德慶卓嘎 西藏自治區(qū)農(nóng)科院畜牧獸醫(yī)研究所 850009

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)羊只

本試驗(yàn)采用內(nèi)蒙古無(wú)角多塞特羊冷凍胚胎、林周半細(xì)毛羊以及當(dāng)?shù)匮蜃鳛樵囼?yàn)材料。共選擇64 只供、受體母羊，供體羊和受體羊選擇無(wú)繁殖機(jī)能疾病、非疫區(qū)并無(wú)傳染疾病史、健康、膘情在7 成以上、年齡在2.5~5 歲之間的經(jīng)產(chǎn)澎波半細(xì)毛羊和當(dāng)?shù)啬秆?；從林周半?xì)毛羊種羊場(chǎng)借用2 只澎波半細(xì)毛羊種公羊，為供、受體羊試情與供體羊人工授精、采胚用。

1.2 試驗(yàn)藥物

CIDR（孕酮栓）、FSH（促卵泡生長(zhǎng)激素）、PMSG（孕馬血清）、LH(促黃體生成激素)、PBS（杜氏磷酸緩沖液）、PG(氯前列烯醇)、75%酒精、5%碘酊、新潔爾滅、生理鹽水、雙蒸水、青霉素、鏈霉素、消炎粉、沖卵液和培養(yǎng)液。

1.3 供受體羊同期發(fā)情處理

對(duì)選出的64 只供受體羊進(jìn)行陰道埋置海綿栓同期化發(fā)情處理。將海綿栓送入陰道中，使細(xì)繩暴露在陰門外，10 天后拉住細(xì)繩將海綿栓取出，并注射PMSG（孕馬血清）2.5mL/只，同時(shí)打不同的耳標(biāo)，做好記錄。

1.4 供體羊超數(shù)排卵處理

供體羊的超數(shù)排卵處理在情期的第8～13 天進(jìn)行，對(duì)選出的10 只供體羊進(jìn)行CIDR（孕酮栓）陰道埋置，注射FSH（促卵泡生長(zhǎng)激素），每天肌注2次，連續(xù)注射4 天。第一次肌注2mL，以后每天上、下午各注射1.5mL。注射后觀察發(fā)情，采用試情公羊發(fā)情確認(rèn)，觀察時(shí)間為每天早、晚各1 次。

1.5 胚胎的采集與移植

在供體羊輸精的第3 天，采取腹部手術(shù)法采集胚胎，胚胎采集與移植在配種后第3 天進(jìn)行，胚胎發(fā)育至桑葚胚至囊胚階段進(jìn)行。當(dāng)確認(rèn)所有胚胎已進(jìn)入子宮角內(nèi)，子宮角基部用止血鉗穿孔，然后插入沖胚管。根據(jù)子宮角的粗細(xì)，由充氣管注入5~10mL 空氣，使氣囊封阻子宮腔。然后由進(jìn)液孔注入沖胚液30~50mL，再由此孔導(dǎo)出。也可對(duì)子宮角進(jìn)行上行或下行法沖洗，兩側(cè)子宮角沖卵完成后從氣球放出一部分空氣，拔出沖卵管。在子宮角基部扎孔，將沖卵管插入，用注射器注入氣體5~10mL，使氣囊在子宮角基部固定。然后在子宮角尖端插入套管針。將沖卵液由套管針注入，從沖卵管中流出，用平皿接收沖卵液，每側(cè)沖卵液用量20~30mL。沖完后氣囊放氣，沖卵管插入另一側(cè)，用同樣方法沖卵。

2 結(jié)果

2.1 超數(shù)排卵結(jié)果

同期化發(fā)情處理母羊64 只，其中供體羊10只，注射FSH 進(jìn)行超數(shù)排卵處理。發(fā)情的4 只供體羊通過(guò)腹腔鏡人工輸精后采用輸卵管采胚和子宮采胚兩種方法采集胚胎，共采集胚胎23 枚，其中受精卵14 枚，受胎率60.87%。

2.2 受體羊發(fā)情結(jié)果

同期化發(fā)情處理的54 只受體羊中，凍胚移植34 只，鮮胚移植20 只；凍胚移植34 只中發(fā)情母羊有27 只，鮮胚移植20 只中發(fā)情母羊有7 只，共計(jì)34 只受體羊發(fā)情，發(fā)情率達(dá)到62.96%。

2.3 人工授精和自然配種結(jié)果

本次試驗(yàn)采取腹腔內(nèi)窺鏡子宮角輸精法，采用微創(chuàng)的外科手術(shù)，將母畜進(jìn)行仰臥保定，不給以麻醉劑，在嵌部插入鏡頭，通過(guò)向腹腔內(nèi)充氣觀察空間，借助于腹腔鏡將精液直接送入母羊排卵一側(cè)子宮角，從而大大提高了人工授精的受胎率。

2.4 胚胎移植結(jié)果

同期化發(fā)情處理的54 只受體羊中，凍胚34只，鮮胚20 只；受體羊共產(chǎn)羔11 只，其中產(chǎn)鮮胚移植羔羊3 只、產(chǎn)凍胚移植羔羊8 只，凍胚移植母羊中1 只所產(chǎn)雙羔因難產(chǎn)死亡。鮮胚和凍胚移植的受胎率分別達(dá)到42.86%和33.33%

（1）凍胚移植結(jié)果。冷凍胚胎的采集、冷凍與保存工作在內(nèi)蒙古農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院畜牧所進(jìn)行。采集無(wú)角多塞特肉用綿羊胚胎60 枚，并為本試驗(yàn)冷凍保存了60 枚胚胎，其中A 級(jí)40 枚、B 級(jí)20 枚。凍胚移植34 只，產(chǎn)羔8 只，受胎率為33.33%，接近凍胚移植受胎率35%的目標(biāo)。雙胚受胎母羊1 只，雙胚率為2.94%。

（2）鮮胚移植結(jié)果。鮮胚移植20 只，產(chǎn)羔3 只，受胎率為42.86%，接近鮮胚移植受胎率45%的目標(biāo)。

3 討論

本試驗(yàn)證明，在西藏地區(qū)對(duì)藏系綿羊進(jìn)行胚胎移植是可行的，對(duì)供體采用同期發(fā)情配種和超數(shù)排卵技術(shù),受胎率達(dá)到42.86%，略低于國(guó)內(nèi)報(bào)道45%的水平。這可能與供體羊沖卵時(shí)機(jī)、海拔高度等有關(guān),也可能與胚胎移植技術(shù)操作性強(qiáng)、難度大、技術(shù)人員尚未熟練掌握有關(guān)，尚待進(jìn)一步研究。

[1]王金文,張果平,等.杜泊綿羊超數(shù)排卵與胚胎移植試驗(yàn)〔J〕.中國(guó)草食動(dòng)物,2006,1:14～15.

[2]全國(guó)高等農(nóng)業(yè)院校教材《家畜繁殖學(xué)》第四版.中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社.

[3]郭鵬程.羊胚胎移植同期發(fā)情和超數(shù)排卵應(yīng)用技術(shù)的研究[D].東北農(nóng)業(yè)大學(xué),2007.