任 睿 陳新國 李 磊 袁少雄 陳嬌嬌 張園園

(1 廣東省藥品檢驗(yàn)所，廣州，510000; 2 北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京，100102)

中藥研究

GC法測定羚黃寶兒丸中麝香酮、冰片、丁香酚的含量

任 睿1陳新國1李 磊2袁少雄2陳嬌嬌2張園園2

(1 廣東省藥品檢驗(yàn)所，廣州，510000; 2 北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京，100102)

目的:建立GC法同時(shí)測定羚黃寶兒丸中麝香酮、冰片、丁香酚3種成分的含量。方法:采用直接進(jìn)樣GC法，色譜柱為DB-WAX毛細(xì)管柱(30.0 m×0.25 mm×0.25 μm)，F(xiàn)ID檢測器，載氣為氮?dú)?，程序升溫，柱流量?.2 mL/min。結(jié)果:3種成分在均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，精密度、重復(fù)性RSD均<3%，加樣回收率在95%～106%。結(jié)論:直接進(jìn)樣GC法方法簡便、靈敏、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，適用于羚黃寶兒丸中麝香酮、冰片、丁香酚的含量測定。

羚黃寶兒丸;麝香酮;冰片;丁香酚;含量

羚黃寶兒丸是由麝香、黃連、羚羊角、甘草、冰片、人參、人工牛黃、豬膽膏、丁香九味藥物制成，為銀白色的包衣微丸;味苦、涼;功能主治為清熱熄風(fēng)，除痰定驚，開竅醒神。用于小兒發(fā)熱，驚哭夜啼，痰熱咳嗽，泄瀉，脾胃虛弱及消化不良等癥。由于該藥組方合理，療效確切，不良反應(yīng)小，深受廣大患者的歡迎，現(xiàn)已被收載為非處方藥物。羚黃寶兒丸的標(biāo)準(zhǔn)收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》[1]，無含量測定項(xiàng)目。鐘氏[2]等建立了HPLC法測定其中鹽酸小檗堿的含量，此外未見其他有效成分的含量測定方法用于羚黃寶兒丸的質(zhì)量控制。麝香是羚黃寶兒丸的主藥之一，目前藥典規(guī)定以麝香酮作為麝香質(zhì)量控制指標(biāo)，麝香藥材與制劑中麝香酮的含量測定方法主要有氣質(zhì)聯(lián)用法(GC-MS)、氣相色譜法(GC)、高效液相色譜法(HPLC)和薄層掃描法(TLCS)等[3]。研究表明，冰片具有抗菌、抗炎、止痛的功效，目前中成藥多使用合成冰片，其除含有龍腦外，還含有異龍腦，目前已建立了GC和GC-MS等檢測方法[4-7]。丁香酚是其丁香揮發(fā)油中主要成分，其含量測定多采用HPLC法、熒光分析法、毛細(xì)管氣相色譜法[8-10]等。本研究首次采用GC法對(duì)羚黃寶兒丸中麝香酮、冰片、丁香酚的含量進(jìn)行測定，方法簡便、靈敏、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，為羚黃寶兒丸的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 GC-2010氣相色譜儀(日本島津)，包括GC-solution工作站、FID檢測器;SPH-200氫氣發(fā)生器(北京中惠普分析技術(shù)研究所);LGA-2000空氣發(fā)生器(上海安譜科學(xué)儀器有限公司);高純氮?dú)?廣州耀升氣體有限公司);Academic A10超純水系統(tǒng)(美國Millipore);CPA2245電子天平(德國Sartorius)。

1.2 試藥 冰片對(duì)照品(批號(hào)110743-200905)、丁香酚對(duì)照品(批號(hào)110725-200711)、麝香酮對(duì)照品(批號(hào)110719-200512)購于中國藥品生物制品檢定所;羚黃寶兒丸(批號(hào):N00001，T06005，T06009)由廣州敬修堂(藥業(yè))股份有限公司提供;正己烷、無水乙醇為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:DB-WAX毛細(xì)管柱(30.0 m×0.25 mm×0.25 μm);檢測器:FID;柱溫采用程序升溫，初始溫度為120 ℃，維持3 min，再以4 ℃/min升溫至140 ℃，最后以10 ℃/min升溫至210 ℃，維持6 min;進(jìn)樣口溫度為210 ℃;檢測器溫度為250 ℃;載氣為氮?dú)?柱流量為1.2 mL/min;分流比為50∶1;進(jìn)樣量1 μL。在此色譜條件下龍腦、異龍腦、丁香酚、麝香酮與其鄰近的雜質(zhì)峰可達(dá)到基線分離，分離度均大于3，理論板數(shù)均大于80 000。色譜圖如圖1所示。

圖1 對(duì)照品(A)及羚黃寶兒丸供試品(B)色譜圖

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照溶液的制備 分別精密稱取冰片、丁香酚、麝香酮對(duì)照品50、20、2 mg至25 mL量瓶中，加無水乙醇溶解并定容，搖勻，制得冰片、丁香酚、麝香酮濃度分別為2.0、0.8、0.08 mg/mL的混合對(duì)照品貯備液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密稱取羚黃寶兒丸內(nèi)容物約1 g至圓底燒瓶中，加入純凈水200 mL，在揮發(fā)油測定管中加入適量的純凈水和正己烷7 mL，加熱回流3 h，冷卻至室溫，取正己烷層至10 mL量瓶中并以正己烷定容。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性關(guān)系 取“2.2.1”項(xiàng)下制備的混合對(duì)照品溶液，用無水乙醇稀釋為6個(gè)濃度的系列混合對(duì)照品溶液，在“2.1”項(xiàng)下色譜條件下分別進(jìn)樣1 μL，測量峰面積值。以峰面積值Y與對(duì)照品濃度X(mg/mL)進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見表1。

表1 各成分的回歸方程與線性范圍

2.3.2 精密度試驗(yàn) 取“3.3.1”項(xiàng)下制備的冰片、丁香酚、麝香酮濃度分別為0.5、0.2、0.02 mg/mL的對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄各成分峰面積，RSD分別為0.85%、1.13%、1.78%。

2.3.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批羚黃寶兒丸樣品(批號(hào):N00001)，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣。結(jié)果冰片、丁香酚、麝香酮的平均含量分別為5.88、2.46、0.32 mg/g，RSD分別為1.59%、1.98%、1.89%，即本方法的重復(fù)性較好。

表2 加樣回收率測定結(jié)果

2.3.4 回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的羚黃寶兒丸樣品(批號(hào):N00001)6份，每份0.5 g，分別精密加入已知量的冰片、丁香酚、麝香酮對(duì)照品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液并進(jìn)樣，測定各成分的含量，計(jì)算回收率，結(jié)果如表2所示。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取羚黃寶兒丸內(nèi)容物，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，放置0、2、4、6、8、12、18、24 h后分別進(jìn)樣，測得冰片、丁香酚、麝香酮的平均含量分別為6.67、2.74、0.34 mg/g，RSD分別為2.09%、1.84%、0.84%，結(jié)果表明，供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 樣品含量測定 按“2.2.2”項(xiàng)下方法對(duì)3個(gè)不同批號(hào)的羚黃寶兒丸樣品進(jìn)行處理，分析測定，結(jié)果見表3。

表3 樣品含量測定結(jié)果(n=2)

3 討論

3.1 提取條件的選擇

3.1.1 提取方法的選擇 本研究曾采用丙酮為溶劑，超聲處理15 min，濾過，濾液作為供試品溶液，由于冰片、丁香酚易揮發(fā)，測定結(jié)果存在較大偏差，難以控制。根據(jù)指標(biāo)成分具有揮發(fā)性的特點(diǎn)，采用揮發(fā)油提取器進(jìn)行提取，重復(fù)性好，RSD值符合藥典規(guī)定。

3.1.2 提取溶劑的選擇 根據(jù)冰片、丁香酚、麝香酮幾乎不溶于水，可溶于乙醇、乙酸乙酯、丙酮、苯、正己烷等有機(jī)溶劑中的性質(zhì)，從上述溶劑中優(yōu)選提取溶劑。無水乙醇、丙酮在揮發(fā)油提取器中與水層無明顯分層，乙酸乙酯易乳化變渾濁，因此誤差較大。正己烷與水分層清晰。因此綜合毒性、準(zhǔn)確度等多種因素，選擇正己烷為本實(shí)驗(yàn)提取溶劑。

3.2 色譜條件的選擇

3.2.1 色譜柱的選擇 分別考察了極性柱，中性柱，非極性柱，結(jié)果表明，極性柱的分離效果較好。

3.2.2 檢測溫度的選擇 根據(jù)文獻(xiàn)[11-14]，考察了兩種梯度升溫程序。程序1:初始溫度為120 ℃，維持3 min，再以4 ℃/min升溫至160 ℃，最后以20 ℃/min升溫至210 ℃，維持3 min;進(jìn)樣口溫度為210 ℃;檢測器溫度為250 ℃。程序2:初始溫度為120 ℃，維持3 min，再以4 ℃/min升溫至140 ℃，最后以10 ℃/min升溫至210 ℃，維持6 min;進(jìn)樣口溫度為210 ℃;檢測器溫度為250 ℃。結(jié)果表明，程序1各成分出峰時(shí)基線不平，而程序2基線相對(duì)較平，分離度好。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)對(duì)羚黃寶兒丸進(jìn)行加熱回流提取后，采用GC法測定冰片、丁香酚、麝香酮的含量，方法重復(fù)性好、靈敏度高、定量準(zhǔn)確、分離度符合要求，可作為羚黃寶兒丸質(zhì)量控制方法之一，為羚黃寶兒丸的質(zhì)量控制和進(jìn)一步開發(fā)提供參考依據(jù)。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)[S].第14冊.中藥成方制劑，1997:160-161.

[2]鐘文山.HPLC法測定羚黃寶兒丸中鹽酸小檗堿含量[J].今日藥學(xué)，2012，22(2):100-102.

[3]孫蓉，楊倩，尹建偉，等.麝香及替代品藥理作用和含量測定方法研究進(jìn)展[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2011，22(3):709-710.

[4]崔田.氣相色譜法測定小兒咽扁顆粒中冰片的含量[J].海峽藥學(xué)，2009，21(10):58-59.

[5]唐杰，陳玉誼.氣相色譜法測定市售復(fù)方丹參片中冰片的含量[J].海峽藥學(xué)，2008，20(8):62-63.

[6]Tompsett，PB.Desiccation and storage studies on dipterocarp seeds[J].Annals ofApplied Biology，1987，110：371-379.

[7]謝周濤，胡進(jìn).氣相色譜法測定復(fù)方冰片搽劑中冰片、薄荷腦和樟腦的含量[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2008，28(23):2063-2064.

[8]余小平.RP2 HPLC法測定中藥丁香中丁香酚的含量[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2009，27(4):880-881.

[9]周曉霞.基于熒光分析法的丁香酚提取工藝[J].衡水學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，13(4):43-44.

[10]盧智玲，劉華棟.毛細(xì)管氣相色譜法測定克痢痧膠囊中丁香酚含量[J].中國藥業(yè)，2012，21(4):32-33.

[11]楊淑艷，李兆東.氣相色譜法測定麝香祛痛凝膠的4種有效成分的含量[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2006，6(11):89-90.

[12]高文分，袁文娟，王梅.GC法同時(shí)測定醒腦靜注射液中麝香酮、龍腦的含量及其有關(guān)物質(zhì)[J].中國藥師，2011，14(11):1607-1608.

[13]陳在敏.氣相色譜法檢測麝珠明目滴眼液中冰片和麝香酮的含量[J].海峽藥學(xué)，2011，23(3):54-56.

[14]盧智玲，劉華棟.毛細(xì)管氣相色譜法測定克痢痧膠囊中丁香酚含量[J].中國藥業(yè)，2012，21(4):32-33.

(2014-04-15收稿 責(zé)任編輯：王明)

Determination of Contents of Muscon,Borneol and Eugenol in Linghuangbaoer Pellets by GC Method

Ren Rui1,Chen Xinguo1,Li Lei2,Yuan Shaoxiong2,Chen Jiaojiao2,Zhang Yuanyuan2

(1GuangdongInstituteforDrugControl,Guangzhou510000,China; 2SchoolofChineseMateriaMedica,BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100102,China)

Objective:To determine the contents of Muscon,Borneo and Eugenol in Linghuangbaoer Pellets by GC method.Methods:The GC system consisted of DB-WAX(30.0 m×0.25 mm×0.25 μm)capillary column.Programmed temperature was set from 120 ℃ to 210 ℃ and the detector temperature was 250 ℃.The detector was FID using high pure helium as carrier gas with the flow rate of 1.2 mL/min.Results:Borneol,Eugenol and Muscon were separated with a good linearity in the sample size ranges of 0.125～2 mg/mL for Borneol,0.05～0.8 mg/mL for Eugenol,and 0.005～0.08 mg/mL for Muscon.The average recoveries for Borneol,Eugenol and Muscon was 105.51% (RSD=1.44%),95.79% (RSD=0.29%),99.94% (RSD=0.66%),respectively.Conclusion:The GC method is simple,feasible and reproducible.It can be used for the quality control of Linghuangbaoer Pellets.

GC; Linghuangbaoer Pellets; Muscon; Borneol; Eugenol

張園園，女，副教授，中藥藥物代謝動(dòng)力學(xué)，Tel:(010)84738651，E-mail:choenen@163.com

R284.2

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2015.03.030