lái)自消化科、感染區(qū)、危重綜合病區(qū)及急診留觀(guān)病區(qū)。重癥監(jiān)護(hù)病房、內(nèi)分泌科、呼吸科、腎內(nèi)科、心臟內(nèi)科分離到少數(shù)致病性大腸埃希菌、沙門(mén)菌、空腸彎曲菌、白色念珠菌。

2.3 常見(jiàn)病原菌藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果 小兒細(xì)菌性腹瀉常見(jiàn)致瀉菌包括致病性大腸埃希菌、沙門(mén)菌、志賀菌，其藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果，見(jiàn)表4。

3 討 論

腹瀉是嬰幼兒常見(jiàn)病。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，全世界每年至少有1.3億5歲以下兒童發(fā)生腹瀉，其中350萬(wàn)患兒死亡［2］。小兒腹瀉發(fā)病年齡多在2歲以下，是導(dǎo)致小兒營(yíng)養(yǎng)不良的主要原因，治療不及時(shí)或不恰當(dāng)可導(dǎo)致患兒死亡。0～3歲嬰幼兒腹瀉的易感性因素:（1）胃腸道發(fā)育不夠成熟，酶活性較低，但營(yíng)養(yǎng)需要相對(duì)較高，胃腸道負(fù)擔(dān)重；（2）免疫功能不完善；（3）未接受母乳喂養(yǎng)；（4）正常腸道菌群的建立與生理演替；（5）神經(jīng)、內(nèi)分泌、循環(huán)系統(tǒng)及肝、腎功能發(fā)育未成熟，調(diào)節(jié)功能較差。

本院腹瀉患兒多為5歲以下兒童，以2歲以?xún)?nèi)嬰幼兒為主。嬰幼兒腹瀉腸內(nèi)感染的常見(jiàn)病原體包括輪狀病毒、產(chǎn)毒性大腸埃希菌、空腸彎曲桿菌、沙門(mén)菌屬、隱孢子蟲(chóng)等。本研究結(jié)果顯示，廣州地區(qū)兒童腹瀉主要病原菌為沙門(mén)菌屬，其次是致病性大腸埃希菌和空腸彎曲菌、白色念珠菌等，志賀菌較少，條件病原菌（如白色念珠菌和金黃色葡萄球菌等）引起的腹瀉更為少見(jiàn)，病原菌構(gòu)成與青島地區(qū)有差異［3］，可能與不同地區(qū)存在流行病原菌及治療用藥習(xí)慣不同有關(guān)。本院2011～2012年所有檢出腸道致瀉菌的患兒，大便多為黏液膿血便，少數(shù)已是遷延性腹瀉。416株腸道致瀉菌中，53.61%為沙門(mén)菌屬，37.98%為致病性大腸埃希菌，空腸彎曲菌約占5%，病原菌構(gòu)成與肯尼亞十分類(lèi)似［4］，而與西非、南亞等地區(qū)以志賀菌、產(chǎn)腸毒素性大腸埃希菌、隱孢子蟲(chóng)、腸致病性大腸埃希菌為主有所不同［5］。與成人相比，小兒致病性大腸埃希菌性腹瀉的病情相對(duì)較重，病程也較長(zhǎng)，主要分離的血清型由多到少依次為O125K70、O127aK63、O86K61、O44K74、O126K71、O128K67、O119K69、O114K90、O55K59等。沙門(mén)菌屬可致結(jié)腸炎，導(dǎo)致膿血腹瀉，鼠傷寒沙門(mén)氏菌幾乎占了所有沙門(mén)菌屬的70%，是廣州地區(qū)兒童細(xì)菌性腹瀉的重要病原菌。該血清型流行廣泛，傳染性強(qiáng)。鼠傷寒沙門(mén)氏菌所致腹瀉病情輕重不等，年齡越小，病情越重，并發(fā)癥越多，半數(shù)患兒病后排菌約2周，少數(shù)達(dá)2個(gè)月以上，多在6個(gè)月消失。在發(fā)展中國(guó)家，空腸彎曲菌腸炎以5歲以下兒童發(fā)病率最高，尤其是1歲以?xún)?nèi)的嬰幼兒，發(fā)病率隨年齡升高而下降，部分帶菌者無(wú)癥狀，但不斷排菌，排菌期長(zhǎng)達(dá)6～7周，甚至15個(gè)月之久，臨床上應(yīng)該注意隔離，及時(shí)切斷傳染源，避免交叉或二次感染。

3種常見(jiàn)腹瀉病原菌（致病性大腸埃希菌、沙門(mén)菌、志賀菌）藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，其對(duì)氨芐西林的耐藥率最高，為85.25%，其次為復(fù)方磺胺甲惡唑（54.28%），頭孢類(lèi)抗菌藥物，如頭孢噻肟、頭孢曲松和氯霉素耐藥率為40%～50%，頭孢他啶和氨曲南耐藥率為23%左右，耐藥率較低的藥物包括環(huán)丙沙星、頭孢吡肟、頭孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦，未檢出亞胺培南耐藥菌株。由此可見(jiàn)，廣州地區(qū)兒童腹瀉常見(jiàn)病原菌的耐藥性較強(qiáng)，對(duì)各種抗菌藥物的耐藥率均高于2013年青島地區(qū)的報(bào)道［3］。因此，對(duì)于疑似細(xì)菌性腹瀉患兒，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行大便細(xì)菌培養(yǎng)、病原菌分離和藥敏實(shí)驗(yàn)，根據(jù)藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果合理用藥，減少多藥耐藥菌株的產(chǎn)生。

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Composition and drug resistance of pathogenic bacteria causing infantile diarrhea in Guangzhou from 2011 to 2012＊

Huang Lianfen，Liu Haiying，Xie Yongqiang，Zhong Huamin，Zhou Zhenwen
（Laboratory Department，Guangzhou Children Hospital/Guangzhou Women and Children Medical Center，Guangzhou，Guangdong 510120，China）

ObjectiveTo explore the main pathogenic bacteria and antibiotic resistance patterns in children with bacterial diarrhea from Guangzhou region.MethodsRegular bacterial culture of stool samples from children with suspicious bacterial diarrhea was performed to isolate the pathogen during 2011 to 2012，followed by the analysis of its composition and serum type，ward distribution characteristics and drug resistance to 12 antimicrobacterial drugs.Results416 strains of pathogenic bacteria were isolated from diarrhea children during 2011－2012，in which salmonella，enteropathogenic E.coli，Campylobacter jejuni and Candida albicans isolates accounted for 53.61%，37.98%，5.29%and 1.68%respectively.Drug resistance rate of the main strains to 12 antimicrobial agents was 85.25%to ampicillin，54.28%to compound sulfamethoxazole，44.70%to cefotaxime，42.53%to ceftriaxone，40.66%to chloramphenicol，23.55%to ceftazidime，23.36%to aztreonam，14.88%to ciprofloxacin，8.07%to cefepime，7.99%to cefperazone/sulbactam，7.42%to piperacillin/tazobactam respectively，and no resistance to imipenem was detected.ConclusionThe pathogenic bacteria causing diarrhea mainly includes salmonella，pathogenic e.coli，campylobacter jejuni in children from guangzhou region，the top five sensitive antimicrobial reagents for the main strains includes imipenem，piperacillin/tazobactam，cefperazone/sulbactam，cefepime and ciprofloxacin.

diarrhea； pathogenic bacteria； drug resistance； infant

10.3969/j.issn.1673－4130.2015.10.013

A

1673－4130（2015）10－1351－03

2015－03－02）

廣東省廣州市衛(wèi)生局基金課題（2013A011040022，201102A213044）。 作者簡(jiǎn)介:黃蓮芬，女，主管技師，主要從事臨床微生物檢驗(yàn)研究。