王 星, 張 娜, 趙 樺

(1. 陜西理工學(xué)院 生物科學(xué)與工程學(xué)院， 陜西 漢中 723000; 2.漢中職業(yè)技術(shù)學(xué)院, 陜西 漢中 723000)

不同產(chǎn)地盤龍七中巖白菜素含量的分析研究

王 星1, 張 娜2, 趙 樺1

(1. 陜西理工學(xué)院 生物科學(xué)與工程學(xué)院， 陜西 漢中 723000; 2.漢中職業(yè)技術(shù)學(xué)院, 陜西 漢中 723000)

利用高效液相法測定14個不同產(chǎn)地盤龍七中巖白菜素的含量。色譜條件：色譜柱為Inertsil ODS-3C18(4.6 mm×150 mm，5μm)柱，乙腈-0.2%磷酸溶液(9∶91)為流動相，流速1.0mL/min，檢測波長275nm，柱溫30 ℃。巖白菜素在15 ～75μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，Y=14 942.0X-428.6 (R2=0.999 8)，平均加樣回收率100.58%，RSD為1.77%(n=6)。分析結(jié)果表明，不同產(chǎn)地盤龍七中巖白菜素的含量不同，其含量隨產(chǎn)地的不同而顯示出一定的差異，其變化范圍在14.68～ 70.19 mg/g，含量較為豐富。本研究建立盤龍七藥材中巖白菜素含量測定方法，并分析檢測了產(chǎn)自陜西、甘肅、四川三省14個產(chǎn)地盤龍七中巖白菜素的含量，其結(jié)果可為盤龍七藥材的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

盤龍七； 秦嶺巖白菜； 巖白菜素； 含量分析

盤龍七為虎耳草科(Saxifragaceae)巖白菜屬植物秦嶺巖白菜(BergeniascopulosaT．P．Wang)的根莖，多年生草本，分布于陜西、四川及甘肅東南部[1]，為我國特有種。盤龍七是陜西民間常用藥，澀、味苦、平；具有補(bǔ)脾健胃，收澀固腸，除濕利水，活血的功效；主治急慢性腸胃炎、浮腫、崩漏、白帶、淋癥、痢疾、黃水瘡、禿瘡、疥癬等[2]。巖白菜素(Bergenin)，又稱巖白菜內(nèi)脂、矮茶素、虎耳草素等，屬異香豆素類化合物。巖白菜素為巖白菜等藥用植物中的有效成分，具有良好的鎮(zhèn)咳和治療胃腸道疾病的功效，如胃潰瘍、腹瀉及便秘，此外還具有良好的抗炎、抗心律失常、抗病毒、護(hù)肝等作用[3-5]。

馮永輝等[6-7]曾對陜西太白山產(chǎn)盤龍七中巖白菜素含量進(jìn)行了研究報道，但不同產(chǎn)地盤龍七中的巖白菜素含量的變化情況尚無研究分析報道。為深入了解盤龍七藥材有效成分含量變化，便于藥材質(zhì)量控制，作者對產(chǎn)自陜西、甘肅、四川三省14個產(chǎn)地盤龍七藥材中巖白菜素含量進(jìn)行了分析研究，為盤龍七藥材資源的開發(fā)利用以及藥材質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

Waters e2695高效液相色譜儀(包括四元泵，真空脫氣機(jī)，2489紫外檢測器)，Empower色譜工作站；U3900H紫外分光光度計，日本日立；AB204-S電子分析天平，瑞士，Mettler Toledo公司；SB-5200DR型數(shù)控超聲波清洗機(jī)，寧波新芝生物科技股份有限公司；UPH-II-10T優(yōu)普超純水機(jī)，成都優(yōu)普凈化科技有限公司。

14個不同產(chǎn)地實(shí)驗(yàn)用藥材分別購自陜西漢中等盤龍七產(chǎn)地藥材市場，經(jīng)陜西理工學(xué)院植物學(xué)教授趙樺鑒定為秦嶺巖白菜干燥根莖，即盤龍七藥材。

巖白菜素對照品購自上海同田生物技術(shù)股份有限公司，批號(14042121)。高效液相分析流動相用乙腈為色譜純，樣品制備用甲醇為分析純，磷酸為分析純，水為超純水。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為Inertsil ODS-3C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)柱，以乙腈-0.2%磷酸溶液(9∶91)為流動相，流速1.0mL/min，檢測波長275nm，柱溫30 ℃。

2.2 對照品溶液制備

精密稱取巖白菜素標(biāo)準(zhǔn)品7.5mg，甲醇溶解并定容至100mL容量瓶中，配制成75.0μg/mL的對照品溶液(母液)。放于4 ℃冰箱中，備用。

2.3 供試品溶液制備

半個上午過去，恐懼感慢慢消逝，我甚至感到很刺激，很好玩。中間幾乎沒有休息，小解時，他們背對著巷子里的行人，朝著新樓 尿。我是學(xué)生，講文明，不好意思站在腳手架上撒野，我撤下來。巷子里有人來往，我抹不開這個臉，向我們的住所飛奔。腳手架上傳來唏噓聲，他們一定在說我“懶驢上磨屎尿多”。我把他們的聲音扔在身后。

取盤龍七藥材，60 ℃下烘干，粉碎過60目樣品篩。稱取約0.2g，精密稱定，置于100mL錐形瓶中，加50mL甲醇，60 ℃下超聲萃取30min。超聲萃取條件為：功率240W，頻率40kHz。提取液冷卻后抽濾，將濾液定容至50mL容量瓶中備用。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系的考察

準(zhǔn)確量取巖白菜素標(biāo)準(zhǔn)品母液2、4、6、8mL，分別用甲醇溶解并定容至10mL的容量瓶中，配制成濃度分別為15.0、30.0、45.0、60.0μg/mL的巖白菜素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，連同巖白菜素標(biāo)準(zhǔn)品母液共5種不同濃度的溶液分別進(jìn)樣，每個濃度供試品溶液各進(jìn)樣3次，每次10μL，進(jìn)樣前用0.45μm的濾膜過濾，測定峰面積。以巖白菜素對照品溶液濃度為橫坐標(biāo)，吸收峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得巖白菜素回歸方程為Y=14 942.0X-428.6，R2=0.999 8。試驗(yàn)結(jié)果表明，在15.0～75.0μg/mL范圍內(nèi)巖白菜素溶液濃度與其光吸收峰面積呈良好的線性關(guān)系，巖白菜素標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1，標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖見圖2。

圖1 巖白菜素標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.4.2 精密度試驗(yàn)

用巖白菜素對照品溶液重復(fù)進(jìn)樣5次，每次10μL，其峰面積RSD為0.34%。

2.4.3 重復(fù)性試驗(yàn)

稱取盤龍七樣品5份，每份約0.2g，精密稱定。按照2.3項(xiàng)下方法制備供試液，按照2.1項(xiàng)下條件測定，每份進(jìn)樣3次，每次10μL。5份樣品中巖白菜素的含量分別為：14.485 8、14.655 2、14.551 1、14.794 1、14.901 9mg/g，平均含量為14.677 6mg/g，RSD為1.17%。說明本文方法有較好的重現(xiàn)性。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

用某一份盤龍七樣品制備供試液，供試液分別于提取后0、1、2、4、6、8h進(jìn)樣。得巖白菜素溶液光吸收峰面積的RSD為0.89%。說明盤龍七中巖白菜素供試液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.5 加樣回收試驗(yàn)

精密稱取盤龍七樣品6份，各約0.1g。向6份樣品中分別加入1.586 0mg巖白菜素對照品，按本文方法制備供試液和測定巖白菜素含量，并計算回收率。結(jié)果見表1。

2.5 不同產(chǎn)地盤龍七樣品中巖白菜素含量測定

稱取14個不同產(chǎn)地盤龍七樣品，每個產(chǎn)地樣品各5份，每份0.2g，精密稱定。按照2.3項(xiàng)下方法制備供試液，按照2.1項(xiàng)下條件測定，每份進(jìn)樣3次，每次10μL，測得14個不同產(chǎn)地盤龍七中巖白菜素含量在14.68～70.19mg/g之間。樣品含量測定色譜圖見圖3，其巖白菜素含量和RSD見表2。

表1 巖白菜素加樣回收率實(shí)驗(yàn)(n=6)

圖2 巖白菜素對照品HPLC色譜圖 圖3 盤龍七藥材供試液中巖白菜素HPLC色譜圖

產(chǎn)地含量/(mg·g-1)RSD/%產(chǎn)地含量/(mg·g-1)RSD/%產(chǎn)地含量/(mg·g-1)RSD/%文縣70.191.68宕昌縣68.381.85太白縣60.711.81眉縣59.831.58禮縣59.611.73鳳縣58.681.86青川縣53.551.79洋縣49.721.71九寨溝縣47.511.77戶縣45.771.63洛南縣35.121.59留壩縣37.101.37勉縣23.121.55鎮(zhèn)安縣14.681.17

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)曾比較過流動相不同比例對分析結(jié)果的影響：乙腈-0.2% 磷酸溶液 (20∶80、15∶85、13∶87、11∶89、10∶90、9∶91)。當(dāng)流動相比例為9∶91(乙腈-0.2%磷酸溶液)時，其出峰質(zhì)量和出峰時間相對于其它流動相配比為最佳。所以選擇9∶91(乙腈-0.2%磷酸溶液)為該實(shí)驗(yàn)的流動相比例。在穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)中，供試液在8h之內(nèi)測定，RSD為0.89%，而在12h測定時，RSD為6.5%，誤差較大，故供試液在8h之內(nèi)檢測是穩(wěn)定的。

有關(guān)HPLC法測定巖白菜屬植物中巖白菜素含量的報道較多[6-12]，但關(guān)于不同產(chǎn)地盤龍七中巖白菜素含量的測定尚未見報道。本研究以陜西、甘肅、四川三省14個不同產(chǎn)地盤龍七為材料，研究了其巖白菜素的含量。分析檢測結(jié)果表明，所檢測的14個產(chǎn)地盤龍七中巖白菜素的含量在14.68～70.19mg/g之間，其中甘肅省隴南市文縣產(chǎn)的秦嶺巖白菜中巖白菜素含量為70.19mg/g，為所分析材料中巖白菜素含量最高的樣品。

據(jù)文獻(xiàn)報道，不同生長地區(qū)巖白菜屬植物根莖中巖白菜素的含量變化較大，一般在1.80%～9.77%之間，其中產(chǎn)自云南的巖白菜中含量較高[8-10]。厚葉巖白菜根莖中巖白菜素的含量在8.65%～9.58%，含量較高[10-11]。舌巖白菜、峨眉巖白菜等的含量較低，一般含量在3%以下[12-13]。在虎耳草科，除巖白菜屬植物外，虎耳草屬植物中巖白菜素含量在0.11%～0.51%之間[14]。鬼燈擎屬植物根莖中巖白菜素含量最高可達(dá)10.05%，最低為1.31%[15-17]。本文所報道的14個產(chǎn)區(qū)秦嶺巖白菜有7個產(chǎn)區(qū)的巖白菜素含量在5.0%以上，最高可達(dá)7.0%。與現(xiàn)有文獻(xiàn)報道相比，秦嶺巖白菜中巖白菜素的含量較高，可作為巖白菜素的來源之一。

實(shí)驗(yàn)建立了高效液相色譜法測定盤龍七藥材中巖白菜素含量的方法，分析檢測了產(chǎn)自陜西、甘肅、四川三省14個產(chǎn)地盤龍七藥材中巖白菜素的含量，研究結(jié)果可為盤龍七藥材質(zhì)量評價提供科學(xué)依據(jù)。

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[責(zé)任編輯：李 莉]

Determination of bergenin in Rhizoma Bergeniae Scopulosae from different areas

WANG Xing1, ZHANG Na2, ZHAO Hua1

(1.School of Bioscience and Engineering, Shaanxi University of Technology, Hanzhong 723000, China;2.Hanzhong Vocational and Technical College, Hanzhong 723000, China)

The contents of bergenin in Rhizoma Bergeniae Scopulosae from different areas were determined by using HPLC. The chromatographic separation was carried out using Inertsil ODS-3 C18column(4.6 mm×150 mm，5 μm), the mobile phase was acetonitrile : 0.2% phosphoric acid (9∶91),thedetectionwavelengthwassetat275nm,thetemperaturewas30 ℃,andtheflowratewas1.0mL/min.Thecalibrationcurvewaslinearintherangeof15～75μg/mLandtheregressionequationforbergeninwasY=14 942.0X-428.6 (R2=0.999 8),theaveragerecoverywas100.58%withRSDof1.77%(n=6).Theresultsshowedthattherearesomedifferentcesinthecontentofbergeninamongdifferentareas,andthatthecontentsofbergeninwererangesbetweenfrom14.68～70.19mg/g.Thismethodissimple,efficientandaccurate,whichcanbeusedfortheanalysisofbergenininRhizomaBergeniaeScopulosae.

Rhizoma Bergeniae Scopulosae;BergeniascopulosaT. P. Wang; bergenin; contents analysis

1673-2944(2015)02-0062-04

2014-09-28

陜西理工學(xué)院研究生創(chuàng)新基金資助項(xiàng)目(SLGYCX1312)

王星(1987—)，男，陜西省商洛市人，陜西理工學(xué)院碩士研究生，主要研究方向?yàn)橹参镔Y源開發(fā)利用；[通信作者]趙樺(1957—)，男，陜西省漢中市人，陜西理工學(xué)院教授，碩士生導(dǎo)師，碩士，主要研究方向?yàn)橹参镔Y源開發(fā)利用。

Q946.91+9

A